黃芪多糖對5/6腎切除大鼠的腎保護作用研究

戴 芹 曲曉璐 唐詠華 李華萍

（上海市浦東新區浦南醫院，上海200125）

慢性腎臟病患者存在氧化應激反應增強，氧化應激加重了腎臟疾病的發生和發展，同時是引起心血管以及神經系統等其他臟器發病的重要因素之一[1]。氧化應激是與慢性腎臟病患者的預后密切相關的因素[2]。觀察慢性腎臟病患者體內的氧化應激水平并予以干預，有利于慢性腎臟病及其并發癥的防治。中藥黃芪是一味重要的補氣藥物，有多篇文獻報道黃芪或以黃芪為主藥的中藥具有改善慢性腎衰患者腎功能的作用。我們前期的研究也發現5/6腎切除模型大鼠體內呈氧化應激狀態，中藥黃芪對模型大鼠具有一定的改善腎功能及抗氧化作用，且呈劑量依賴性[3-4]。為了進一步研究黃芪抗氧化作用的具體有效成分，我們對黃芪的主要成分——黃芪多糖進行了深入研究，現報道如下。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 6～8周齡Wister雄性大鼠30只，體重160～180g。由中國科學院上海實驗動物中心提供。所有動物在同一動物房中飼養，自由進食和飲水，常規環境適應性飼養3d后進行實驗。

1.2 實驗藥物 黃芪多糖，由上海中藥現代化研究中心提供。

1.3 儀器與試劑 相關指標（腎功能、血脂及SOD、MDA）試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

2 實驗方法

2.1 造模與分組 大鼠在鼠籠內適應3d后，將其按體重隨機分成2組：假手術組10只和造模組20只。采用經典的platt法建立慢性腎衰模型[5]。方法如下：戊巴比妥按20mg/kg的劑量麻醉大鼠。將大鼠左側肋骨靠背部的皮膚備皮，酒精棉球消毒，大鼠仰臥，下肢交叉固定于大鼠板上，左肋緣下約0.5cm處用手術刀片切一約1.5cm的切口，輕輕擠壓可見腎臟，仔細分離腎周脂肪和腎包膜，上下端各切除1/3腎組織，手術創面滴加凝血酶溶液止血，待創面無明顯出血后將殘腎放入腹腔，分層縫合肌肉和皮膚。1周后，同樣麻醉后打開右側腎臟，分離脂肪和腎包膜后結扎右腎，切去右腎，縫合肌肉和皮膚。2次手術共切去雙腎的5/6。假手術組大鼠采用同樣步驟：切開左、右側肋緣靠背部皮膚及肌肉層，輕壓出腎臟，分離腎包膜，不予腎切除。于右腎切除后28d，鼠尾靜脈采血檢測SCr值。造模組大鼠死亡1只，剩余19只模型大鼠根據所測SCr值隨機分為腎衰模型組9只、黃芪多糖干預組10只。

2.2 給藥方法 29只大鼠均正常飲水和進食，其中黃芪多糖組予黃芪多糖水溶劑（1000mg·kg-1·d-1，2mL/d）灌胃[6]；其余2組大鼠同時每天予飲用水2mL灌胃。每日1次，灌胃時間為8周。

2.3 標本采集和指標檢測 灌胃8周后戊巴比妥麻醉，行下腔靜脈采血。取血3mL不抗凝，離心后分離以備檢測尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）及血脂；取腎組織用液氮速凍后置于-80℃冰箱備用。腎功能及血脂由上海中醫藥大學安評中心應用全自動生化儀檢測。按照試劑盒的說明檢測大鼠腎組織超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。

