馬蘭中的五個酚性化合物

季 鵬，王國凱*，劉勁松，羅爭輝，劉吉開，王 剛

1安徽中醫藥大學藥學院，現代中藥安徽省重點實驗室，合肥 230031;2 中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室，昆明 650204

馬蘭為菊科馬蘭屬植物馬蘭Kalimeris indica(L.)Sch-Bip 的帶根全草，別名馬菜、馬蘭頭、泥鰍串、雞兒腸、田邊菊等。廣泛分布于我國江蘇、浙江、江西、福建、湖南、湖北、廣東、海南、廣西、四川、貴州等地，常見于田埂、草叢、林緣、溪邊等潮濕處，具有非常豐富的研究資源［1］。馬蘭是多年生草本植物，其莖嫩葉肥、口味清香爽口、營養豐富，常作為野菜食用［2］。馬蘭常以全草或根入藥，具清熱解毒，散瘀止血，溫肺止咳，散寒止痛，消積之功效。主治感冒發熱，咳嗽，急性咽炎，扁桃體炎，流行性腮腺炎，傳染性肝炎，胃、十二指腸潰瘍等［3］。采用馬蘭治療乙肝病的臨床研究多有報道［4，5］，療效顯著。本研究組已經發表了一系列馬蘭的化學成分研究報道［6-9］，從馬蘭的乙醇提取物中分離到22 個化合物(包括三萜類、脂肪酸類、甾體類、蒽醌類等)，為了更加深入的探索馬蘭抗病毒活性的物質基礎，本研究改進提取分離方法，采用熱回流提取后，大孔樹脂富集中小極性化合物，不同濃度乙醇洗脫分段后，再分別通過硅膠柱及凝膠柱等色譜分離，以期尋找到活性先導母體化合物，結果從馬蘭全草80 %乙醇提取物中分離鑒定了5 個酚性化合物，分別是漢黃芩素(1)、千層紙素A(2)、4-羥基苯乙酮(3)、7，4'-二羥基異黃酮(4)、芹菜素(5)，所有化合物均為首次從該屬植物中分得。

1 儀器和材料

熔點由XRC-1 型顯微熔點儀測定，四川大學科儀廠生產;EI-MS 由VG AutoSpec-3000 質譜儀測定;ESI-MS 由API Qstar Pulser 質譜儀測定;核磁共振由Bruker AVANCE Ⅲ-600、DRX-500、AV-400 核磁共振波譜儀(TMS 為內標);分析型和制備型HPLC 為Agilent 1100 HPLC，色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18和YMC 柱;柱層析硅膠(80～100 目和200～300目)以及GF254薄層硅膠板均為青島海洋化工廠生產;Sephadex LH-20 為瑞典Amersham Biosciences 公司產品;AB-8 型大孔樹脂為南開大學化工廠生產;顯色方法為紫外燈下波長254 和365 nm 處觀察熒光，10% 硫酸乙醇溶液和硫酸香草醛處理后加熱顯色及碘蒸氣顯色。

馬蘭藥材2012 年4 月采自安徽合肥大蜀山，經安徽中醫藥大學方成武教授鑒定為菊科馬蘭屬植物馬蘭Kalimeris indica (L.)Sch-Bip 的帶根全草，憑證標本保存于安徽中醫藥大學天然藥物化學教研室。

2 提取與分離

馬蘭干燥帶根全草20 kg，80 %乙醇回流提取2次(300 L×2)，每次2 h，濾過，合并濾液，減壓回收溶劑，濃縮至無醇味后稀釋至80 L(即每mL 提取液相當于原藥材0.31 g)，通過AB-8 大孔樹脂(干重30 kg)吸附，即樹脂與藥材重量比=1.2∶1，然后，分別用水、40 %、60 %、80 %乙醇依次洗脫，流速8 mL/min，每個部分各洗脫4 個柱體積(直徑:柱高=20∶120 cm)，濃縮至浸膏后，得到4 個部分，80 %乙醇部分(120 g)上硅膠柱，石油醚-丙酮(100 ∶0 →0∶100)梯度洗脫得6 個組分(A、B、C、D、E、F、)。組分C(石油醚∶丙酮-50∶1)經硅膠柱，石油醚-丙酮(20∶1→0∶1)梯度洗脫得10 個亞組分，其中C2經sephadex LH-20 柱甲醇洗脫得到化合物1(22 mg)，組分D(石油醚∶丙酮-30∶1)經硅膠柱色譜，石油醚-丙酮(20∶1→0∶1)梯度洗脫得13 個亞組分，其中D3經sephadex LH-20 柱甲醇洗脫，得到化合物2(6 mg)。60%乙醇部分(200 g)上硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(100∶0→0∶100)梯度洗脫得8 個組分(G、H、I、J、K、L、M、N)。組分I(二氯甲烷∶甲醇-50∶1)，上硅膠柱，氯仿-甲醇(50∶1→0∶1)梯度洗脫，得15 個亞組分，其中I3經sephadex LH-20 柱以三氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫，得到化合物3(7 mg)，I5經sephadex LH-20 柱，甲醇洗脫，再重結晶得到化合物4(10 mg)。I8經硅膠柱色譜以三氯甲烷-甲醇(30∶1)洗脫得到化合物5(12 mg)。

