重樓藥材性狀與4種皂苷含量分析

劉小芬，楊成梓，黃澤豪，范世明，黃秀植，洪晶

（福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122）

重樓Paridis Rhizoma為百合科Liliaceae植物云南重樓Paris polyphylla Smith var.yunnanensis（Franch.）Hand.-Mazz.或七葉一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis（Franch.）Hara的干燥根莖［1］。重樓藥材中含有的主要活性成分為甾體皂苷類化合物，根據(jù)苷元的不同有薯蕷皂苷類和偏諾皂苷類［2］。2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》以重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ為質(zhì)控指標(biāo)性成分，其中重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ?yàn)槭硎氃碥眨貥窃碥闸觥ⅱ鳛槠Z皂苷，為重樓抗腫瘤活性的主要成分［3］。近年來(lái)，因野生藥材資源急劇減少，需求量加大，造成市場(chǎng)上重樓藥材的價(jià)格急劇上揚(yáng)，在局部地區(qū)甚至出現(xiàn)斷貨的現(xiàn)象，總體價(jià)格較為混亂。福建全省均產(chǎn)重樓，但分布較為零散，目前部分縣市正逐步進(jìn)行重樓野生轉(zhuǎn)家養(yǎng)的馴化模式。2011年至今，我們對(duì)福建野生重樓（另文報(bào)道）與栽培重樓［4］的資源與質(zhì)量進(jìn)行了較為深入的研究，本文作為系列報(bào)道之一，為進(jìn)一步明確閩產(chǎn)重樓質(zhì)量與市售品相比較是否具有優(yōu)勢(shì)，同時(shí)考察重樓藥材市場(chǎng)現(xiàn)狀，對(duì)研究過(guò)程中收集的19批次全國(guó)不同地區(qū)的重樓藥材，采用HPLC法測(cè)定重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量，并結(jié)合市場(chǎng)現(xiàn)狀與藥材性狀進(jìn)行分析，提供藥材質(zhì)量基本信息，為市售重樓藥材質(zhì)量把關(guān)與控制提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料、儀器與試劑

1.1 藥材來(lái)源于全國(guó)各地市中藥材市場(chǎng)、藥店、診所共購(gòu)得19批次的市售重樓藥材。經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室楊成梓副教授進(jìn)行鑒定，18批為重樓Paridis Rhizoma藥材，另1批為拳參Bistortae Rhizoma藥材，在該藥店代重樓出售。觀察各批次藥材性狀，記錄產(chǎn)地、價(jià)格等相關(guān)信息。各樣品信息匯總見(jiàn)表1。

表1 市售重樓藥材來(lái)源與性狀信息表

1.2主要儀器與試劑LC-10AT高效液相色譜分析儀（日本島津公司）；PLATISIL ODS高效液相色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）（迪馬科技有限公司）；重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ對(duì)照品（上海源葉生物制品有限公司。皂苷Ⅰ批號(hào)：20110817；皂苷Ⅱ批號(hào)：20110720；皂苷Ⅵ批號(hào)：20110803；皂苷Ⅶ批號(hào)：20110803，純度≥98%）；甲醇（中國(guó)國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，色譜純）；重蒸水（自制），乙醇（中國(guó)國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備根據(jù)參考文獻(xiàn)［4］，精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品重樓皂苷Ⅰ、重樓皂苷Ⅱ、重樓皂苷Ⅵ、重樓皂苷Ⅶ，加色譜甲醇，制成重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ對(duì)照品混合溶液，溶液濃度分別為0.4020、0.3500、0.3790、0.4380 mg/mL，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，備用。精密稱取粉末（過(guò)4號(hào)篩）0.50 g，置具塞三角錐瓶中，加入無(wú)水乙醇25 mL，稱定重量，加熱回流0.5 h，放冷，再稱定重量，用無(wú)水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，備用。

2.2 色譜條件色譜柱：PLATISIL ODS高效液相色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-水溶液（B）；洗脫方式：線性梯度，A相0～20 min（10%～30%），20～60 min（30%～60%），60～70 min（60%～30%）；檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm；流速：1 mL/min，進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30℃。重樓皂苷Ⅶ保留時(shí)間約為44 min，重樓皂苷Ⅵ保留時(shí)間約為46 min，重樓皂苷Ⅱ保留時(shí)間約為56 min，重樓皂苷Ⅰ保留時(shí)間約為57 min。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ混合對(duì)照品（A）與福建尤溪2樣品（B）HPLC色譜圖

2.3 線性關(guān)系分別吸取2、4、6、8、10、12、14 μL的重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ對(duì)照品溶液進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)品含量為x坐標(biāo)，峰面積為y坐標(biāo)，繪制重樓皂苷標(biāo)準(zhǔn)品曲線。回歸方程與相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。

2.4 市售重樓藥材樣品測(cè)定按照2.2項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定18批重樓樣品、1批拳參樣品的HPLC色譜圖，將所得峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)下面公式計(jì)算各樣品中重樓皂苷含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ線性回歸方程與相關(guān)系數(shù)

重樓皂苷含量（%）＝xV1/（V2W）×100%［x：進(jìn)樣10 μL重樓皂苷含量（μg）；V1：定容體積25 mL；V2：HPLC進(jìn)樣量10 μL；W：稱樣量g］