2.4 統計學方法 采用SPSS16.0軟件統計數據，實驗結果以（x±s）表示，數值比較采用 One-Way ANOVA，統計學差異的標準為 P＜0.05。

3 實驗結果

灌胃期間腎衰模型組大鼠死亡1只，黃芪多糖干預組死亡1只。

3.1 各組大鼠干預后腎功能情況 見表1。

表1 各組大鼠干預后Scr、BUN含量比較（x±s）

3.2 各組大鼠干預后血脂情況 見表2。

表2 各組大鼠干預后血脂指標比較（x±s）

3.3 各組大鼠干預后腎組織SOD與MDA含量比較 見表3。

表3 各組大鼠干預后腎組織SOD、MDA含量比較（x±s）

4 討論

黃芪是一味重要的具有益氣固表作用的中藥。研究發現，黃芪富含硒等微量元素，能保護腎小球基底膜的電荷屏障和機械屏障，使得腎小球基底膜通透性降低，減少尿蛋白，抑制腎臟肥大，使得白蛋白合成增加，腎臟血流量增加，從而達到降低尿蛋白的作用[7-8]。我們在前期研究中也發現，黃芪具有腎保護作用，與其抗氧化作用有關[4]。丁瑞恒等[9]用黃芪干預經晚期糖基化終末產物作用的系膜細胞，發現其能抑制系膜細胞的增殖，增加系膜細胞膜表面的負電荷，并且對抗AGEs誘導凋亡的作用，對系膜細胞有良好的保護作用，也間接地證明了黃芪具有很好的抗氧化作用。

黃芪多糖為黃芪的有效成分之一，有臨床研究發現：黃芪多糖具有益氣通瘀、補脾腎而助氣化的功效，而益氣通瘀藥物可以促進血液流動，阻止腎小球增大，改善腎功能，并再次證實黃芪多糖具有一定的降脂作用，可明顯降低患者的TC和LDL-C，升高保護性HDL-C水平，促進腎臟微循環，從而保護腎臟[10]。吳朝妍等[6]實驗中發現黃芪多糖可以抑制NF-κB和TGF-β1的表達，促進腎組織細胞外基質的降解，從而延緩腎小球硬化。所以，黃芪多糖能改善微循環，糾正脂質代謝紊亂，增加腎臟血供，減少血脂在腎小球和腎間質的沉積和微血栓的形成，從而改善腎功能，防止腎小球硬化[11]。

腎大部切除的大鼠模型是動物實驗中經典的慢性腎衰模型。本研究中我們觀察到：腎衰模型組大鼠BUN、SCr較假手術組顯著升高，再次體現了該模型的可重復性。目前普遍認為，慢性腎臟病時氧化應激反應增強，導致蛋白質、脂質、碳水化合物及核酸的過氧化等[12]。目前檢測氧化應激水平主要通過檢測體內氧化應激產物和還原酶系。脂質過氧化最終產生的物質為丙二醛，SOD的唯一底物為超氧陰離子，它是酶類的清除劑，是抗氧化作用的重要成分。在生理情況下，人體內的Mn–SOD和Cu-SOD可迅速地催化超氧陰離子自由基轉化為過氧化氫，促過氧化氫在過氧化氫酶的作用下生產水和氧分子，完全滅活了氧自由基，阻斷其對腎臟組織細胞的氧化損傷反應。慢性腎功能不全患者SOD明顯缺乏，過量的氧自由基引起腎組織細胞損傷及循環系統等其他組織器官損傷。本研究中我們觀察到，腎衰模型組大鼠SOD活性明顯降低，MDA水平顯著升高，表明了模型大鼠體內亦呈明顯的氧化應激狀態。與腎衰模型組相比，黃芪多糖干預8周后，血尿素氮和肌酐水平明顯下降，腎功能明顯改善。黃芪多糖干預組大鼠HDL水平明顯增高，TC、LDL水平明顯降低，腎組織中的MDA濃度顯著的下降，SOD活性顯著上升，表明了黃芪多糖能夠很好地改善大鼠體內的氧化應激狀態。

綜上所述，黃芪多糖對慢性腎衰大鼠有一定的腎保護作用，其可能的機制與改善模型大鼠的脂質代謝，發揮其抗氧化作用有關。上述實驗結果為我們臨床上應用黃芪多糖治療慢性腎病患者，改善其脂質代謝紊亂，延緩其腎衰進程提供了實驗依據。

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[4] 戴芹，曲曉璐，唐詠華.黃芪對慢性腎功能衰竭大鼠SOD和MDA的影響.中國中西醫結合腎病雜志，2008，9（12）：1083

[5] Platt R，Roscoe MH，Smith FW.Experimental renal failure.Clin Sci （Lond），1952，11（3）：217

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[8] 翟學文，綦秀麗，牛玉平.腎綜合征出血熱發熱期加用黃芪注射液合參麥注射液療效觀察.中國中西醫結合急救雜志，2001，8（3）：156

[9] 丁瑞恒，廖蘊華.黃芪對晚期糖基化終末產物作用下腎小球系膜細胞的影響.江蘇中醫藥，2011，43（3）：82

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