老鷹茶的化學成分研究

王 靜，陸維麗，張義龍，唐敏芳，湯文建，李俊

◇藥學研究◇

老鷹茶的化學成分研究

王 靜，陸維麗，張義龍，唐敏芳，湯文建，李俊

目的研究老鷹茶的化學成分。方法采用硅膠、ODS、Sephadex LH-20及制備型HPLC等色譜方法分離化合物，利用NMR、MS波譜學方法鑒定其結構。結果從老鷹茶70%乙醇回流提取物的乙酸乙酯部位和正丁醇部位分離得到9個化合物，分別鑒定為兒茶素（1）、表兒茶素（2）、菜豆酸（3）、山奈酚-3-O-β-D-蕓香糖苷（4）、松屬素-7-O-β-D-葡萄糖苷（5）、香樹素-3-O-α-L-阿拉伯糖苷（6）、2，4，6-三羥基苯丁酮-2-O-β-D-葡萄糖苷（7）、腺苷（8）、（＋）-異落葉松脂醇-9-O-β-D-葡萄糖苷（9）。結論化合物3～9為首次從樟科木姜子屬植物中分離得到，1、2為首次從該植物中分離得到。

老鷹茶；乙酸乙酯；正丁醇；結構鑒定

老鷹茶系樟科木姜子屬毛豹皮樟的葉，葉片呈橢圓形，面綠背白，俗稱“白茶”，分布于云南、貴州、四川、安徽等地。民間飲用表明老鷹茶具有解毒消腫、明目益思、生津止渴、解表防暑等功效，且無毒副作用，為藥食同源植物，長期飲用有益于健康［1］。近年來藥理學研究［2］表明老鷹茶具有抗氧化、降糖、降脂、抗炎及免疫調節等功效，具有較大的開發和應用前景。為合理開發其藥用資源，明確藥效物質基礎，該實驗對老鷹茶的化學成分進行了較系統的研究，從中分離得到24個化合物［2－7］，繼續從老鷹茶70%乙醇提取物的乙酸乙酯部位和正丁醇部位中分離得到9個化合物。將這些化合物進行藥理活性篩選，期望得到具有明顯藥理活性的化合物，進而開發成療效確切、毒副作用小、質量可控的天然藥物，為進一步開發老鷹茶提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 藥材老鷹茶采自安徽省寧國縣茶廠，陰干備用，經安徽醫科大學藥學院謝晉老師鑒定為樟科木姜子屬毛豹皮樟的葉。原植物標本（LC200805）保存于安徽醫科大學藥學院。

1.2 儀器與試劑AV-300、400型核磁共振光譜儀（瑞士Bruker公司，TMS為內標）；Agilent 1260－6224液質聯用儀（美國安捷倫公司）；島津LC-8A高效制備液相（日本島津公司）；依利特Hypersil-ODS柱（250.0 mm×4.6 mm，5 μm，山東奧秘科技有限公司）；薄層層析硅膠和柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；薄層色譜GF254板（煙臺江友硅膠開發有限公司）；Sephadex LH-20（瑞典Pharmacia公司）；普通試劑均為分析純；色譜甲醇、乙腈；氘代試劑（北京崇熙科技孵化器有限公司）。

1.3 方法取老鷹茶葉10 kg，以10倍量體積分數70%乙醇回流提取3次，時間分別為2、1、1h。過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，得到總浸膏。浸膏用水分散，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取。乙酸乙酯部分（130 g）經正相硅膠柱層析，氯仿－甲醇系統梯度洗脫，得到5個部分；二氯甲烷－甲醇（10∶1→5∶1）洗脫部分經硅膠柱色譜反復分離，并結合Sephadex LH-20和制備型HPLC純化得到化合物1（16 mg）、2（13 mg）、3（21 mg）。正丁醇部分（2.0 kg）用蒸餾水加熱溶解，經D101大孔樹脂柱吸附，用乙醇－水系統梯度洗脫，將乙醇部位分為10%、30%、50%、95%4個部分，分別對95%和50%部分用硅膠柱進行反復分離，并結合ODS、Sephadex LH-20、制備型HPLC純化得到化合物4（68 mg）、5（34 mg）、6（18 mg）、7（42 mg）、8（72 mg）、9（8 mg）。

