膈下逐瘀湯對早期非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質代謝的影響

楊銀花 王佳寧 韓 雪 石安華 姚 政 譚麗萍 賈 勇 陳文慧

云南中醫學院基礎醫學院，云南昆明 650500

膈下逐瘀湯對早期非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質代謝的影響

楊銀花 王佳寧 韓 雪 石安華 姚 政 譚麗萍 賈 勇 陳文慧

云南中醫學院基礎醫學院，云南昆明 650500

目的 探討膈下逐瘀湯對早期非酒精性脂肪肝大鼠體重、肝濕重、肝指數、肝脂的影響。方法 采用高脂飼料法制備非酒精性脂肪肝大鼠模型，50只雄性SD大鼠隨機分為正常組(A組)20只、模型組20只(B組)、膈下逐瘀湯組(C組)10只。模型組、膈下逐瘀湯組給予高脂飼料（普通飼料基礎上加10%豬油，2%膽固醇）喂養持續12周，正常組給予基礎飼料喂養,8周末開始模型組給予生理鹽水灌胃，膈下逐瘀湯組給予膈下逐瘀湯灌胃。分別于造模第6周末、12周末測定正常組及模型組體重、肝濕重、肝指數、肝脂，光鏡觀察肝組織病理變化。結果 高脂飼料喂養6周，造模組大鼠體重、肝濕重、肝指數、肝質較正常組顯著升高(P<0.05，P<0.01)，造模組肝組織病理切片觀察到單純性脂肪肝病理改變；12周末模型組、膈下逐瘀湯組與正常組比以上指標改變更加明顯，第12周末膈下逐瘀湯組大鼠肝濕重、肝指數、肝質比模型組顯著降低(P<0.01)。結論 高脂飼料喂養大鼠6周能成功復制非酒精性脂肪肝動物模型；膈下逐瘀湯可改善模型大鼠肝臟脂質代謝紊亂。

早期非酒精性脂肪肝；膈下逐瘀湯；肝指數；肝脂

非酒精性脂肪肝（NAFL）是一種無過量飲酒史，肝實質細胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床病理綜合征。隨著肥胖和代謝綜合征全球化的流行趨勢，NAFL已成為21世紀全球重要的公共健康問題之一，亦是我國愈來愈重視的慢性肝病問題[1]。該實驗通過2012年10月—2013年1月間復制早期非酒精性脂肪肝大鼠模型，觀察活血化瘀方膈下逐瘀湯對早期非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質代謝的影響，為臨床應用活血化瘀藥治療非酒精性脂肪肝提供理論依據。現報道如下。

1材料與方法

1.1 實驗動物

該實驗于2012年10月—2013年1月結束，雄性SD大鼠50 只，清潔級，體重（150±10）g，昆明醫科大學實物中心提供，生產許可證號：SCXK(滇）11-0004（5939180），飼養于云南中醫學院實驗動物中心，室溫適應性飼養l周后用于實驗。

1.2 實驗藥物

膈下逐瘀湯藥材購自云南省中醫醫院。

1.3 試劑及儀器

10%中性福爾馬林液（云南中醫學院病理實驗室配制），全自動生化分析儀(上海市離心機械研究所)、BD．600LT-86L。

1.4 方法

1.4.1 早期非酒精性脂肪肝動物模型制備及標本的制備

1.4.1.1 早期非酒精性脂肪肝動物模型制備 50只雄性SD大鼠隨機分為正常組20只、模型組20只、膈下逐瘀湯組10只。模型組、膈下逐瘀湯組給予高脂飼料喂養大鼠持續12周，正常組給予基礎飼料喂養。從第8周末開始正常組、模型組給予生理鹽水灌胃，膈下逐瘀湯組給予膈下逐瘀湯灌胃。

