HPLC法快速測定甜葉菊中瑞鮑迪苷A*

張友財 俞堅 董雪瑞 朱軍林 婁澤楠

（杭州職業技術學院，浙江杭州310018）

HPLC法快速測定甜葉菊中瑞鮑迪苷A*

張友財**俞堅 董雪瑞 朱軍林 婁澤楠

（杭州職業技術學院，浙江杭州310018）

建立以甜葉菊葉片為原料，采用超聲萃取法用體積濃度70%的乙醇對瑞鮑迪苷A進行提取，使用高效液相色譜儀檢測甜葉菊樣品液中瑞鮑迪苷A含量的方法。采用-NH2基柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈與水體積比80∶20，流速1.2 mL/min，紫外檢測波長210 nm，進樣量15 μL。甜葉菊中瑞鮑迪苷A分別在純水、體積濃度70%乙醇、80%乙腈中提取得率為10.25 mg/g、11.52 mg/g、13.49 mg/g，范圍內線性關系良好相關系數R2=0.999 9。采用體積濃度70%乙醇對瑞鮑迪苷A進行提取，此方法安全有效、操作簡單、定量準確。

甜葉菊；瑞鮑迪苷A；超聲萃取；高效液相色譜

甜菊糖是天然低熱量高倍甜味劑，被譽為“世界第三糖”。甜菊糖主要含有甜菊糖苷、瑞鮑迪苷A、瑞鮑迪苷C等8種成分。其中，瑞鮑迪苷A是甜味品質最好的成分。甜菊糖甜度是蔗糖350～400倍，而熱量僅為蔗糖的1/300。目前報道甜菊糖有抗糖尿病、降血壓、抗菌抗病毒、抗炎等功能。因此，飲料中用瑞鮑迪苷A替代蔗糖，可使飲料低糖化。隨著人們越來越崇尚保健和安全食品，甜菊糖因其具有低熱量、安全、天然、保健等優點，將成為21世紀保健食品消費方向，成為未來甜味劑發展方向。

我國尚未制定食品甜菊糖苷國家標準檢測方法，因此靈敏度高、特異性強、簡便易行的甜菊糖苷分析方法亟待建立。目前甜菊糖苷檢測方法有重量分析法、分光光度法、薄層色譜法、毛細管電泳法。本文采用超聲萃取瑞鮑迪苷A，用HPLC繪制瑞鮑迪苷A標準曲線，最終檢測出樣品溶液中瑞鮑迪苷A含量。該方法對瑞鮑迪苷A提取安全有效、操作簡單、定量準確。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甜葉菊葉片，杭州藝福堂茶葉有限公司；瑞鮑迪苷A標準品，實驗室自制；乙醇，分析純，杭州蕭山化學試劑廠；乙腈，色譜純，美國天地有限公司；純水，實驗室自制。

1.2 儀器與設備

KQ-300E型超聲波清洗器（40 Hz，300 W），昆山市超聲儀器有限公司；BT124S萬分之一電子天平，北京賽多利斯天平有限公司；Agilent1200高效液相色譜儀，檢測器為紫外檢測器，上海天普分析儀器有限公司；DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海益恒實驗儀器有限公司。

1.3 液相色譜儀分析條件

色譜柱：-NH2基柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈與水體積比80∶20；流速：1.2mL/min；檢測器：紫外檢測器，波長210nm；進樣量：15μL。

1.4 試驗方法

1.4.1 瑞鮑迪苷A提取

將甜菊葉粉碎，過80目篩，稱取3份，每份1.00 g，干燥30 min至恒重，分別置于20.0 mL的純水、乙醇、乙腈中，超聲提取20 min。計算瑞鮑迪苷A的提取率。

式中：η——瑞鮑迪苷A的提取率，%；

m1——瑞鮑迪苷A的質量，g；

m2——干甜菊苷的質量，g。

1.4.2 樣品液制備

將樣品分別進行抽濾，取濾液，移取10.0 mL至25 mL容量瓶中分別用純水、乙醇和乙腈定容。再分別移取10.0 mL，置于25 mL容量瓶中分別定容。

1.4.3 標準溶液制備

將標準品瑞鮑迪苷A置于105℃干燥箱烘2 h，分別稱取60 mg、45 mg、30 mg、15 mg，均用流動相溶解，稀釋至25 mL。

1.4.4 標準曲線繪制

測定瑞鮑迪苷A標準液，記錄標準品峰面積，計算標準液濃度，并繪制標準曲線。

2 結果與分析

2.1 線性關系考察

按照標準曲線繪制方法，重復進樣3次，進樣量15 μL，記錄標準品峰面積，以峰面積和質量濃度建立標準曲線。回歸方程Y=0.000 4X+0.020 2，R2=0.999 9。結果表明，在0.6 mg/mL～2.4 mg/mL范圍內線性關系良好。