3 討論

3.1 藥材性狀與價(jià)格本次實(shí)驗(yàn)中購(gòu)自全國(guó)各地中藥材市場(chǎng)、藥店、診所等，產(chǎn)地主要為廣西、云南、江西、重慶、湖南等地，已知產(chǎn)出時(shí)間為2008年—2011年。藥材性狀存在較大差異，其中9批為飲片，3批為小塊或條塊狀，7批為個(gè)藥；藥材品相、直徑大小等方面差異顯著，同批藥材最大均值約3.0 cm，最小均值約0.5 cm；藥材斷面兼有角質(zhì)與粉性2種。藥材價(jià)格亦差異明顯，最高市售價(jià)相差可達(dá)4倍；且價(jià)格低的，其性狀亦較差些。總體看來(lái)，重樓藥材市售品存在藥材性狀良莠不齊，價(jià)格較為混亂等現(xiàn)象。

3.2 藥材皂苷含量與藥材質(zhì)量19批重樓藥材樣品中，4個(gè)皂苷含量之和范圍為0.11%～3.31%，平均含量1.82%；含量最高為購(gòu)自福建南平的樣品，最低為購(gòu)自福建泉州的樣品；其中購(gòu)自云南麗江、福建福州與福建泉州的3批樣品，4個(gè)皂苷含量之和低于2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)（4個(gè)皂苷含量之和不低于0.6%），合格率為84.2%。

3.3 藥材皂苷含量與性狀相關(guān)性重樓藥材的質(zhì)地曾作為傳統(tǒng)藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣的判斷指標(biāo)之一，認(rèn)為“粉質(zhì)重樓”較“膠（角）質(zhì)重樓”為優(yōu)［5］。而現(xiàn)有研究表明，“粉質(zhì)重樓”與“膠（角）質(zhì)重樓”的形成，是產(chǎn)地水濕條件、加工炮制溫度等諸多因素的影響［5-6］。本次19批藥材中，11批重樓藥材斷面呈角質(zhì)，7批藥材斷面呈粉性或略帶角質(zhì)。3批皂苷含量不合格藥材中，2批斷面呈粉性，1批斷面呈角質(zhì)。4個(gè)皂苷含量之和在2%以上的8批藥材中，4批斷面呈角質(zhì)，4批斷面呈粉性。從具體樣品4個(gè)皂苷含量之和與斷面質(zhì)地來(lái)看，二者之間并不存在正相關(guān)，不支持粉性者質(zhì)量更優(yōu)的說(shuō)法。其它如藥材斷面直徑大小、藥材的產(chǎn)出時(shí)間等，與其有效成分含量之間亦不呈正相關(guān)，不作為影響藥材質(zhì)量的因素。

3.4 重樓藥材性狀、皂苷含量與藥材來(lái)源的相關(guān)性現(xiàn)有研究表明［7-8］，云南重樓根莖主要含薯蕷皂苷類成分，特別是重樓皂苷Ⅰ的含量明顯高于七葉一枝花根莖，而七葉一枝花根莖主要含偏諾皂苷類成分；不同含量皂苷的差別，可以用來(lái)判斷藥材的來(lái)源。實(shí)驗(yàn)中10批樣品薯蕷皂苷（重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ總量）含量高于偏諾皂苷（重樓皂苷Ⅵ、Ⅶ總量）含量，其中薯蕷皂苷含量與偏諾皂苷含量比值≥2.0的樣品5批，特別是福建尤溪2樣品，比值高達(dá)20；比值1.5～2.0的樣品3批；比值1.0～1.5的樣品3批；比值0.5～1.0的樣品7批；另有1批樣品未檢測(cè)出薯蕷皂苷。初步可判斷實(shí)驗(yàn)中所購(gòu)藥材應(yīng)是不同來(lái)源，但藥材性狀、皂苷含量與來(lái)源三者之間并未形成規(guī)律性。由藥材外觀性狀無(wú)法判斷藥材來(lái)源；雖然藥材中薯蕷皂苷含量與偏諾皂苷含量的比值在一定程度可用于判斷藥材來(lái)源，但另一方面由于影響重樓不同皂苷含量的因素多樣，若要確切判斷，尚需加大樣品量，在明確來(lái)源的情況下，進(jìn)一步研究不同植物來(lái)源重樓藥材的區(qū)別，以更加準(zhǔn)確地指導(dǎo)用藥。

表3 市售重樓藥材中重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量%

3.5 拳參代重樓藥用拳參在全國(guó)各地地方用藥中，以其代重樓用，是長(zhǎng)期以來(lái)存在的現(xiàn)象［9-11］。本次實(shí)驗(yàn)在重樓藥材樣品的購(gòu)買(mǎi)過(guò)程中，亦有一批樣品為拳參，在該藥店中代重樓出售。拳參主要活性成分為鞣質(zhì)、沒(méi)食子酸、兒茶素、綠原酸等，無(wú)重樓的皂苷泡沫反應(yīng)［12］。在本次實(shí)驗(yàn)條件中，拳參樣品在重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ等4個(gè)對(duì)照品的對(duì)應(yīng)保留時(shí)間值點(diǎn)亦出現(xiàn)吸收峰，容易造成拳參藥材中含有以上4個(gè)皂苷成分的假象，若二者出現(xiàn)藥粉或中成藥摻偽現(xiàn)象，則無(wú)法用本HPLC法進(jìn)行鑒別，需進(jìn)行更進(jìn)一步的分析。

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