3 結構鑒定

化合物1 黃色針晶，mp.203～205 ℃，易溶于丙酮，鹽酸鎂粉反應陽性;ESI-MS m/z ［M-H］-為283，分子式為C16H12O5;1H NMR(CDCl3，600 MHz)δ:12.49(1H，s，5-OH)，7.52～7.56(3H，m，H-3'，4'，5')，7.89～7.90(2H，m，H-2'，6')，6.68(1H，s，H-3)，6.43(1H，s，H-6)，4.02(s，OCH3);13C NMR(CDCl3，150 MHz)δ:182.7(s，C-4)，163.7(s，C-2)，157.9(s，C-7)，155.5(s，C-5)，149.1(s，C-9)，132.2(d，C-4')，131.4 (s，C-1')，129.5 (d，C-3'，5')，127.0(s，C-8)，126.4(d，C-2'，6')，106.1(d，C-3)，105.5(s，C-10)，99.0(d，C-6)，62.3(q，OCH3)。以上數據與文獻［10］報道一致，確定該化合物為漢黃芩素(wogonin)。

化合物2 淡黃色針狀結晶，mp.202～204 ℃，易溶于丙酮，鹽酸鎂粉反應陽性，Molish 反應陰性;ESI-MS m/z［M-H］-為283，分子式為C16H12O5;1H NMR(acetone-d6，600 MHz)δ:12.59(1H，s，5-OH)，9.51(1H，s，7-OH)，8.11(2H，m，H-2'，6')，7.73～7.56(3H，m，H-3'，4'，5')，6.83(1H，s，H-3)，6.33(1H，s，H-8)，3.96(3H，s，OCH3);13C NMR(acetone-d6，150 MHz)δ:183.3(s，C-4)，164.4(s，C-2)，158.2(s，C-7)，153.9(s，C-5)，153.7(s，C-9)，132.8(d，C-4'，6)，132.3(s，C-1')，130.1(d，C-3'，5')，127.2(d，C-2'，6')，106.1(d，C-3)，105.4(s，C-10)，95.8(d，C-8)，61.9(q，OCH3)。以上數據與文獻［11］報道一致，確定該化合物為千層紙素A(oroxylin A)。

化合物3 白色針晶，mp.108～111 ℃，ESI-MS m/z ［M+H］+137，［M+Na］+159，分 子 式C8H802;1H NMR(acetone-d6，600 MHz)δ:7.89(2H，d，J=8.8 Hz，H-2，6)，6.91(2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5)，2.48(3H，s，CH3);13C NMR(acetone-d6，150 MHz)δ:199.2(s，C-7)，162.7(s，C-4)，131.5(d，C-2，6)，130.4(s，C-1)，116.0(d，C-3，5)，26.3(q，C-8)。以上數據與文獻［12］報道一致，確定該化合物為4-羥基苯乙酮(4-hydroxyacetophenone)。

化合物4 白色粉末，mp.309～311 ℃，ESI-MS m/z［M+H］+為255，分子式C15H10O4;1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ:8.12(1H，s，H-2)，7.88(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，6.94(1H，d，J=8.5 Hz，H-6)，6.91(1H，s，H-8)，7.36(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，6')，6.84(2H，d，J=8.0 Hz，H-3'，5');13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ:178.3(s，C-4)，164.7(s，C-7)，158.8(s，C-4')，158.2(s，C-9)，154.8(d，C-2)，131.5(d，C-2'，6')，128.6(d，C-5)，126.0(s，C-1')，124.4(s，C-3)，118.2(s，C-10)，116.5(d，C-6)，116.3(d，C-3'，5')，103.3(d，C-8)。以上數據與文獻［13］報道基本一致，確定該化合物為7，4'-二羥基異黃酮(7，4'-dihydroxyisoflavone)。

化合物5 淡黃色無定形粉末，mp.210～212℃，ESI-MS m/z［M-H］-為269，分子式C15H10O5;1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ:7.37(2H，d，J=8.6 Hz，H-2'，6')，6.91(2H，d，J=8.6 Hz，H-3'，5')，6.58(1H，s，H-3)，6.42(1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，6.18(1H，d，J=2.2 Hz，H-6);13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ:183.9(s，C-4)，166.9(s，C-2)，166.3(s，C-7)，163.3(s，C-9)，162.9(s，C-4')，159.6(s，C-5)，129.6(d，C-2'，6')，123.3(s，C-1')，117.1(d，C-3'，5')，105.2(s，C-10)，103.8(d，C-3)，100.4(d，C-6)，95.3(d，C-8)。以上數據與文獻［14］報道一致，確定該化合物為芹菜素(apigenin)。

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