2 結果

兒茶素1：類白色粉末，分子式為C15H14O6，TOFHRMS：m/z［M］＋calcd for C15H14O6：290.079 0，found：290.078 6。1H-NMR（300 MHz，DMSO-d6）δ：2.45（1 H，m，overlap with solvent，4a-H），2.68（1 H，dd，J＝4.3，16.4 Hz，4b-H），4.01（1 H，m，3-H），4.63（1 H，d，J＝4.5 Hz，2-H），4.73（1 H，s，3-OH），5.71（1 H，d，J＝2.0 Hz，6-H），5.89（1 H，d，J＝2.0 Hz，8-H），6.66（2 H，s，5′，6′-H），6.89（1 H，s，2′-H），8.69（1 H，s，4′-OH），8.77（1 H，s，3′-OH），8.87（1 H，s，7-OH），9.08（1 H，s，5-OH）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6）δ：28.2（4-C），65.0（3-C），78.1（2-C），94.1（8-C），95.1（10-C），98.5（6-C），114.8（2′-C），114.9（5′-C），118.0（6′-C），130.7（1′-C），144.5（3′，4′-C），155.8（9-C），156.3（7-C），156.6（5-C）。以上數據與文獻［8－9］報道基本一致，故鑒定化合物1為兒茶素，見圖1。

表兒茶素2：類白色粉末，分子式為C15H14O6，TOF-HRMS：m/z［M］＋calcd for C15H14O6：290.079 0，found：290.078 8。1H-NMR（75 MHz，DMSO-d6）δ：2.35（1 H，dd，J＝8.0，16.0 Hz，4a-H），2.66（1 H，dd，J＝5.2，16.0 Hz，4b-H），3.17（1 H，d，J＝5.0 Hz，3-H），4.84（1 H，d，J＝5.0 Hz，2-H），5.69（1 H，d，J＝2.0 Hz，6-H），5.89（1 H，d，J＝2.0 Hz，8-H），6.59（1 H，dd，J＝1.4，8.0 Hz，6′-H），6.68（1 H，d，J＝8.0 Hz，5′-H），6.72（1 H，d，J＝1.4 Hz，2′-H），8.78（1 H，s，4′-OH），8.83（1 H，s，3′-OH），8.91（1 H，s，7-OH），9.15（1 H，s，5-OH）。13C-NMR（75 MHz， DMSO-d6）δ：27.9（4-C），66.5（3-C），81.1（2-C），94.1（8-C），95.3（10-C），99.2（6-C），114.6（2′-C），115.3（5′-C），118.6（6′-C），130.8（1′-C），145.0（3′，4′-C），155.5（9-C），156.3（7-C），156.6（5-C）。以上數據與文獻［8］報道基本一致，故鑒定化合物2為表兒茶素，見圖1。

