臭菜抗氧化活性研究

楊新周，楊子仙，郝志云

（德宏師范高等專科學校理工系，云南德宏 678400）

臭菜抗氧化活性研究

楊新周，楊子仙，郝志云

（德宏師范高等專科學校理工系，云南德宏 678400）

為了研究臭菜提取物體外抗氧化活性，考察其對DPPH自由基和羥自由基活性的清除能力，并且與多種抗氧化劑進行對照研究。通過實驗得出，臭菜提取物清除DPPH自由基活性的能力優于對香豆酸。結果表明，臭菜提取物具有很好的清除DPPH自由基和羥自由基活性的能力，是一種良好的天然抗氧化劑。

臭菜；DPPH自由基；羥自由基；抗氧化活性

羽葉金合歡［Acacia pennata（Linn.）Wind］又名臭菜，傣族稱為“帕哈”，隸屬于豆科（Leguminosae）金合歡屬（Acacia Miller）。分布于廣東、福建、廣西及印度東部、中南半島、非洲和云南的西雙版納、思茅、德宏等地區。羽葉金合歡是種食療皆宜的植物，其根、樹皮及嫩葉均具有藥用價值，莖可作木材［1，2］。另外臭菜營養價值豐富，具有很高的經濟價值，且價格昂貴，是西雙版納、德宏、文山等地區最具特色的野生木本蔬菜［3］。目前對臭菜的研究主要包括人工種植［4］、民族植物學、營養成分分析［5］、其遺傳多樣性［1，3］等方面，而對臭菜的抗氧化活性研究鮮見報道。本文采用傳統方法-分光光度法進行定量分析［6］。通過對臭菜乙醇提取物進行清除DPPH自由基和羥自由基（·OH）的能力測定，希望能為臭菜的綜合利用提供理論依據。

1 實驗部分

1．1 主要儀器和試劑

V-1100型可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司），超聲波（SK2200H），電子天平（AR224CN）；數字顯示恒溫水浴鍋（HH-S24S，上海君竺儀器制造有限公司）；電熱真空干燥箱（ZK 82J型）；旋轉蒸發儀（EYELA N-1100）。

DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼），質量分數＞99.0%，國藥集團化學試劑有限公司；臭菜（嫩莖葉，采于云南德宏州，烘干，粉碎，過篩），槲皮素、山奈酚、咖啡酸、蘆丁、沒食子酸、對香豆酸（購自國藥集團浙江華東醫藥有限公司，質量分數＞98%）；番紅花紅、EDTA-Fe2＋（現配現用）、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、雙氧水（現配現用）、乙醇等試劑均為分析純，實驗用水為二次蒸餾水。

1．2 實驗內容及方法

1．2．1 DPPH儲備液的制備

準確稱取10mgDPPH，用無水乙醇溶解定容至100 mL容量瓶中，得質量濃度為0.1mg／mL的儲備溶液。然后稀釋成質量濃度為0.024mg／mL的標準溶液。

1.2.2 臭菜提取物的制備

準確稱取2.000 0 g樣品于100mL的錐形瓶中，加入20 mL的乙醇溶液，封口，超聲提取3次，每次45min，合并3次濾液于旋轉蒸發儀中濃縮，轉移到25mL的容量瓶中，乙醇定容，備用。

1．2．3 清除DPPH自由基能力的測定

準確移取4.5 mL DPPH標準溶液液，依次加入一定體積的提取物稀釋液于10 mL比色管中，定容至5m L，置于暗處30 min，在波長517 nm下測定空白DPPH溶液的吸光度值（A空白）和加入提取物后DPPH溶液的吸光度值（A樣品），按下式計算自由基清除率［6］。

1．2．4 羥自由基（·OH）的清除活性測定

1）調零管：準確移取1.00mLPBS于10m L比色管中，加入3.5 mL的水，37℃水浴中恒溫30 min室溫下冷卻，調零。

2）對照組：依次加入1.00 mL PBS、1.50 mL 40 μg／mL番紅花紅、1.00mL EDTA-Fe（Ⅱ）、1.00mL蒸餾水于10mL比色管中，37℃水浴中恒溫30min室溫下冷卻，測定吸光度A（λ＝520 nm），V總＝4.50mL。

3）空白組：依次加入1.00mLPBS、1.50m L 40 μg／mL番紅花紅、1.00mLEDTA-Fe（Ⅱ）、1.00mL 3%H2O2于10 mL比色管中，37℃水浴中恒溫30 min室溫下冷卻，測定吸光度A0（λ＝520 nm），V總＝4.50mL。

4）樣品組：依次加入1.00mLPBS、1.50mL40 μg／mL番紅花紅、1.00m LEDTA-Fe（Ⅱ）、10.0μL不同濃度的樣品溶液，1.00mL 3%H2O2于10mL比色管中，37℃水浴中恒溫30 min室溫下冷卻，測定吸光度As（λ＝520 nm），V總＝4.50mL［7］。

清除率＝［As－A0］／［A－A0］×100%

2 結果與討論

2．1 臭菜清除DPPH自由基活性能力

按照1.2.3的方法測定臭菜提取物清除DPPH自由基活性的能力，以清除率對總固形物濃度作圖，實驗結果見圖1。

圖1 臭菜提取物對DPPH自由基的清除曲線Figure 1 DPPH radical scavenging curve of Acacia pennata extracts

