產γ-氨基丁酸乳酸菌及其應用

李理，劉冶，滿朝新，姜毓君,

（1.東北農業大學 食品學院 乳品科學教育部重點實驗室，哈爾濱 150030；2.筑波大學生命環境科學研究科，日本筑波3058572；3.東北農業大學 黑龍江省乳品工業技術開發中心，哈爾濱 150028）

0 引 言

γ-氨基丁酸 （gamma-aminobutyric acid，GABA）又名4-氨基丁酸、γ-氨酪酸，是一種在自然界廣泛分布的非蛋白質氨基酸，動物、植物和微生物甚至一些生存在極端環境中的微生物體內均分離得到了GABA。GABA早期被研究者確定為哺乳動物神經中樞的一種抑制性神經遞質，此后GABA其他生物學功能也逐漸被發現并得到確認[1]。Hayakawa等人通過比較GABA灌胃自發性高血壓癥小鼠和血壓正常小鼠后的收縮壓，證明GABA可以通過抑制交感神經釋放去甲腎上腺素來抑制血壓的升高[2]。臨床實驗還證明適當提高病人血液中GABA水平可有效減少抑郁和神經紊亂的發生，具有一定鎮靜安神和營養神經的功效[3,4]。近年來，更多與GABA相關的生物學特性也相繼被報道。口服一定量GABA可以增加血漿中生長激素含量，促進腦部蛋白的合成[5]；抑制由丙二醛引起的一系列脂質過氧化反應，減緩氧化對機體造成的損傷[6]。不僅如此，GABA還能夠減少周身性免疫因子的產生并抑制炎癥的發生[7]。正因為GABA具有上述多種生理方面的益生作用，使得它成為近年來食品和藥品領域關注和研究的重點。

目前，GABA的合成方法主要有化學法和生物法。與化學合成相比，生物合成具有方法簡單、條件溫和、合成效率高以及耗能低等優勢[8]。生物合成主要是利用代時短、易培養的微生物，以谷氨酸（Glu）或其鹽類為底物通過谷氨酸脫羧酶對底物進行脫羧從而合成GABA。由于乳酸菌具有特殊的生理活性如免疫調節，促進營養吸收、改善腸道內環境，抑制致病菌增殖等[9,10]，另外還被認為是食品安全級的微生物，因此近年來食品和藥品行業將乳酸菌作為合成GABA的首選，同時相關領域的專家和學者也在對如何提高乳酸菌合成GABA的能力進行深入研究。本綜述主要從產GABA乳酸菌的種類及來源、產GABA乳酸菌的篩選方法、乳酸菌合成GABA的影響因素以及高產GABA乳酸菌的應用等方面來進行介紹和總結。

1 產GABA乳酸菌的種類及來源

具有合成GABA能力的乳酸菌種類較多且合成能力因菌株的種屬不同而差異較大。許多研究表明，來源多樣的短乳桿菌Lactbacillus brevis合成GABA的能力比較突出。泡菜是高產GABA乳酸菌的重要來源之一，從泡菜中篩選得到高產GABA的短乳桿菌也比較多，Park和Oh從韓國傳統泡菜中分離得到一株產GABA的短乳桿菌，在MRS培養基中其GABA產量為8 mmol/L左右[11]。Min和Keun也從韓國泡菜中分離得到若干種能夠產生GABA乳酸菌，其中一株短乳桿菌GABA的產量也比較高[12]。中國傳統發酵食品酸菜中也分離到高產GABA的短乳桿菌[8]。除泡菜和酸菜外，研究人員在其他發酵食品中也分離得到了具有合成GABA能力的短乳桿菌，Siragusa等人從意大利干酪中分離出一株短乳桿菌，其GABA產量為15.0 mg/kg干酪[13]。不僅如此，2012年首次從人體腸道中分離出一株能夠利用谷氨酸作為底物合成GABA的短乳桿菌Lb.brevis DPC6108[14]。另外，一些從其他來源分離到的產GABA的短乳桿菌也有相應報道，如Lb.brevis NBRC12,005[15]，Lb.brevis IFO-12005[16]和Lb.brevis GABA 057[17]。