1.4.1.2 標本的制備 6周末從正常組及模型組各隨機抽取10只大鼠，12周末正常組、模型組、膈下逐瘀湯組各10只大鼠麻醉剖殺取血，處死后迅速取肝臟，肝左葉存于10%中性福爾馬林中用于病理切片，肝右葉凍存用于制備肝勻漿測肝脂。

1.5 觀察指標及測定

大鼠體重，進食量、飲水量，肝指數：肝濕重／大鼠體重；肝組織勻漿檢測肝脂水平（ELISA法）；HE染色光鏡下觀察肝臟組織形態學改變。

1.6 統計方法

實驗結果用SPSS18.0軟件進行統計，計量資料用均數±標準差（±s)表示,數據符合正態分布、方差齊用方差分析，方差不齊用非參數檢驗。

2 結果

2.1 一般情況

前4周正常組和模型組大鼠進食情況正常，第5周后模型組進食量及體重增加較快，大便稀軟，部分大鼠出現便溏現象。第8周末后模型組體重增長放緩，進食量減少，行動較為遲緩。

2.2 早期非酒精性脂肪肝大鼠 6周末體重、肝濕重、肝指數、肝脂含量變化

模型組與正常組比大鼠體重、肝臟濕重、肝脂顯著升高（P<0.05或0.01），肝指數與正常組比有升高趨勢，但差異無統計學意義。見表1。

2.3 早期非酒精性脂肪肝大鼠 6周末肝臟組織病理學

正常組大鼠肝索沿中央靜脈呈放射狀分布，肝細胞無水樣變性及脂肪變性；模型組大鼠肝細胞體積增大，質內可出現大小不等的脂肪空泡。

2.4 早期非酒精性脂肪肝大鼠 12周末肝指數、肝脂含量變化及膈下逐瘀湯干預作用

與模型組比較，膈下逐瘀湯組肝濕重、肝指數、肝脂顯著降低（P<0.01），體重稍有降低，但差異無統計學意義。見表2。

3 討論

中醫認為非酒精性脂肪性肝大多歸屬于“積聚”等范疇[2]。氣滯、痰阻、血瘀是其主要病理產物，而血瘀在脂肪肝的發生發展中起重要作用，活血化瘀是治療脂肪肝的基本法則[3]。該實驗以高脂飼料復制早期非酒精性脂肪性肝大鼠模型，從瘀血這一病機出發，采用活血化瘀中藥膈下逐瘀湯進行干預，觀察膈下逐瘀湯對早期非酒精性脂肪性肝大鼠肝臟脂代謝的影響。實驗觀察到高脂飼料喂養 6周后，造模組大鼠體重（394.00±33.07）g、肝濕重（11.80±1.34）g 及肝甘油三酯（0.82±0.04）mmol/L、肝總膽固醇（4.90±0.37）mmol/L 較正常組顯著升高(P<0.05 或 0.01)，肝指數也有升高趨勢，表明采用高脂飼料喂養6周可成功復制早期NAFL大鼠模型，該方法造模具有制作方法簡便、重復性好、價格低廉、動物死亡率低、復制率高,病變有漸進性發展過程,造模停止后病變逆轉緩慢便于藥物干預研究的優點,為國內外最常用的脂肪肝模型[4]。該課題前期研究者張順貞[5]的前期實驗用該造模方法成功復制脂肪肝大鼠模型，也證實了該造模方法的優點。

表1 早期非酒精性脂肪肝大鼠 6周末體重、肝濕重、肝指數、肝脂含量變化（±s)

表1 早期非酒精性脂肪肝大鼠 6周末體重、肝濕重、肝指數、肝脂含量變化（±s)

注：與正常組比較，*P<0.05,**P<0.01。

組別 體重(g)肝濕重(g)A組(n=10)B組(n=10)337.±40.78（394.00±33.07）*9.14±1.47（11.80±1.34）*肝指數(%)肝甘油三脂(mmol/L) 肝總膽固醇(mmol/L)2.75±0.57 3.01±0.30 0.38±0.05（0.82±0.04）**2.51±0.39（4.90±0.37）**