從圖1中看出，清除率隨著樣品質量濃度的增加而增大，當樣品質量濃度達到一定量時，清除率增加緩慢。從圖1看出當臭菜總固形物質量濃度為0.08～1.6mg／mL之間，DPPH清除率與濃度呈線性關系，線性方程為y＝40.407x＋15.152，R2＝0.9933，計算出總固形物IC50＝0.86 mg／mL。實驗中同樣的方法，測定對香豆酸、沒食子酸、香草酸、咖啡酸、蘆丁對DPPH自由基的清除率，計算出IC50。各抗氧化劑質量濃度與清除率之間線性方程分別表示如下，咖啡酸：y＝15246x－1.0143，R2＝0.9933，IC50＝0.0033 mg／mL；沒食子酸：y＝49340x＋4.5849，R2＝0.9775，IC50＝0.000 92mg／mL；香草酸：y＝74.736x＋9.116，R2＝0.9282，IC50＝0.5471 mg／mL；對香豆酸：y＝17.437x＋10.388，R2＝0.9565，IC50＝2.27 mg／mL。蘆丁：y＝8238x＋14.592，R2＝0.9457，IC50＝0.0043 mg／mL；自由基清除作用以IC50值來計算，IC50值越小，表示抗氧化活性越好，蘆丁、咖啡酸、臭菜提取物、沒食子酸、香草酸、對香豆酸清除DPPH自由基能力順序為對香豆酸＜臭菜提取物＜香草酸＜蘆丁＜咖啡酸＜沒食子酸。

2.2臭菜清除羥自由基活性能力

按照1.2.4的方法測定了臭菜提取物清除羥自由基活性的能力，以清除率對總固形物濃度作圖，實驗結果見圖2。

圖2 臭菜提取物對羥由基的清除曲線Figure 2 Hydroxyl radical scavenging curve of Acacia pennata extracts

由圖2可知，清除率隨著樣品濃度的增加而增大，根據所測定清除率及臭菜提取物總固形物濃度的關系，得出清除率及臭菜提取物濃度的線性方程為y＝126.11x＋17.353，R2＝0.951 8，IC50＝0.258 9mg／mL。實驗中同樣的方法，測定山奈酚、槲皮素、咖啡酸、蘆丁對羥自由基活性的清除率，計算出IC50。各抗氧化劑濃度與清除率之間線性方程分別表示如下，槲皮素：y＝6694.5x＋31.077，R2＝0.994 7，IC50＝0.003mg／mL；蘆丁：y＝1996.5x＋3.0273，R2＝0.995，IC50＝0.023mg／mL；咖啡酸：y＝1252.3x＋27.674，R2＝0.990 6，IC50＝0.018mg／mL；山奈酚：y＝7735.3x＋7.982，R2＝0.999 8，IC50＝0.005mg／mL。從實驗結果可知，臭菜提取物、山奈酚、蘆丁、槲皮素、咖啡酸清除羥自由基活性能力順序為：臭菜提取物＜蘆丁＜咖啡酸＜山奈酚＜槲皮素。

3 結論

臭菜提取物對DPPH自由基和·OH具有一定的清除作用，且隨著臭菜提取物濃度的提高，其清除能力也相應地增強。通過試驗得出，臭菜乙醇提取物清除DPPH自由基能力優于對香豆酸。這一結果為開發抗氧化劑提供了一個新的來源，為評價臭菜的價值提供一個依據。

［1］ 高潔，李巧明.羽葉金合歡的DNA提取和SSR引物篩選［J］.云南植物研究，2008，30（1）：64-68.

［2］ 施洪，李茂琳.充分發揮資源優勢打造芒市云藥之鄉［J］.德宏師范高等專科學校學報，2012，22（2）：59-62.

［3］ 高潔，李巧明.云南西雙版納地區羽葉金合歡的遺傳多樣性研究［J］.生物多樣性2008，16（3）：271-278.

［4］ 潘奇.臭菜人工栽培技術［J］.云南農業，2004（11）：7.

［5］ 許又凱，劉宏茂，刀祥生，等.臭菜營養成分分析及作為特色蔬菜的評價［J］.廣西植物，2004，24（1）：12-16.

［6］ 穆懷雪，楊新周，姚福泉，等.不同提取方法對五味子清除DPPH自由基作用的影響研究［J］.時珍國醫國藥，2012，23（6）：1454-1455.

［7］ 劉瓊，李喬麗，放茂良，等.傣族藥竹葉蘭不同極性部位提取物的抗氧化性研究［J］.中國農學通報，2011，27（14）：77-81.

Study on Antioxidative Activities of Acacia Pennata

YANG X in-zhou，YANG Zi-xian，HAO Zhi-yun

（Dehong Teachers college，Science and Engineering Department，Dehong 678400，China）

The antioxidant activities in vitro of extract from Acacia pennata were investigated，its scavenging activities for DPPH free radical（DPPH·）and hydroxyl radical（·OH）was studied，and also comparatively with othermultip le antioxidants wasmade.The results show that the order of DPPH free radical scavenging activities is Acacia pennata，p－Coumaric acid.The results show thatextracts of Acacia pennata have antioxidant activities，Acacia pennata is a good natural antioxidant.

Acacia pennata；antioxidant activities；DPPH free radical；hydroxyl radical

Q946

： A

： 1004-275X（2014）01-0015-03

12.3969／j.issn.1004-275X.2014.01.004

收稿：2013-07-10

楊新周（1986-），男，助教，碩士研究生，研究方向：分析化學。