硫酸氫氯吡格雷有機殘留溶劑的測定分析方法驗證研究

閆優(yōu)優(yōu) 梁 毅

（中國藥科大學，江蘇南京211198）

1 測定方法的初步選擇

1.1 藥品結構

硫酸氫氯吡格雷的藥品結構如圖1所示。

圖1 硫酸氫氯吡格雷的藥品結構

硫酸氫氯吡格雷的藥品溶解性：易溶于水和甲醇，幾乎不溶于環(huán)己烷，以此可以初步確定使用水、DMF作為溶劑均可。稱取供試品適量，分別加入水、DMF進行溶解度試驗。

1.2 殘留溶劑種類確定

硫酸氫氯吡格雷的反應流程如圖2所示。

圖2 硫酸氫氯吡格雷的反應流程

本品合成工藝中使用了甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯這5種有機溶劑，根據ICHQ3C（R5）殘留溶劑指導原則，確定甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯5種有機溶劑的殘留限度依次為甲醇不得過0.3%，丙酮不得過0.5%，二氯甲烷不得過0.06%，乙酸乙酯不得過0.5%，甲苯不得過0.089%。甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯與甲苯5種有機溶劑的沸點分別為64.5℃、56.12℃、39.75℃、77.112℃和110.63℃。5種有機溶劑沸點和極性差異較大，故決定采用程序升溫法進行測定。

1.3 建立初步的測定方法

參照BP2012AppendixⅧL殘留溶劑法和多次試驗結果，最終確定初步測定方法。

1.3.1 色譜條件

（1）色譜柱為熔融石英毛細管柱DB-624：30m×0.53mm×3.0μm。（2）載氣：氮氣（N2），柱流速為4.6mL/min（恒流模式）。（3）分流比：20:1。（4）柱溫：先在50 ℃維持5min，再以每分鐘15℃的升溫速率升至180℃，維持5min。（5）進樣口溫度：150℃。（6）檢測器溫度：250℃。（7）氫氣：30mL/min。（8）空氣：400mL/min。（9）尾吹氣：25mL/min。

1.3.2 頂空進樣條件

（1）恒溫爐溫度：65℃。（2）平衡時間：25min。（3）進樣量：1mL。（4）溶劑：DMF。

2 測定方法的考察與優(yōu)化

2.1 系統(tǒng)適應性結果

對照溶液：精密稱取120.08mg甲醇、200.04mg丙酮、24.04mg二氯甲烷、200.02mg乙酸乙酯和35.62mg甲苯于100mL容量瓶中，加入DMF稀釋至100mL，再移取該溶液10.0mL，DMF稀釋至100mL。按照上述色譜條件進樣分析，結果如圖3所示。

圖3對照溶液甲醇峰的理論塔板數為20100；甲醇峰與丙酮峰之間的分離度為13.2；丙酮峰與二氯甲烷峰之間的分離度為5.4；二氯甲烷峰與乙酸乙酯峰之間的分離度為16.9；乙酸乙酯峰與甲苯峰之間的分離度為31.0；甲苯峰與DMF峰之間的分離度為14.2。理論板數均大于5000，各相鄰峰之間分離度均大于1.5，符合要求。

圖3 進樣分析結果

2.2 供試品溶液的測定及優(yōu)化

供試品溶液：稱取200.24mg硫酸氫氯吡格雷樣品于20mL頂空瓶中，加入5.0mL與第2.1節(jié)中相等的對照溶液，密封。按照上述色譜條件進樣分析，結果如圖4所示。

圖4 進樣分析結果

圖4供試品溶液測試結果顯示供試品溶液中甲醇峰面積僅為3.55%，遠小于對照溶液中甲醇峰面積32.64%，回收率遠遠小于100%。推斷是因為在此色譜條件下供試品溶液中甲醇與樣品作用，而導致無法準確測定甲醇的殘留量。故決定對溶劑進行調整。

2.3 確定最佳測定方法

溶劑的選擇：DMF-水（1:1）、DMF-0.05MNaOH（1:1）、DMF-0.05MHCl（1:1）。

DMF-水（1:1）：供試品溶解性差，故排除該溶劑。

DMF-0.05MNaOH（1:1）：由于硫酸氫氯吡格雷結構和殘留有機溶劑乙酸乙酯中有酯鍵的存在，在堿性條件下易水解，故排除該溶劑。

DMF-0.05MHCl（1:1）：供試品溶解性好，且測試結果未發(fā)現(xiàn)硫酸氫氯吡格雷結構和殘留有機溶劑乙酸乙酯中酯鍵水解，測試結果如圖5、圖6所示。

圖5 測試結果

圖6 供試品溶液測試結果

圖6供試品溶液測試結果：甲醇峰的理論塔板數為19977；甲醇峰與丙酮峰之間的分離度為13.2；丙酮峰與二氯甲烷峰之間的分離度為5.5；二氯甲烷峰與乙酸乙酯峰之間的分離度為17.1；乙酸乙酯峰與甲苯峰之間的分離度為31.0；甲苯峰與DMF峰之間的分離度為14.1。理論板數均大于5000，各相鄰峰之間分離度均大于1.5，符合要求。