表2 早期非酒精性脂肪肝大鼠12周末肝指數、肝脂含量變化及膈下逐瘀湯干預作用（±s)

表2 早期非酒精性脂肪肝大鼠12周末肝指數、肝脂含量變化及膈下逐瘀湯干預作用（±s)

注：與正常組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組別 體重(g)肝濕重(g)A組(n=10)B組(n=10)C組(n=10)391.20±37.26（444.30±23.58）★★（439.38±36.37）★★10.44±1.24（14.22±1.62）★★（11.59±1.93）▲▲肝指數(%)肝甘油三脂(mmol/L) 肝總膽固醇(mmol/L)2.67±0.22（3.20±0.26）★★（2.63±0.33）▲▲0.24±0.08（1.39±0.10）★★（0.58±0.07）★★▲▲1.90±0.29（8.80±0.52）★★（3.73±0.25）★★▲▲

有學者研究表明：血瘀證在早期脂肪肝就已經存在[6]，孫云霞[7]等實驗證明活血化痰方高劑量組可明顯降低模型動物肝臟中脂質水平。該實驗觀察到應用膈下逐瘀湯臨床等效量干預4周后，膈下逐瘀湯組大鼠肝濕重（11.59±1.93）g、肝指數（2.63±0.33）%、肝甘油三酯（0.58±0.07）mmol/L、肝總膽固醇含量（3.73±0.250）mmol/L較模型組大鼠顯著降低(P<0.01)，脂肪肝病理改變減輕。該實驗結果提示：活血化瘀中藥膈下逐瘀湯臨床等效量可改善早期非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質代謝紊亂。另外有研究[8]顯示，血液黏度的與脂肪肝發生率呈正相關性，因此活血化瘀藥方膈下逐瘀湯治療脂肪肝有理論及實踐依據。至于活血化瘀方改善肝臟脂質代謝的機制有待進一步研究。

[1]范建高.非酒精性脂肪肝治療研究進展[J].中華肝臟病雜,2008,16(11):801.

[2]李軍祥,陳治水,危北海.非酒精性脂肪性肝病的中西醫結合診療共識意見[J].中國中西醫結合雜志,2011(2):198-199.

[3]蔡丹莉,陳芝蕓,嚴茂祥，等.膈下逐瘀湯對血瘀型非酒精性脂肪性[J].中國中醫藥科技,2012,19(4):303-305.

[4]翁小剛,朱曉新,楊慶,等.非酒精脂肪肝的實驗研究進展[J].中國試驗方劑,2009,15(11):104-108.

[5]張順貞.去脂軟肝方對早期脂肪肝大鼠血液流變干預作用的[D].昆明:云南中醫學院,2012：1-66.

[6]張順貞，陳文慧．活血化瘀法對脂肪肝血液流變學的影響研究[J]．江西中醫學院學報，2011，23(3)：31-33．

[7]孫云霞,杜斌,王濤.活血化痰方治療大鼠非酒精性脂肪肝[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(22):236-239.

[8]陳麗娟.80脂肪肝患者的血脂及血液流變學分析[J].檢驗醫學與臨床,2011，8(8):966-967.

R285.5

A

1674-0742（2014）11（c）－0079-02

云南省運用基礎研究“基于CD62p研究大鼠早期脂肪肝與血瘀證的相關性”（11FB075）。云南省運用基礎研究“從微環境角度研究大鼠脂肪肝痰瘀的蛋白質分子基礎”（13FZ093）。 國家自然學科學基金資助，基于血小板活化研究大鼠早期脂肪肝與血瘀證的相關性（81160492）。

楊銀花（1976-），女，云南祥云人，碩士（在讀），中西醫結合主治醫師，主要從事中西醫結合肝病基礎與臨床研究工作。

陳文慧，教授，碩士研究生導師，研究方向：中西醫結合肝病基礎與臨床研究。

2014-08-29)