乳腺癌組織中Livin蛋白的表達(dá)及其與患者臨床病理特征和細(xì)胞增殖的關(guān)系

余劍文　池圣亮

[摘要] 目的 探討乳腺癌組織中Livin蛋白的表達(dá)及其與患者臨床病理特征和細(xì)胞增殖的關(guān)系。 方法 采用免疫組化S-P法檢測(cè)乳腺癌組織中Livin蛋白表達(dá)，并探討其與患者年齡、組織學(xué)分級(jí)、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征和細(xì)胞增殖的關(guān)系。另選擇20例癌旁正常組織和10例正常乳腺組織作對(duì)照。 結(jié)果 Livin蛋白在正常乳腺、癌旁正常組織及乳腺癌組織中的表達(dá)呈逐漸增高趨勢(shì)（χ2=18.28，P<0.01）。乳腺癌組織中Livin蛋白表達(dá)與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（χ2=4.19和7.73，P<0.05或P<0.01）。Livin表達(dá)陰性乳腺癌組織中PCNA增殖指數(shù)明顯低于Livin表達(dá)陽(yáng)性乳腺癌組織（t=2.37，P<0.05）。 結(jié)論 Livin蛋白在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展不同階段的表達(dá)呈進(jìn)行性上升趨勢(shì)，Livin蛋白在乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等活動(dòng)中可起到促進(jìn)作用，可作為預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌；免疫組化；Livin蛋白；臨床病理特征；細(xì)胞增殖

[中圖分類號(hào)] R735.34 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2014）04-0095-03

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程是一個(gè)多基因、多階段的演進(jìn)過(guò)程，與腫瘤細(xì)胞的過(guò)度增殖和凋亡密切相關(guān)[1]。Livin是一種新發(fā)現(xiàn)凋亡蛋白控制因子IPA 家族的新成員，能阻礙多種途徑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，在大多數(shù)正常成人組織中不表達(dá)或表達(dá)較弱，而在一些腫瘤組織中高表達(dá)[2，3]。Livin的抗腫瘤細(xì)胞凋亡作用特性及在腫瘤發(fā)病過(guò)程中的作用越來(lái)越被臨床重視，使其有望成為腫瘤診斷的新靶點(diǎn)[4]。本研究觀察了在乳腺癌組織中Livin蛋白的表達(dá)在其與患者的臨床病理特征和細(xì)胞增殖的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月～2013年5月我院普外科手術(shù)切除女性乳腺癌患者55例。所有患者均具有完整臨床資料且經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)，按TNM分期法分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期22例和Ⅲ期15例，術(shù)前均未行放化療；年齡37～82歲，平均（57.4±7.9）歲。另選擇20例癌旁正常組織（距腫瘤邊緣>5cm）和10例正常乳腺組織作對(duì)照。

1.2 免疫組化染色

采用免疫組化S-P法。標(biāo)本10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，連續(xù)4μm切片，采用高溫修復(fù)抗原，正常血清封閉10min，傾去血清滴加Livin、PCNA-抗工作液4℃過(guò)夜，其余均參照說(shuō)明書進(jìn)行。采用DAB顯色，蘇木精襯染，脫水、透明、封片和鏡檢。以試劑公司提供的陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，以PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。Livin、PCNA蛋白單克隆抗體和免疫組化S-P試劑盒均由福州邁新生物公司提供。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 免疫組化結(jié)果判定 結(jié)果以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)計(jì)數(shù)細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分，其中無(wú)著色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分，棕褐色為3分；再根據(jù)染色陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行計(jì)分，其中（-）計(jì)為0分，陽(yáng)性細(xì)胞的百分比≤10%計(jì)1分，陽(yáng)性細(xì)胞的百分比11%～50%計(jì)2分，陽(yáng)性細(xì)胞的百分比51%～75%計(jì)3分，陽(yáng)性細(xì)胞的百分比>75%計(jì)4分。我們定義計(jì)數(shù)細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分和陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)分的乘積≥2分即為L(zhǎng)ivin蛋白表達(dá)（+），否則Livin蛋白表達(dá)（-）[5]。

1.3.2 增殖指數(shù)（PI） 采用高清晰度彩色圖文分析系統(tǒng)，選取10個(gè)高倍區(qū)域，計(jì)算1000個(gè)腫瘤細(xì)胞中PCNA陽(yáng)性染色的細(xì)胞比例，即為增殖指數(shù)（PI）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料采用相對(duì)數(shù)表示，用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Livin蛋白在正常乳腺組織、癌旁正常組織及乳腺癌組織中的表達(dá)差異