圖1 9種化合物的化學結構式

菜豆酸3：白色粉末，分子式為C15H20O5，TOFHRMS：m/z［M］＋calcd for C15H20O5：280.131 1，found 280.130 1。1H-NMR（300 MHz，C5D5N）δ：1.21（3 H，s，9′-H），1.55（3 H，s，7′-H），2.08（3 H，d，J＝0.7 Hz，6-H），2.64（1 H，dd，J＝17.8，2.3 Hz，5′pro-R-H），2.88（1 H，dd，J＝17.6，2.3 Hz，3′pro-S-H），2.97（1 H，dd，J＝17.8，2.4 Hz，5′pro-S-H），3.13（1 H，d，J＝17.7 Hz，3′pro-R-H），3.89（1 H，d，J＝7.5 Hz，8′pro-R-H），4.31（1 H，dd，J＝7.5，2.8 Hz，8′pro-S-H），5.13（1 H，brs，OH），6.20（1 H，s，2-H），6.80（1 H，d，J＝16.0 Hz，5-H），6.97（1 H，brs，COOH），9.04（1 H，d，J＝16.0 Hz，4-H）。13C-NMR（75 MHz，C5D5N）δ：16.3（9′-C），20.3（7′-C），21.3（6-C），49.4（6′-C），53.3（5′-C），54.2（3′-C），78.3（8′-C），82.9（1′-C），87.3（2′-C），121.1（2-C），132.6（4-C），133.8（5-C），149.3（3-C），169.1（1-C），208.8（4′-C）。以上數據與文獻［10］報道基本一致，故鑒定化合物3為菜豆酸，見圖1。

山奈酚-3-O-β-D-蕓香糖苷4：淡黃色粉末，分子式為C27H31O15，TOF-HRMS：m/z［M＋Na］＋calcd for C27H30NaO15：617.147 7，found：617.146 7。1HNMR（300 MHz，DMSO-d6）δ：0.98（3 H，d，J＝6.1 Hz，CH3），5.31（1 H，d，J＝6.9 Hz，1″-H），5.32（1 H，d，J＝4.3 Hz，1?-H），6.20（1 H，d，J＝1.7 Hz，6-H），6.41（1 H，d，J＝1.8 Hz，8-H），6.87（2 H，d，J＝8.8 Hz，3′，5′-H），7.98（2 H，d，J＝8.7 Hz，2′，6′-H），10.09（1 H，brs，4′-OH），10.81（1 H，brs，7-OH），12.56（1 H，brs，5-OH）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6）δ：17.7（6?-C），66.9（6″-C），68.3（5?-C），70.0（4″-C），70.4（2?-C），70.6（3?-C），71.9（4?-C），74.2（2″-C），75.8（5″-C），76.4（3″-C），93.8（8-C），98.7（6-C），100.8（1?-C），101.4（1″-C），104.0（10-C），115.1（3′，5′-C），120.9（1′-C），130.9（2′，6′-C），133.3（3-C），156.5（2-C），156.9（9-C），159.9（4′-C），161.2（5-C），164.1（7-C），177.4（4-C）。以上數據與文獻［11］報道基本一致，故鑒定化合物4為山奈酚-3-O-β-D-蕓香糖苷，見圖1。

松屬素-7-O-β-D-葡萄糖苷5：白色粉末，分子式為C21H22O9，ESI-MS（EI）C21H22O9：［M＋Na］＋＝441.1，［M－H］－＝417.0，［M＋Cl］－＝453.0。1HNMR（300 MHz，CD3COCD3）δ：2.86（2 H，dd，J＝3.0，17.1 Hz，3a-H，OH），3.25（1 H，dd，J＝12.8，17.1 Hz，3b-H），3.28（1 H，dd，J＝3.4，16.6 Hz，6″α-H），3.43-3.72（7 H，m，Glu-H，OH），3.88（1 H，m，Glu-H），5.09（1 H，d，J＝7.2 Hz，1″-H），5.63（1 H，dd，J＝3.0，12.7 Hz，2-H），6.16（1 H，d，J＝2.0 Hz，6-H），6.21（1 H，d，J＝2.0 Hz，8-H），7.45（3 H，m，3′，4′，5′-H），7.59（2 H，m，2′，6′-H），12.08（1 H，s，5-OH）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6）δ：42.2（3-C），60.6（6″-C），69.5（4″-C），73.0（2″-C），76.3（3″-C），77.1（5″-C），78.7（2-C），95.5（8-C），96.7（6-C），99.6（1″-C），103.3（10-C），126.8（2′，6′-C），128.6（3′，5′-C），128.7（4′-C），138.5（1′-C），162.6（9-C），163.0（5-C），165.4（7-C），196.9（C-4）。以上數據與文獻［12］報道基本一致，故鑒定化合物5為松屬素-7-O-β-D-葡萄糖苷，見圖1。