除短乳桿菌外，植物乳桿菌[13]、副干酪乳桿菌[18]、布氏乳桿菌[16]和德式乳桿菌[13]等也都具有較好的GABA合成能力。從干酪中分離出來的植物乳桿菌Lb.plantarum C48在乙酸鈉緩沖液和復合發酵面粉中GABA的產量分別為16.0 mg/kg[13]和504 mg/kg[20]；Di等人也從干酪中分離出一株高產GABA的植物乳桿菌Lb.plantarum DSM19463，MRS純培養條件下可產生498.1 mg/L的GABA[21]。泡菜中也分離得到了一些具有合成GABA能力的植物乳桿菌，如Lb.plantarum KCQ1，Lb.plantarum KC-R1和Lb.plantarum KC-R36[12]。不僅乳桿菌能夠合成GABA，乳酸菌家族中一些球菌，如嗜熱鏈球菌和乳酸乳球菌及其亞種[22]也能夠生成GABA且產量各異。有文獻報道，泡菜[23]，酸奶[24]，干酪[25]和干酪發酵劑[26]中都分離得到了能夠合成GABA的乳酸乳球菌，其中Lu等人從泡菜中分離出來的Lactococcus.lactis subsp.lactis合成GABA能力最強，MRS中GABA產量可達到7.2 g/L[23]。除上述分離于乳制品中的乳酸菌外，來源于發酵水產品的香腸乳桿菌Lb.farciminis[27]，來源于泡菜的清酒乳桿菌Lb.sakei B2-16[28],腸系膜明串珠菌Leuconostoc mesenteroides，乳明串珠菌Leuconostoc lactis和綠色魏斯氏菌Weissella viridescens[12]以及來源于發酵肉質品中的戊糖片球菌Pediococcus pentosaccus HN8和Lb.namurensis NH2[29]都能夠合成GABA。

從上述文獻報道中不難發現，合成GABA能力較強的乳酸菌主要有短乳桿菌、植物乳桿菌、副干酪乳桿菌和乳酸乳球菌，且這些菌種的來源大多集中在一些酸性發酵食品中，如泡菜、干酪和酸奶等。這些事實表明大部分能夠合成GABA的乳酸菌應該是嗜酸性的，并且能夠利用酸性環境中某些特殊成分不斷產生并積累GABA，這一點不僅為產GABA乳酸菌的篩選做出了提示，也說明了pH是影響乳酸菌合成GABA的因素之一。

2 產GABA乳酸菌的篩選方法

篩選具有合成GABA能力的乳酸菌是相關研究工作的第一步，目前主要以GABA的產量作為篩選依據。GABA的檢測方法較多，例如氨基酸分析儀法[21]、氣相色譜法[26]、高效液相色譜法[22],液相色譜串聯質譜法[30]和流動注射分析法[31]。上述幾種方法檢測準確、靈敏度高，但需要昂貴的儀器和復雜的樣品前處理，對于直接從復雜基質中篩選菌株更加費時費力，因此為了減少篩菌工作量并降低成本，有必要先采用較簡單的方法對菌株進行初步篩選。Li等人[32]從泡菜中分離出1 000多株乳酸菌，他們先采用紙層析色譜法對具有合成GABA能力的菌株進行初步篩選，再利用高效液相色譜法對疑似菌株GABA產量進行測定，最后采用液相-質譜聯用的方法對結果進行驗證。采用不同手段對乳酸菌進行分階段篩選不僅保證了篩選結果的準確性，同時大大節約了篩選時間和成本。

除了分級篩選的方法，還有一些操作簡單、平行性好，適合樣本數量較大的菌株篩選的方法。薄層色譜法（TLC）是一種快速分離和定性分析少量物質的檢測技術。Cho等人[19]將從泡菜中分離到的乳酸菌經過培養后，培養上清液采用TLC檢測其中GABA含量，由于此方法不需要復雜的檢測設備和繁瑣的樣品處理，許多產GABA乳酸菌的篩選都選擇此種方法，或者做為初篩的方法[11,16,18]；還有一種方法是基于一系列與GABA相關的酶反應，利用生成特定產物間接檢測GABA含量，同時結合光譜法和酶標儀，使得一次可以檢測96個樣品，實現了產GABA乳酸菌的高通量篩選，這種方法與高效液相色譜法相比具有快速、簡便的優勢[15]。