正常乳腺、癌旁正常組織及乳腺癌組織中Livin的陽(yáng)性表達(dá)率分別為0%（0/10）、35.0%（7/20）和67.27%（37/55），Livin蛋白在正常乳腺、癌旁正常組織及乳腺癌組織中的表達(dá)呈逐漸增高趨勢(shì)（χ2=18.28，P<0.01）。

2.2 乳腺癌組織中Livin蛋白與臨床病理特征的關(guān)系

乳腺癌組織中Livin蛋白表達(dá)與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)（χ2=4.19和7.73，P<0.05或P<0.01），與年齡和組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)（χ2=0.43和2.17，P>0.05）。見表1。

2.3 乳腺癌組織中Livin的表達(dá)與細(xì)胞增殖的關(guān)系

Livin表達(dá)陰性的乳腺癌組織中PCNA的增殖指數(shù)為（37.27±13.67）%；Livin表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌組織中PCNA的增殖指數(shù)為（57.26±17.36）%。Livin表達(dá)陰性的乳腺癌組織中PCNA的增殖指數(shù)明顯低于Livin表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌組織（t=2.37，P<0.05）。

3討論

Livin是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)IAPs家族中的一種凋亡抑制基因，在多種腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，可引起腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物抵抗而耐藥[6，7]。人Livin基因位于20號(hào)染色體q13.3，全長(zhǎng)7.6kb，內(nèi)有7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子，含有BIR結(jié)構(gòu)域和RING結(jié)構(gòu)域，其中BIR的結(jié)構(gòu)域是Livin的抗凋亡活性依賴點(diǎn)[8，9]。Livin基因主要通過(guò)其BIR結(jié)構(gòu)域與Caspase家族成員結(jié)合，從而抑制Caspase活性，尤其是Caspase-3/-7和Caspase-9的活性，達(dá)到阻斷凋亡受體和以線粒體為核心的外源性及內(nèi)源性細(xì)胞凋亡途徑來(lái)發(fā)揮抗凋亡作用，還可通過(guò)激活 TAK1/JNK1信號(hào)通路來(lái)抑制癌細(xì)胞的凋亡[10，11]。

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)Livin基因與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程密切相關(guān)。吳國(guó)武等[11]研究發(fā)現(xiàn)Livin在乳腺癌組織中表達(dá)率68.6%明顯高于正常乳腺組織，表明Livin蛋白在乳腺癌組織中過(guò)表達(dá)，在乳腺癌分子機(jī)制中起重要作用。周晟等[12]研究發(fā)現(xiàn)Livin在乳腺癌組織中表達(dá)上調(diào)，提示Livin基因可能在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展中起重要促進(jìn)作用。本研究結(jié)果示Livin蛋白在正常乳腺、癌旁正常組織及乳腺癌組織中的表達(dá)呈逐漸增高趨勢(shì)。提示Livin蛋白在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展不同階段的表達(dá)呈進(jìn)行性上升趨勢(shì)。在此過(guò)程中凋亡抑制因子Livin基因通過(guò)抑制Caspase活性而達(dá)到抗細(xì)胞凋亡作用，使已轉(zhuǎn)化細(xì)胞發(fā)生異常有絲分裂，導(dǎo)致乳腺上皮細(xì)胞的永生化或癌變[13]。陳亮等[14]研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌中Livin表達(dá)與其臨床分期、組織學(xué)分級(jí)和腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與年齡、腫瘤大小和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。提示乳腺癌組織中Livin的異常高表達(dá)與其發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后關(guān)系較密切，可作為乳腺癌浸潤(rùn)及預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)。潘崢等[15]研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中Livin RNA的表達(dá)與TNM分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系較密切，在乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展中起了重要的作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中Livin蛋白的表達(dá)與患者的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與年齡和組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)。提示Livin蛋白在乳腺癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移等活動(dòng)中可起到促進(jìn)作用，可作為預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)Livin表達(dá)陰性的乳腺癌組織中PCNA的增殖指數(shù)明顯低于Livin表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌組織。提示Livin基因還具有促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖作用。

總之，Livin蛋白在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展不同階段的表達(dá)呈進(jìn)行性上升趨勢(shì)，Livin蛋白在乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等活動(dòng)中可起到促進(jìn)作用，可作為預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)。

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（收稿日期：2013-07-31）