香樹素-3-O-α-L-阿拉伯糖苷6：白色粉末，分子式為C20H20O10，TOF-HRMS：m/z［M＋Na］＋calcd for C20H20NaO10：443.094 9，found：443.094 8。1HNMR（300 MHz，DMSO-d6）δ：3.03（1 H，dd，J＝3.2，11.6 Hz，6″a-H），3.10-3.58（4 H，m，ara-H），4.67（1 H，d，J＝4.4 Hz，1″-H），4.76（1 H，d，J＝8.5 Hz，3-H），5.35（1 H，d，J＝8.5 Hz，2-H），5.87（2 H，s，6，8-H），6.76（2 H，d，J＝8.5 Hz，3′，5′-H），7.25（2 H，d，J＝8.5 Hz，2′，6′-H）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6）δ：62.5（5″-C），65.6（4″-C），70.2（2″-C），71.6（3″-C），75.2（3-C），81.2（2-C），95.3（8-C），96.2（6-C），100.6（1″-C），102.5（10-C），115.1（3′，5′-C），126.5（1′-C），129.0（2′，6′-C），157.7（4′-C），162.0（9-C），163.5（5-C），167.9（7-C），194.3（4-C）。以上數據與文獻［13］報道基本一致，故鑒定化合物6為香樹素-3-O-α-L-阿拉伯糖苷，見圖1。

2，4，6-三羥基苯丁酮-2-O-β-D-葡萄糖苷7：淡黃色粉末，分子式為C16H22O9，TOF-HRMS：m/z［M＋Na］＋calcd for C16H22NaO9：381.115 6，found：381.114 9。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：0.91（3 H，t，J＝7.4 Hz，4′-H），1.58（2 H，m，3′-H），3.05（2 H，m，2′-H），3.21（1 H，m，2″-H），3.30（3 H，m，3″，4″，5″-H），3.51（1 H，m，6″-Ha），3.71（1 H，dd，J＝3.2，11.7 Hz，6″-Hb），4.92（1 H，d，J＝7.3 Hz，1″-H），5.93（1 H，d，J＝2.1 Hz，5-H），6.11（1 H，d，J＝2.1 Hz，3-H），10.59（1 H，brs，4-OH）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：13.8（4′-C），17.7（3′-C），45.5（2′-C），60.5（6″-C），69.5（4″-C），73.3（2″-C），76.9（3″-C），77.3（5″-C），94.2（3-C），96.8（5-C），100.6（1″-C），105.1（1-C），160.9（2-C），164.5（4-C），165.6（6-C），205.7（1′-C）。以上數據與文獻［14］報道基本一致，故鑒定化合物7為2，4，6-三羥基苯丁酮-2-O-β-D-葡萄糖苷，見圖1。

腺苷8：類白色粉末，分子式為C10H13O4N5。1HNMR（300 MHz，DMSO-d6＋D2O）δ：3.56（1 H，dd，J＝3.4，12.4 Hz，5′-Ha），3.66（1 H，dd，J＝3.1，12.4 Hz，5′-Hb），4.00（1 H，m，4′-H），4.14，4.56（2 H，m，2′，3′-H），5.86（1 H，d，J＝6.3 Hz，1′-H），7.28（2 H，s，NH），8.13（1H，s，2-H），8.32（1 H，s，8-H）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6）δ：61.7（5′-C），70.7（2′-C），73.5（3′-C），85.9（4′-C），88.0（1′-C），119.4（5-C），140.0（8-C），149.1（4-C），152.4（2-C），156.2（6-C）。以上數據與文獻［15］報道基本一致，故鑒定化合物8為腺苷，見圖1。

