抗凝劑對布氏桿菌病檢測結果的影響

蒙文娟

廣西壯族自治區融水縣動物疫病預防控制中心，廣西融水 545300

在融水縣2013年家畜布氏桿菌病血清流行病學調查中，某鄉鎮送檢的豬、牛、羊血樣出現了在虎紅平板凝集試驗檢測中100%為陽性、試管凝集試驗中100%為陰性的現象。針對這兩種試驗結果的差異，筆者經過分析，懷疑是該鄉獸醫站技術人員使用含肝素鈉的真空采血管采樣造成的。為進一步了解是否因抗凝劑對布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗結果造成了假陽性，即血漿、血清對布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗檢測結果是否有影響，筆者進行了以下對比試驗。

1 材料與方法

1.1 采樣材料

一次性P E注射器（無抗凝劑）、真空采血管（含肝素鈉）和靜脈采集管。

1.2 被檢血清

某羊場20只成年羊，采用頸靜脈采血。

血清樣品（A 01-A 20）：用一次性P E注射器從羊只頸靜脈處抽取血液5m L，常溫靜置2h自然凝固，經離心沉淀，取上清液并編號。

血漿樣品（B 01-B 20）：用真空采血管從羊只頸靜脈處抽取血液5m L，離心沉淀，取上清液并編號。

將分離好的血清和血漿樣品于-4℃冷藏保存，次日檢測。

1.3 診斷液

布魯氏菌病標準陽性血清、陰性血清，布魯氏菌病虎紅平扳凝集抗原，以及布魯氏菌病試管凝集抗原均購自青島易邦生物工程有限公司。

1.4 虎紅平板凝集試驗（RBPT）

取被檢樣品30μL分別置于潔凈玻璃片上，各加布氏桿菌病虎紅平板凝集抗原懸液30μL，攪拌混勻至直徑大小為1c m，然后搖動1～2m i n，于4m i n內在黑色背景下觀察結果。陰、陽性血清對照試驗成立，即當陰性血清對照不凝集、陽性血清對照出現凝集時，方可對被檢樣品進行判定。結果判定標準：“++++”，凝集塊呈菌叢狀，凝集塊間液體明顯清亮；“+++”，凝集反應較強；“++”，形成較明顯卷邊，凝集塊間液體稍清亮；“+”，稍有凝集，稍有卷邊形成，凝集物間液體呈紅色；“-”，無凝集，呈均勻粉紅色。將4m i n內出現肉眼可見的凝集現象判為陽性（+），無凝集現象、呈均勻粉紅色者判為陰性（-）。對出現陽性反應的需作試管凝集試驗檢測。

1.5 試管凝集試驗（SAT）

被檢血清樣品分別作 1:25、1:50、1:100、1:200稀釋，同時設陰、陽性血清對照，陰性血清的稀釋和加抗原的方法與被檢血清相同；陽性血清需稀釋到原有滴度，加抗原的方法與被檢血清相同。

將0.5m L 1:20稀釋的抗原加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，置36～37℃作用24h，取出觀察結果并記錄。

結果判定標準：按各試管上層液體清亮度判讀。“++++”，菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；“+++”，菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮；“++”，菌體凝集顯著，液體50%清亮；“+”，凝集物有沉淀，液體 25%清亮；“-”，凝集物無沉淀，液體均勻渾濁。以產生50%凝集的血清最大稀釋度為受檢血清的效價。待檢血清在1:50（++）以上為陽性，1:25（+）為可疑。

2 結果與分析

血清樣品A 01-A 20分別進行布氏桿菌病RBPT、布氏桿菌病SAT的檢測結果：20份均為陰性、20份均為陰性；血漿樣品B 01-B 20分別進行布氏桿菌病RBPT、布氏桿菌病SAT的檢測結果為：20份均為陽性、20份均為陰性。

3 討 論

1）本試驗中，血漿樣品在布氏桿菌病RBPT檢測中100%呈陽性、而在SAT檢測中100%呈陰性的原因，可能是由血清與血漿中的部分差異成分與虎紅平板凝集抗原發生非特異性凝集反應造成的。血漿和血清的主要區別是血漿含有纖維蛋白原和少量凝血因子，而血清不含纖維蛋白原和較多的凝血產物[1]。

2）雖然本次試驗進行對比檢測的樣品數量不多，但RBPT檢測出現100%陽性率、SAT檢測出現0%陽性率的試驗結果，對我們的檢測工作具有一定的提示意義。今后在布氏桿菌病檢測中應避免使用含抗凝劑的材料進行血液采集，避免對養殖戶和檢測工作造成影響。

3）布氏桿菌病的血清學診斷方法種類較多，每種方法的準確率都不是100%，我們在實際檢疫中應使用兩種或兩種以上的方法相互佐證，最后再做出診斷。

4）布氏桿菌病是一種人畜共患病，主要采取的防治措施是檢疫凈化。布氏桿菌病的防控除了做好日常監測、引種家畜的隔離觀察、消毒、抽樣檢測等綜合措施，還應該嚴格檢疫操作步驟，盡量做到少誤差、零錯誤，這樣才能消除傳染源、切斷傳播途徑，最終保護人們的健康和養殖業的可持續發展。

[1]血漿在血液中是如何代謝的？[J].健康必讀，2013（11）：14.http://www.cqvip.com/QK/81485A/201311/48470070.htmL