2.2 精密度試驗

精密吸取1.2 mg/mL瑞鮑迪苷A15 μL，按相同色譜條件進行HPLC分析，重復進樣3次，測得結果瑞鮑迪苷A峰面積RSD為1.93%，表明儀器精密度良好。

2.3 乙醇體積濃度對瑞鮑迪苷A提取率的影響

分別稱取4份1.00 g樣品粉末，分別用20.0 mL體積濃度60%、70%、80%、90%的乙醇溶解，超聲提取30 min，抽慮，進行色譜分析，計算瑞鮑迪苷A提取率，分別為7.40 mg/g、10.56 mg/g、10.14 mg/g、5.53 mg/g。

2.4 不同溶劑對瑞鮑迪苷A提取結果

選取不同的溶劑，水、體積濃度70%乙醇、體積濃度80%乙腈對甜菊葉進行提取，結果顯示不同溶劑提取對瑞鮑迪苷A含量影響很大，體積濃度70%乙醇和體積濃度80%乙腈作溶劑得到瑞鮑迪苷A含量高。由于水提時雜質多，而乙腈成本較高且極易揮發，具有毒性，因此我們選取體積濃度70%乙醇作提取溶劑。體積濃度70%乙醇提取瑞鮑迪苷A的色譜圖見圖1。

圖1 體積濃度70%乙醇作提取劑所得提取液的液相色譜圖

3 結論

研究結果表明，采用超聲萃取法可以增加甜菊糖苷的提取率、縮短浸提時間。試驗分析表明，用體積濃度70%乙醇做提取劑安全可靠，且本法操作簡單、定量準確，為檢測瑞鮑迪苷A提供良好的方法。

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表1 平行樣品的測定

2.3 樣品加標回收率

取一批已經測出含量的樣品，加入標準溶液，其中一份加入標準溶液后使它的含量接近線性范圍的上限，一份加入標準溶液后使它的含量接近檢測下限，另一份加入標準溶液適量，然后測定樣品中磷含量，并計算樣品加標回收率。回收率測定結果見表2。

表2 加標回收試驗

2.4 與標準方法的比較

對同一種樣品，處理方法相同，測定方法不同。5種樣品用本改進法和國標法分別進行測定，結果見表3。從表3可以看出，本法與國標法測定結果基本吻合。

表3 2種方法測定5種食品中磷的含量的結果比較

3 小結

通過改進法測定食品中磷的含量，大大縮短了樣品前處理的時間，用抗壞血酸代替國標方法中的對苯二酚避免了有毒試劑對化驗員的危害及環境的污染。本方法靈敏度高，檢出限、精密度、回收率都比較好，可以適于食品中磷元素含量的測定。

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Identification of rebandiodside A in stevia by HPLC*

ZHANG You-cai*YU Jian DONG Xue-rui ZHU Jun-lin LOU Ze-nan
（Hangzhou vocational and technical college，Zhejiang Hangzhou 030006，China）

With Stevia as the raw material,the extraction of rebandiodside A(RA)by ultrasonic extraction with70% ethanol was researched;A HPLC method for determination of rebandiodside A(RA)in stevia was developed.NH2column(250 mm×4.6 mm，5 μm)was used.The mobile phase was composed of acetonitrile and water（80∶20,v/v），at a flow rate of 1.2 mL/min；The detection wavelength was 210 nm.injection volume was 15 μL.The extraction rates were 10.25 mg/g，11.52 mg/g，13.49 mg/g in pure water,70%ethanol,and 80% acetonitrile separately.The calibration curves had good linearity.Correlative coefficient R2=0.999 9.The method which was characterized by simplicity, higher accuracy,provided a good method for the determination of rebandiodside A in stevia.

stevia；rebandiodside A；ultrasonic extraction；HPLC

TS207.3

A

1673-6044（2014）04-0060-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.04.017

浙江省新苗人才計劃項目（2013R450006）。

**張友財，男，1993年出生，杭州職業技術學院分析檢測專業在讀專科。

2014-10-24