規(guī)模化豬場致病性仔豬黃白痢大腸桿菌耐藥性檢測

毛君婷姜玲玲史開志

（1.貴陽市花溪區(qū)農(nóng)業(yè)局，貴州貴陽 550025；2.貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴州貴陽 550005）

規(guī)模化豬場致病性仔豬黃白痢大腸桿菌耐藥性檢測

毛君婷1姜玲玲2史開志2

（1.貴陽市花溪區(qū)農(nóng)業(yè)局，貴州貴陽 550025；2.貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴州貴陽 550005）

為揭示規(guī)模化豬場致病性仔豬黃白痢大腸桿菌的耐藥性，為生豬養(yǎng)殖選擇用藥提供借鑒，2012年至2014年期間，通過細(xì)菌分離鑒定，從貴州省貴陽市21家發(fā)生仔豬黃白痢的規(guī)模化豬場分離得到21株致病性仔豬黃白痢大腸桿菌。藥物敏感性檢測結(jié)果表明，分離細(xì)菌不同比例地對14種獸醫(yī)常用抗生素表現(xiàn)耐藥性，鏈霉素和氨芐青霉素耐藥性最為嚴(yán)重；頭孢噻呋鈉和氟苯尼考是較為敏感的抗生素藥物，但隨著時間推移，頭孢噻呋鈉和氟苯尼考的敏感菌株比例在逐步下降。

規(guī)模化豬場；仔豬黃白痢；致病性大腸桿菌；耐藥性

致病性大腸桿菌是仔豬黃白痢的病原，在生豬養(yǎng)殖中嚴(yán)重威脅和危害新生和哺乳仔豬，可導(dǎo)致仔豬群體性腹瀉和死亡，是仔豬生產(chǎn)過程中重點(diǎn)防治的疫病[1]。由于該菌血清類型眾多，不同地區(qū)甚至相同地區(qū)不同養(yǎng)殖場之間優(yōu)勢血清型常各不相同，而不同血清型之間不存在明顯的交叉保護(hù)，疫苗免疫通常不能獲得理想的防控效果，長期以來主要依賴抗生素預(yù)防和治療仔豬黃白痢[2]。

雖然抗生素的大量使用在防控仔豬黃白痢的過程中曾取得重大功效，但抗生素的選擇壓力同時導(dǎo)致了耐藥菌株的不斷涌現(xiàn)，為這一疾病的防控帶來了新的困擾和挑戰(zhàn)[3]。為揭示規(guī)模化豬場致病性仔豬黃白痢大腸桿菌耐藥動態(tài)，筆者對2012年至2014年期間貴州省貴陽市21個發(fā)生仔豬黃白痢的規(guī)模化豬場進(jìn)行致病性大腸桿菌分離鑒定，并通過藥物敏感性試驗(yàn)對21株分離的病原菌耐藥性進(jìn)行檢測，為規(guī)模化豬場利用抗生素有效應(yīng)對仔豬黃白痢提供參考和借鑒。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基為北京奧博星生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；大腸桿菌生化鑒定管及藥敏片購自杭州微生物試劑有限公司，氟苯尼考和頭孢噻呋鈉（藥敏片自制）為成都中牧生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；試驗(yàn)小白鼠購至貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心；大腸桿菌質(zhì)控菌株ATCC25922購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2 致病性菌株分離鑒定

用滅菌直腸拭紙無菌操作采集發(fā)生黃痢或白痢的仔豬肛門樣本，接種麥康凱培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌分離純化，通過革蘭氏染色鏡檢進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，根據(jù)大腸桿菌生化特征進(jìn)行生化特性鑒定、通過小白鼠接種試驗(yàn)進(jìn)行分離細(xì)菌致病性鑒定。

1.3 分離致病性大腸桿菌耐藥性檢測

利用大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922進(jìn)行質(zhì)控，按照世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的K-B法，對分離得到的致病性大腸桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，抗生素種類及判斷標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 藥敏片名稱及敏感性判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.4 不同年度流行菌株耐藥性比較

根據(jù)分離細(xì)菌流行年限對其進(jìn)行劃分，比較不同年度流行菌株對同一種抗生素的耐藥比例變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 致病性仔豬黃白痢大腸桿菌分離鑒定

通過細(xì)菌分離純化、革蘭氏染色鏡檢、生化圖譜鑒定和小白鼠接種試驗(yàn)，從21個發(fā)生仔豬黃白痢的規(guī)模化生豬養(yǎng)殖中，共分離到33株大腸桿菌，其中12株大腸桿菌接種小白鼠后無致病性，分別分離自12家豬場；21株大腸桿菌為致病性菌株，來自21個不同豬場。從分離年限看，2012年分離8株、2013年分離9株、2014年分離4株。

