分光光度法測定新鮮蔬菜中維生素C的含量

李占清 魏海英

(河北大學 化學與環境科學學院，河北 保定 071002)

0 前言

水溶性維生素C又名L-抗壞血酸，主要存在于新鮮蔬菜和水果中，具有美白養顏、預防感冒、增強免疫系統功能等作用，對壞血病、動脈硬化、貧血等有一定療效，可以預防癌癥、心臟病、中風，保護牙齒和牙齦等，是維持人體正常代謝的必需物質。人體嚴重缺乏維生素C時會導致壞血病，而且體內又不能自身合成維生素C，只能通過合理膳食得到，因此，準確測定蔬菜中維生素C的含量具有重要意義。

蔬菜中維生素C含量的測定一般采用2,4-二硝基苯肼法、熒光分光光度法、碘量法和2,6-二氯靛酚滴定法等[1-5]，這些方法都有一定的缺點，比如操作程序復雜、所用試劑不穩定、時間長等。根據維生素C的結構特點確定了其水溶液最大吸收波長為265 nm，并且分光光度法應用普遍[6-10]，因此，建立了紫外分光光度法的工作曲線，選取了幾種新鮮蔬菜作為樣品進行測定。方法具有操作簡便、準確、快速、檢出限低的優點。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

TU-1810紫外可見分光光度計(北京普析通用有限公司)，PHS-3C型酸度計(上海偉業儀器有限公司)，分析天平，組織搗碎機，吸量管，容量瓶，紗布，移液管。

維生素C標準儲備溶液(1.0 mg/mL)：稱取0.1 g(精確至0.1 mg)抗壞血酸，溶于蒸餾水中，定量轉移入100 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容，搖勻。

維生素C標準溶液(0.1 mg/mL)：將標準儲備溶液稀釋而得。

1.2 實驗方法

1.2.1繪制工作曲線

分別移取0.00，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00，12.00 mL維生素C的標準溶液于100 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至標線，搖勻。以蒸餾水為參比，在λmax=265 nm處測定吸光度，并以吸光度為縱坐標，維生素C標準溶液濃度為橫坐標，作標準曲線。

1.2.2樣品的測定

將菠菜、白菜、芹菜、土豆、胡蘿卜五種新鮮蔬菜樣品洗凈，擦干，稱取一定量具有代表性樣品的可食部分，加入少量的水，迅速搗成勻漿，用二層紗布過濾。用水將樣品移入100 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻。以蒸餾水為參比，在λmax=265 nm處，測定試樣吸光度。

2 結果與討論

2.1 最大吸收波長的確定

以蒸餾水為參比，取6.00 mL的維生素C標準溶液，在200～350 nm范圍內對其進行光譜掃描，結果如圖1所示。從圖1可知最大吸收波長λmax=265 nm。

圖1 維生素C溶液的吸收曲線Figure 1 Absorption curve of vitamin C solution.

2.2 酸度對吸收波長的影響

用移液管分別加入1 mL維生素C標準溶液于50 mL容量瓶中，用HCl或NaOH調pH值，蒸餾水稀釋至刻度，測定不同pH值下的維生素C的最大吸收波長，實驗結果如圖2所示，實驗表明，pH值在5.0～10.0時的最大吸收波長不變，為265 nm，但pH=6.0時的吸收值最大，故選擇pH值為6.0。當pH<5.0時，最大吸收波長紫移，可能是因為維生素C以離子化形式存在造成的。當pH>12.0時，最大吸收波長紅移，這是由于維生素C在堿性環境中不穩定分解引起的。這與文獻[1]報道一致。

圖2 pH對吸收波長的影響Figure 2 Effect of absorbtion wavelength on pH.

2.3 線性關系及檢出限

圖3 維生素C溶液的標準曲線Figure 3 A standard curve of vitamin C solution.

由圖3可知，維生素C的質量濃度在1.0～12.0 μg/mL范圍內呈線性關系，線性回歸方程為A=0.066 03c+0.019 74，相關系數R2=0.997 51。同時，以蒸餾水做空白測定，計算標準偏差為0.0982%，得到檢出限為0.044 μg/mL。

2.4 樣品測定結果

實驗中選取了新鮮蔬菜大白菜、菠菜、芹菜、土豆、胡蘿卜為樣品，按照實驗方法測定了其中維生素C的含量，結果見表1。

表1 蔬菜中維生素C的含量Table 1 Contents of vitamin C in vegetables /(mg·g-1)

2.5 加標回收實驗

準確吸取上述實驗方法中稀釋后的蔬菜溶液25.00 mL于50 mL容量瓶中，加0.5 mL維生素C標準溶液(100 μg/mL)，用蒸餾水稀釋至刻度線，搖勻。測定該溶液的吸光度并從標準曲線上得到所測定的50 mL容量瓶中含有維生素C的對應含量。結果如表2所示。實驗結果表明，加標回收率穩定在97.5%～105.4%，方法準確可靠。

表2 加標回收實驗結果Table 2 Results of recovery tests /μg

2.6 穩定性實驗

將含量測定中所配制的五種蔬菜樣品溶液，在間隔不同時間內進行吸光度測量。結果發現在10 h內，樣品的吸光度幾乎沒有變化。雖然具有還原性的維生素C易被氧化，但在一定時間內，pH=6.0的介質中能穩定存在。

3 結語

水溶性維生素C具有含有烯二醇基的多羥基內酯結構而在紫外區有特征吸收；詳細考察了不同pH值時特征吸收波長。結果表明：在pH=6.0時，維生素C能穩定存在，且有最大吸光度。在1.0～12.0 μg/mL的質量濃度范圍內，維生素C濃度與吸光度呈良好的線性關系，線性方程為：A=0.066 03c+0.019 74，相關系數R2=0.997 51。選取的五種常見蔬菜中維生素C的含量分別為：白菜 0.645 6 mg/g，菠菜 1.948 0 mg/g，芹菜 0.321 4 mg/g，土豆 0.559 1 mg/g，胡蘿卜0.311 mg/g。該方法簡單易行，準確度高，穩定性好。

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