（＋）-異落葉松脂醇-9-O-β-D-葡萄糖苷9：淡黃色粉末，分子式為C26H34O11，TOF-HRMS：m/z［M＋Na］＋calcd for C26H34NaO11：545.199 3，found：545.198 7。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：1.71（1 H，m，8-H），1.90（1 H，m，8′-H），2.72（2 H，d，J＝7.8 Hz，7′-H），3.01（4 H，m，glu-H），3.11（1 H，m，glu-H），3.43（2 H，m，9，9′-Ha，），3.62（2 H，m，9，9′-Hb），3.70（3 H，s，3′-H），3.72（3 H，s，3-H），3.89（1 H，dd，J＝1.2，9.7 Hz，glu-H），3.95（1 H，d，J＝7.8 Hz，1″-H），4.04（1 H，d，J＝10.8 Hz，7-H），4.43，4.90，4.97，5.22（5 H，glu-OH，9′-OH），6.07（1 H，s，5′-H），6.49（1 H，dd，J＝1.4，8.0 Hz，6-H），6.61（1 H，s，2′-H），6.69（1 H，d，J＝8.0 Hz，5-H），6.80（1 H，d，J＝1.4 Hz，2-H），8.44（1 H，s，4′-OH），8.75（1 H，s，4-OH）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：32.6（7′-C），37.5（8′-C），44.2（8-C），45.6（7-C），55.5（3′-C），55.6（3-C），61.1（6″-C），62.8（9′-C），67.6（9-C），70.0（4″-C），73.6（2″-C），76.7（3″-C），76.9（5″-C），104.2（1″-C），111.8（2′-C），113.9（2-C），115.5（5-C），116.3（5′-C），121.2（6-C），127.1（1′-C），132.8（6′-C），137.0（1-C），144.1（4′-C），144.5（4-C），145.5（3′-C），147.2（3-C）。以上數據與文獻［15］報道基本一致，故鑒定化合物9為（＋）-異落葉松脂醇-9-O-β-D-葡萄糖苷，見圖1。

3 討論

從老鷹茶葉的乙酸乙酯和正丁醇部分分離得到9個化合物，根據其NMR、MS波譜數據及文獻值，對其結構進行分析，分別鑒定為兒茶素（1）、表兒茶素（2）、菜豆酸（3）、山奈酚-3-O-β-D-蕓香糖苷（4）、松屬素-7-O-β-D-葡萄糖苷（5）、香樹素-3-O-α-L-阿拉伯糖苷（6）、2，4，6-三羥基苯丁酮-2-O-β-D-葡萄糖苷（7）、腺苷（8）、（＋）-異落葉松脂醇-9-O-β-D-葡萄糖苷（9），化合物3～9為首次從樟科木姜子屬植物中分離得到，1和2為首次從該植物中分離得到。從老鷹茶中分離得到的化合物有黃酮類化合物、多酚類或酚酸類化合物、萜類化合物等，主要化學成分是黃酮類化合物，包括黃酮醇類、二氫黃酮類、黃烷醇類、黃烷醇駢香豆素類，這為進一步開發利用老鷹茶這一藥用資源提供了科學依據。

［1］ 李廷松.老鷹茶資源調查與開發利用［J］.貴州茶葉，1995，4：10－3.

［2］ 張義龍，湯文建，唐敏芳，等.老鷹茶正丁醇部分的化學成分［J］.安徽醫科大學學報，2012，47（9）：1063－5.

［3］ 陳玉璞，程文明，李 俊.老鷹茶中黃酮類化學成分分析［J］.安徽醫科大學學報，2008，43（1）：65－7.

［4］ 唐敏芳，湯文建，李 俊，等.豹皮樟乙酸乙酯萃取物的化學成分分析［J］.安徽醫科大學學報，2010，45（4）：509－12.

