口腔念珠菌病患者口內菌株檢出分布及藥敏實驗臨床研究

陳水堂

（黃梅縣人民醫院 口腔科，湖北 黃岡 435500）

口腔念珠菌病俗稱“鵝口瘡”，為口腔黏膜發生的真菌感染，在免疫功能低下人群中高發，近年隨廣譜抗生素、免疫抑制劑及皮質激素類藥物的廣泛應用，真菌感染率不斷上升，口腔念珠菌病感染真菌菌株種類臨床報導也不斷增多，耐藥率出現上升［1］，提升了相關治療的困難性，本研究采取回顧性分析，研討了96例口腔念珠菌病CHROMagar假絲酵母菌顯色培養基培養及藥敏實驗結果，旨在更好的指導臨床的合理用藥。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

96例臨床確診口腔念珠病患者均來自我院2011年1月至2013年1月口腔科門診病人，鏡檢及培養均支持真菌感染，其中男34例，女性62例，年齡2－60歲，中位數年齡30歲，臨床癥狀體征主要表現為：口腔黏膜下白色假膜、基底呈現紅色潰瘍、糜爛，研究對象于餐后2h無菌PBS緩沖液（p H7.2）漱口1分鐘，含漱液收集于無菌容器內，分別鏡檢及培養。

1.2 培養、鑒定

含漱液標本離心50μl接種于CHROMagar假絲酵母菌顯色培養基培養（由成都培洋生物提供），37℃培養48 h，根據CHROMagar培養基菌落形態及顏色進行鑒定，翠綠色菌落為白色念珠菌（直徑2 mm左右），粉紅色、邊緣呈現毛刺狀為克柔念珠菌（直徑4－5 mm左右），紫紅色為光滑念珠菌（直徑2 mm左右），藍灰色為熱帶念珠菌（直徑1.5 mm左右）。

1.3 藥敏試驗

藥敏試驗采用紙片擴散法（kindy－Bauer，KB），接種環取鑒定后菌株轉種于沙堡弱培養基（由杭州天和生物提供），取純菌落（＞1 mm）5個溶于5 ml無菌生理鹽水混勻，血細胞計數板調整菌懸液濃度至（1－5）×106cfu／ml，無菌棉拭子涂布RPMI－I640培養基（美國Hycolone公司提供），干燥后放置伊曲康唑（ICZ）、氟康唑（FCZ）藥敏紙片各一，均為杭州民生藥業提供，伊曲康唑劑量8μg，氟康唑劑量15μg，35℃培養72 h，根據藥敏紙片說明判讀藥敏結果：抑菌圈：伊曲康唑19 mm以上敏感（相應 MIC≤0.125值），15－18劑量依賴性敏感（相應 MIC值0.25－0.5），14 mm以下耐藥（相應 MIC值≥1）；氟康唑19 mm以上敏感（相應 MIC值≤8），15－18劑量依賴性敏感（相應 MIC值16－32），14 mm以下耐藥（相應MIC值≥64），以24 h結果為該藥物判定時間，質控菌株ATCC22019（標準菌種購自中國醫學科學院皮膚病研究所）。

1.4 統計學分析

采用SPSS16.0統計學軟件進行數據分析，構成比、率比較采用卡方檢驗，以P＜0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 菌群分布

96例念珠病共分離114株念珠菌，其中78例患者分離單一菌株（75例分離白色念珠菌，3例分離非白色念珠菌）；18例患者分離出兩種不同菌種菌株，念珠菌菌種分布詳見表1，其中以白色念珠菌分離71株占62.3%，與其他菌種比較經卡方檢驗分析均有統計學差異（P＜0.05），熱帶念珠菌分離15株占13.2%，光滑念珠菌分離12株占10.5%，克柔念珠菌分離9株占7.9%，其他念珠菌分離7株占6.1%。

表1 念珠菌分離株菌群分布（n，%）

2.2 真菌藥敏試驗

伊曲康唑對白色念珠菌的敏感率49.3%，氟康唑對白色念珠菌的敏感率74.6%，經卡方檢驗分析有統計學差異（χ2＝57.58，P＜0.05），兩藥物對其他菌種的敏感率詳見表2。

表2 真菌藥敏試驗（n，%）

3 討論

念珠菌為口腔的正常菌群屬于條件致病菌，其對口腔黏膜上皮有較強的粘附性，中性粒細胞、單核細胞和嗜酸性粒細胞等均對念珠菌有殺滅作用，念珠菌對機體的毒性取決于代謝產物［2］，口腔念珠菌多屬內源性感染，機體抵抗力下降、口腔菌群失衡均可引起急性、亞急性及慢性感染，易復發，部分患者可發生敗血癥，尤其對于免疫功能缺陷患者常為致死的重要病因。臨床廣譜抗生素、免疫抑制劑及激素類藥物的不合理使用被認為是感染發生的重要因素之一［3］。

口腔念珠菌感染菌株以白色念珠菌為主，在我們研究中白色念珠菌62.3%，與國內一些臨床研究數據接近［4－6］，白色念珠菌可分泌磷脂酶、蛋白酶，對口腔粘膜上皮的蛋白、膠原具有較強的水解作用，可導致上皮細胞破壞、溶解，粘膜充血、糜爛。目前研究人員發現［7］，白色念珠菌產生的N－亞甲基苯甲基甲胺具強烈的致癌作用。熱帶念珠菌、光滑念珠菌及克柔念珠菌均有檢出，3種念珠菌種感染構成比無統計學差異，均低于白色念珠菌。非白色念珠菌感染在臨床研究報道逐漸增多，本研究中非白色念珠菌多以白色念珠菌混合感染居多，僅3例非白色念珠菌發生單獨感染，其中臨床報道［8］，非白色念珠菌中以熱帶念珠菌毒力最強，臨床應重視熱帶念珠菌引起的感染。CHROMagar假絲酵母菌顯色培養基對多菌種的混合感染的鑒別有一定的技術優勢，相對于沙保羅瓊脂培養基對雜菌的抑制作用較強，目前廣泛的應用于臨床念珠菌的鑒別［9］。

念珠菌的耐藥現象逐漸引起臨床的關注，伊曲康唑與氟康唑為臨床常見的三唑類抗真菌藥物，伊曲康唑作用機制為高選擇性地抑制真菌細胞的細胞色素酶，氟康唑作用機制為抑制真菌細胞膜必要成分麥角甾醇合成酶，使麥角甾醇合成受阻，破壞真菌細胞壁的完整性，本研究中氟康唑對白色念珠菌的敏感性優于伊曲康唑，可能與臨床伊曲康唑應用較多有關，長期用藥過程中產生的劑量依賴性敏感現象增多，長期大劑量的伊曲康唑治療可引起肝損［10］，臨床應慎重用藥，并注意治療過程的肝功能監測，安全用藥。光滑念珠菌與克柔念珠菌對伊曲康唑耐藥較為嚴重，因研究標本較少，仍需繼續跟蹤觀察，臨床報道［11］：克柔念珠菌對氟康唑天然耐藥，本研究符合上述觀點，未發現對氟康唑敏感克柔念珠菌株。

［1］劉 瑩，張曉冬.口腔念珠菌病菌群分布及藥敏試驗和臨床療效分析［J］.中國皮膚性病學雜志，2013，27（4）：364.

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［11］陳晉蓉.口腔念珠菌病的臨床用藥［J］.中國現代藥物應用，2013，7（5）：61.