2.2 分離致病菌耐藥性測試

通過藥敏試驗(yàn)，對21株分離致病菌進(jìn)行耐藥性檢測，結(jié)果見表2。

表2 分離致病菌耐藥性檢測

從表2可見，在14種獸醫(yī)常用抗生素中，分離菌株出現(xiàn)不同程度的耐藥，其中鏈霉素耐藥最為嚴(yán)重，共有16株病原菌出現(xiàn)耐藥性；耐藥性最為輕微的是頭孢噻呋鈉，僅4株耐藥。沒有發(fā)現(xiàn)一種抗生素對所有分離菌株均表現(xiàn)敏感。

2.3 不同時間分離菌株耐藥性比較

將分離菌株按流行時間分類，比較不同年度流行菌株耐藥比例變化，發(fā)現(xiàn)變化最大的抗生素為頭孢噻呋鈉，在2012年分離的8株致病菌中，僅有1株細(xì)菌耐藥，2013年分離的9株細(xì)菌中，2株出現(xiàn)耐藥，2014年分離的4株中，1株細(xì)菌出現(xiàn)耐藥；其次是氟苯尼考2012年，8株分離菌中，耐藥菌株僅2株，2013年，檢測的9株細(xì)菌中，4株耐藥，2014年，4株流行菌株中2株耐藥。其它12種抗生素，各年流行菌株中耐藥菌株比例變化并不明顯。

3 討論

2012年至2014年期間，從貴州省貴陽市21家發(fā)生仔豬黃白痢的豬場分離到致病性仔豬黃白痢大腸桿菌21株，利用14種生豬養(yǎng)殖中常用的抗生素，測定分離菌株的藥物敏感性，發(fā)現(xiàn)分離菌株出現(xiàn)不同程度耐藥。

致病菌耐藥性的出現(xiàn)，給仔豬黃白痢的藥物防控帶了了困難。從試驗(yàn)檢測的結(jié)果看，分離菌株中，大部分菌株出現(xiàn)嚴(yán)重的多重耐藥，這可能是近年來養(yǎng)殖場仔豬黃白痢藥物預(yù)防和治療效果較差的原因。針對耐藥細(xì)菌的出現(xiàn)，豬場應(yīng)針對性地選擇敏感抗生素進(jìn)行仔豬黃白痢的的預(yù)防和治療，從而保證治療效果和節(jié)約用藥成本。從對21株致病性大腸桿菌的藥物敏感性檢測結(jié)果看，頭孢噻呋鈉是最理想的仔豬黃白痢預(yù)防和治療用藥；其次是氟苯尼考和頭孢噻肟；四環(huán)素、多西環(huán)素、阿米卡星和多粘菌素有一定的預(yù)防和治療可能，但比例敏感細(xì)菌比較低；其它的藥物敏感性很低，特別是氨芐青霉素和鏈霉素，從藥敏試驗(yàn)結(jié)果看，已不適于仔豬黃白痢的預(yù)防和治療。

細(xì)菌隨在抗生素的選擇壓力下，其耐藥譜會發(fā)生變化。通過對不同年度分離病原菌耐藥性進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)在2012年屬于比較敏感的頭孢噻呋鈉和氟苯尼考，在2013和2014年具有耐藥性的菌株比例已經(jīng)大幅上升。這可能是因?yàn)樵?012年和2013年中，因?yàn)樯显V2種抗生素比較敏感，治療效果較好，因此豬場大量使用，從而導(dǎo)致了抗頭孢噻呋鈉和抗氟苯尼考的病原菌比例的上升。針對這一現(xiàn)象，規(guī)模化豬場在選擇抗生素預(yù)防和治療仔豬黃白痢時，不應(yīng)該長期只依靠少數(shù)幾種抗生素，應(yīng)定期篩選敏感藥物并適度交替使用，盡量縮短耐藥菌株出現(xiàn)的時間。

[1] 蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)（第四版）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.

[2] 王秀梅，蔣紅霞，廖曉萍，等.豬源致病性大腸桿菌的血清型、毒力基因及抗菌藥耐藥性的調(diào)查[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，43（19）：4109-4115.

[3] 湯景元，王紅寧，張鵬舉，等.95個豬場大腸桿菌耐藥表型及氨基糖苷類藥物耐藥基因型調(diào)查[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2008，39（4）：472-477.

毛君婷（1985-），女， 重慶銅梁人，碩士，主要從事畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣，通訊作者：史開志。

貴州省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（生豬）產(chǎn)業(yè)體系疫病防制功能實(shí)驗(yàn)室建設(shè)（GZCYTX2013-0902）；貴州省科技廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目（黔科合NY[2013]3072）；貴陽市科技特派員計劃項(xiàng)目（筑科合同[2011207]27號）；貴州省科技廳改革轉(zhuǎn)制項(xiàng)目（黔科合體Z字[2012]4004號）。