供試品溶液中甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯與甲苯5種有機溶劑回收率分別為101%、102%、92%、93%和92%，符合要求。

故確定溶劑為DMF-0.05MHCl（1:1）。

3 分析方法驗證

3.1 驗證項目與可接受標準

通過對上述硫酸氫氯吡格雷有機殘留溶劑分析方法的驗證，證明所采用的分析方法適合于相應的檢測要求，驗證項目與可接受標準如表1所示。

3.2 驗證程序

3.2.1 儀器與試劑

儀器：Agilent7890A-CTC。

表1 驗證項目與可接受標準

試劑：原藥（某公司，批號130401、130402、130403）；甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯與甲苯均為分析純，N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純。

3.2.2 測試方法

3.2.2.1 系統(tǒng)適用性方法

標準溶液：精密稱取甲醇120mg、丙酮200mg、二氯甲烷24mg、乙酸乙酯200mg、甲苯35.6mg于100mL容量瓶中，并用溶劑稀釋至刻度，搖勻；移取10.0mL此溶液加溶劑稀釋至100mL，搖勻。將上述溶液重復進樣6針，記錄色譜圖。

3.2.2.2 專屬性方法

定位溶液：分別取適量甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯于裝有5mL溶劑的20mL頂空瓶中，密封。

樣品溶液：稱取樣品（批號1304001）200.20mg至20mL頂空瓶中，加5mL溶劑溶解，密封。

混合溶液（1）：分別取適量甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯于裝有5mL溶劑的20mL頂空瓶中，密封。

混合溶液（2）：稱取樣品（批號1304001）200.04mg至20mL頂空瓶中，加5mL溶劑溶解，分別取適量甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯于上述溶液中，密封。

將上述溶液按照上述方法進行測試，記錄色譜圖。

3.2.2.3 線性、準確性、回收精密度和范圍方法

溶液配制：各個溶液相對濃度為限度的10%～150%，至少有5個濃度水平，每個濃度水平配制3個溶液。此次驗證配制了10%測試溶液、40%測試溶液、80%測試溶液、100%測試溶液、120%測試溶液和150%測試溶液6個濃度水平。

3.2.2.4 報告水平（或定量限）方法

配制相對濃度為限度的10%的溶液，平行測試6次。

3.2.2.5 檢測限方法

根據定量限結果，不斷稀釋直到該濃度下的分析物不能被檢測，平行測試3次。

3.2.2.6 測試精密度、方法精密度

測試精密度：配制一個樣品溶液分成6份進行分析。

方法精密度：配制6個樣品溶液分別進行分析。

3.2.2.7 中間精密度

2個檢驗員在不同時間于不同的儀器上用不同批號的色譜柱對同一樣品進行檢測，比較測試結果。

3.2.2.8 耐用性

主要考察柱流速變化、升溫速率變化、頂空恒溫變化和頂空平衡時間變化對測試結果的影響。

3.2.2.9 溶液穩(wěn)定性

配制一份樣品溶液分裝多份，分別于室溫放置0h、6h、12h、18h、24h、48h，按照上述方法進行測試，記錄色譜圖。

3.2.3 結果匯總

測試結果匯總如表2所示。

表2 結果匯總

4 結語

通過多次試驗，確定了硫酸氫氯吡格雷留溶劑的檢測方法。

色譜柱：熔融石英毛細管柱DB-62430m×0.53mm×3.0 μm；載氣：氮氣（N2），柱流速為4.6mL/min（恒流模式）；分流比：20:1；柱溫：先在50 ℃維持5min，再以每分鐘15℃的升溫速率升至180℃，維持5min；進樣口溫度：150℃；檢測器溫度：250℃；爐溫溫度：65℃；進樣針溫度：75 ℃；CTC吹掃壓力：50kPa（0.5bar）；平衡時間：25min；進樣量：1mL。

操作方法：溶劑為0.05mol/L鹽酸溶液-DMF（1:1）。

溶液的配制：（1）空白溶液：溶劑。（2）對照品溶液：精密稱取120mg甲醇、200mg丙酮、24mg二氯甲烷、200mg乙酸乙酯、35.6mg甲苯置于同一100mL容量瓶中，加溶劑稀釋至100mL，搖勻；精密移取10mL此溶液加溶劑稀釋至100mL，搖勻，作為對照品溶液。（3）供試品溶液：精密稱取0.2g樣品置20mL頂空進樣瓶中，加5mL溶劑，密封，作為供試品溶液。

系統(tǒng)適用性試驗：按上述GC分析和頂空分析條件，分別進空白溶液、定位溶液、對照品溶液，記錄色譜圖。各峰間的分離度應不得少于1.5；理論塔板數按甲醇峰計應不得少于5000；各溶劑峰峰面積的RSD應不得大于10%。

測定法：按上述條件將對照品溶液重復進樣6次進行系統(tǒng)適應性試驗；系統(tǒng)適應性符合規(guī)定，測試供試品溶液，記錄色譜圖，讀取峰面積。按外標法以峰面積計算。