［5］ Tang W J，Lu W L，Cao X Q，et al.Two new dihydrostilbenoid gycosides isolated from the Leaves of Litsea coreana and their antiinflammatory activity［J］.Nat Prod Commun，2013，8（4）：479－80.

［6］ Tang W J，Zhang Y L，Xiao Q P，et al.Four flavanocoumarins from the leaves of Litsea coreana Levl［J］.Chem Biodivers，2013，10（6）：1128－32.

［7］ Agrawal N，Choudhary A S，Sharma M C，et al.Chemical constituents of plants from the genus Litsea［J］.Chem Biodivers，2011，8（2）：223－43.

［8］ Hemingway R W，Tobiason F L，McGraw G W，et al.Conformation and complexation of tannins：NMR spectra and molecular search modeling of Flavan-3-ols＋［J］.Magn Reson Chem，1996，34（6）：424－33.

［9］ Cren-Olivé C，Wieruszeski J M，Maes E，et al.Catechin and epicatechin deprotonation followed by13C NMR［J］.Tetrahedron Lett，2002，43（25）：4545－9.

［10］Hirai N，Kondo S，Ohigashi H.Deuterium-labeled phaseic acid and dihydrophaseic acids for internal standards［J］.Biosci Biotechnol Biochem，2003，67（11）：2408－15.

［11］Kohei K，Naonobu N，Masahiko S.Malonylated flavonol glycosides from the petals of Clitoria ternatea［J］.Phytochemistry，2003，62（2）：229－37.

［12］Guido F，Maria P，Ivano M，et al.Flavonoid glycosides from Centaurea pseudoscabiosa subsp.pseudoscabiosa from Turkey［J］.Phytochemistry，2002，61（4）：433－7.

［13］Chosson E，Chaboud A，Chulia A J，et al.Dihydroflavonol glycosides from Rhododendron ferrugineum［J］.Phytochemistry，1998，49（5）：1431－3.

［14］Li R T，Weng Z Y，Pu J X，et al.Chemical constituents from Schisandra sphenanthera［J］.Chinese Chem Lett，2008，19（6）：696－8.

［15］徐劍錕，張天龍，易國卿，等.半夏化學成分的分離與鑒定［J］.沈陽藥科大學學報，2010，27（6）：429－33.

Chemical constituents from Litsea Coreana L.

Wang Jing，Lu Weili，Zhang Yilong，et al
（School of Pharmacy，Anhui Provincial Laboratory on Bioactivity of Natural Products，Anhui Medical University，Hefei 230032）

ObjectiveTo study the chemical constituents in Litsea Coreana L.MethodsThe constituents were isolated and purified by silica gel，ODS，and Sephadex LH-20 column chromatographies as well as HPLC.Their chemical structures were elucidated on the basis of spectral data.ResultsThe compounds were isolated from the ethyl acetate and n-butyl alcohol fractions of ethanol extract and identified as Catechin（1），Epicatechin（2），Phaseic acid（3），Kaempferol-3-O-β-D-rutinose（4），Pinocembrin-7-O-β-D-glucopyranoside（5），Aromadedrin-3-O-α-L-arabinopyranoside（6），2，4，6-trihydroxybutyrophenone-2-O-β-D-glucopyranoside（7），adenoside（8），（＋）-isolariciresinal-9-O-β-D-glucopyranoside（9），respectively.ConclusionCompounds 3～9 are firstly isolated from Litsea Lam.genus，and compounds 1 and 2 are isolated from this plant for the first time.

Litsea Coreana L.；ethyl acetate；n-butyl alcohol；structure identification

R 284.1

A

1000－1492（2014）04－0479－05

2013－10－10接收

國家自然科學基金（編號：20802003）；安徽省科技攻關項目（編號：06013134B）

安徽醫科大學藥學院，安徽天然藥物活性研究省級實驗室，合肥 230032

王 靜，女，碩士研究生；湯文建，男，博士，副教授，碩士生導師，責任作者，E-mail：tangwjster＠gmail.com