養陰生肌散急性毒性及全身過敏性實驗研究*

李喜香，劉效栓 ，張小華 ，禚 君，豆金彥，劉軍剛，高小恒 ，張 堅 ，張芳麗 ，馬 嵐 ，鄭立娟 ，吳 迪

1甘肅省中醫院藥學部，甘肅 蘭州 730050；2蘭州大學基礎醫學院藥理學研究所；3甘肅省新藥臨床前研究重點實驗室

養陰生肌膜是由甘肅省中醫院醫院制劑養陰生肌散經劑型改革而得，由甘草、冰片、牛黃、青黛、黃柏等藥組成，主要用于治療口腔潰瘍［1-2］。為了解其安全性，本研究進行了養陰生肌(膜)散的急性毒性及全身過敏性實驗，現報道如下：

1 材料

1.1 動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體質量(18～22)g，SPF級，購自蘭州大學實驗動物中心，實驗動物使用許可證號：SCXK(甘)2009-0004；豚鼠，雌性，體質量(200～300)g，購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所，實驗動物使用許可證號：SCXK(甘)2010-0001。

1.2 藥物與試劑 養陰生肌散(甘肅省中醫院提供，甘藥制字 Z04000835，批號：20111224)；2，4-二硝基氯苯(上海試劑廠生產，批號：97-05-01)；新潔爾滅消毒液 (山東利爾康消毒科技有限公司生產，批號：100901A)；10%卵白蛋白(自制)，取 1mL雞蛋清，加入9mL生理鹽水，混勻后備用；氯化鈉注射液(西安京西雙鶴藥業有限公司生產，批號：020605482)；戊巴比妥鈉(中國醫藥集團上海化學試劑公司生產，批號：F20020915)。

2 方法與結果

2.1 急性毒性實驗［3-6］取小鼠50只，按1∶0.7比例設 5個劑量組(0.49、0.34、0.24、0.17、0.12 g/mL)，每組10只。小鼠禁食不禁水12小時，按0.02mL/g灌胃給藥。觀察小鼠毒性反應癥狀以及癥狀出現和消失時間、死亡時間、死亡只數，每4小時做詳細記錄。連續觀察7天，于第7天處死小鼠進行剖檢，肉眼觀察小鼠各臟器損害情況。

實驗結果顯示，所有小鼠均未死亡，未能測出LD50。隨后將養陰生肌散配成0.6 g/mL濃度，按照上述操作給藥進行最大耐受量測試。結果顯示小鼠活動自如，飲食、飲水正常，體質量未減輕。按照毒理學評價標準，LD50＞1 000mg/kg，屬無毒性物質，本實驗劑量增加到12000mg/kg仍未出現毒性，表明養陰生肌散對小鼠安全無毒，結果見表1。

表1 養陰生肌散急性毒性實驗結果

2.2 全身過敏性試驗［3-5，7］取豚鼠 18只，隨機分為生理鹽水組、卵白蛋白組和養陰生肌散組，每組6只。生理鹽水組腹腔注射生理鹽水0.5mL/只，卵白蛋白組腹腔注射10%卵白蛋白0.5mL/只，養陰生肌散組腹腔注射養陰生肌散0.5mL/只，隔日給藥，共3次。將每組豚鼠再分為2組，每組3只。其中一組于首次注射受試藥物后第14天靜脈注射受試藥物1mL/只,進行攻擊，觀察攻擊后豚鼠的反應；另一組于首次注射受試藥物后第21天同法進行攻擊并觀察。根據豚鼠全身過敏反應癥狀進行分級，并對全身過敏反應進行等級評價。

實驗結果顯示，生理鹽水組豚鼠均未出現全身過敏癥狀，致敏率為0%；卵白蛋白組豚鼠均出現全身過敏癥狀，致敏率為100%，反應強度為極強陽性，多因過敏性休克死亡；養陰生肌膜組在第14天攻擊時有2只豚鼠出現不安、立毛和發抖癥狀，致敏率為30%，根據全身過敏反應癥狀等級評價標準判斷，養陰生肌散全身過敏反應強度為弱陽性，表明養陰生肌散全身過敏反應癥狀輕微，見表 2—5。

表2 過敏反應分級及癥狀

表3 全身過敏反應癥狀等級評價標準

表4 各組豚鼠全身性過敏反應結果

表5 養陰生肌散全身性過敏反應致敏率

3 討論

決定一個藥物能否用于臨床的首要條件是其安全性，本研究對養陰生肌散的安全性進行了考察。急性毒性實驗的目的是推測受試藥物急性毒性的強弱，同時也可為長期毒性、生殖毒性、致突變等實驗提供劑量的選擇和有關毒性信息，還可以推測受試藥物毒性發生的速度和持續時間。因此，急性毒性實驗對了解未知藥物的毒性是非常必要的。經實驗，養陰生肌散LD50未測出，按照毒理學評價標準，LD50＞1 000mg/kg，屬無毒性物質，本實驗劑量增加到12 000mg/kg仍未出現毒性，表明養陰生肌(膜)散對小鼠安全無毒，局部使用安全。

全身過敏反應是機體免疫反應的一種特殊表現。當藥物作為抗原或半抗原初次進入體內，通過免疫反應刺激機體產生相應的抗體。當相同藥物再次進入體內時，抗原與抗體結合形成抗原-抗體復合物，促使肥大細胞釋放組胺等物質，導致組織細胞損傷，從而引起動物局部組織水腫，出現搔鼻、立毛、呼吸困難、窒息、痙攣等癥狀，嚴重者甚至出現休克死亡。全身過敏實驗用于考察注射用及含特異性蛋白質較多的中草藥注射劑，是評價臨床用藥安全性的指標。

養陰生肌(膜)散的急性毒性實驗及全身過敏性實驗基本符合規定要求，本實驗為臨床安全用藥提供了依據。

［1］ 國家藥典編輯委員會.中華人民共和國藥典：二部［M］.北京：化學工業出版社，2010：277.

［2］ 梁愛華，李春英，王金華，等.雄黃的毒性研究［J］.中國中藥雜志，2011，36(14)：1889-1894.

［3］ 呂圭源，王一濤.中藥新產品開發學［M］.北京：人民衛生出版社，1998：366-376.

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［5］ 陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京：人民衛生出版社，2000：112-119.

［6］ 陳忠偉，劉偉，趙武.復方中藥制劑對小鼠的急性毒性試驗［M］.中國畜牧獸醫，2007，34(6)：112-113.

［7］ 翁謝川，樊星，王青秀，等.藥物安全性評價中豚鼠全身過敏試驗方法的研究［J］.中國比較醫學雜志，2012，22(5)：51-55.