選擇一種合適的GABA定性或定量的方法對于產GABA乳酸菌篩選工作的順利進行至關重要，考慮到實驗條件、樣本大小、篩選成本和其他因素的限制，有時可能需要多種檢測手段結合起來才能完成菌株篩選工作。

3 乳酸菌合成GABA的影響因素

影響乳酸菌合成GABA的因素有很多，不同發酵條件會影響GABA的產量和產率，其中主要因素有底物Glu及其鹽類的添加量、輔酶磷酸吡哆醛(PLP)的添加量、pH值、發酵時間和發酵基質。這些主要因素之所以能夠顯著影響GABA的產量其原因在于上述因素能夠影響GABA酶促反應中關鍵酶—谷氨酸脫羧酶的活性，許多針對乳酸菌GABA產量優化的研究也正是通過優化谷氨酸脫羧酶的活性來實現提高菌株合成GABA的能力。

3.1 底物及輔酶的影響

乳酸菌中GABA主要是通過谷氨酸脫羧酶催化底物Glu及其鹽類進行脫羧反應產生的，因此底物濃度會直接影響GABA產生的數量和速率；另外PLP是轉氨酶和脫羧酶類的輔酶，它能夠促進谷氨酸的脫羧，促進GABA的產生，因此輔酶的添加量也是影響GABA產量的重要因素之一。在MRS培養基中添加一定量的Glu和PLP使得Lb.paracasei NFRI 7415合成GABA的能力明顯提高，當底物添加量為500 mmol/L時GABA產量最高可達到 161 mmol/L[18]。Lb.plantarum DSM1946在添加了18.4 mmol/L L-谷氨酸鈉（L-MSG）的葡萄汁和乳清中GABA的產量為4.83 mmol/L，較不添加底物和輔酶時有所提高[24]。短乳桿菌是產GABA能力較強的菌株之一，其合成GABA能力也受到底物和輔酶濃度的影響。Hang等人[33]和Li等人[34]都通過優化L-MSG和PLP的添加量來提高短乳桿菌GABA的產量。還有文獻報道，在Glu含量比較豐富的發酵豆乳中短乳桿菌產GABA的量高于其在一般發酵乳中的產量[35]。但也有文獻指出，適量提高培養基中谷氨酸鈉的濃度對一些乳酸菌GABA的產量沒有影響[22]，這表明Glu及其鹽類對于提高乳酸菌產GABA的能力具有一定的種屬特異性，或者在這些乳酸菌中可能存在其他GABA合成的途徑。類似的，對于某些乳酸菌而言，PLP的增加也沒有提高其合成GABA的能力，這可能是由于基質中或菌株本身就能夠提供充足的內源性輔酶[21]。

3.2 發酵pH值的影響

乳酸菌合成GABA的能力主要受到谷氨酸脫羧酶活性的影響，不同乳酸菌中谷氨酸脫羧酶的性質不同導致了GABA最大量積累時的pH值具有種屬特異性。植物乳桿菌Lb.plantarum DSM1946在pH為6.0時合成GABA的速率最大[21]；副干酪乳桿菌Lb.paracasei NFRI 7415產GABA的最適pH為5.0左右[18]；而短乳桿菌Lb.brevis GABA057能夠在更酸性的環境下，pH約為4.2時將10%的底物轉換成GABA[17]。在干酪中篩選得到的合成GABA能力較強的幾株乳酸菌，它們產GABA的最適pH值也大都集中在4～6的范圍內[13]，上述文獻表明大部分乳酸菌的谷氨酸脫羧酶是酸性依賴的，但也有例外的情況。LU等人[23]優化了Lc.lactis富集GABA的發酵條件，他們發現該菌株最大程度積累GABA的pH值為7.5～8.0，當pH超過8.0后菌株合成GABA能力明顯下降，這說明了就發酵pH值這一影響因素來說，乳桿菌和乳球菌積累GABA的條件差異較大。

3.3 發酵時間的影響

GABA作為乳酸菌的一種次級代謝產物其積累量受發酵時間影響較大，每種乳酸菌都有各自的生長特性，從發酵開始在不同的時間點進入對數生長期和穩定期，因此GABA的最大積累時間也有所不同。以乳桿菌為例，副干酪乳桿菌Lb.paracasei NFRI 7415最大積累GABA的時間是植物乳桿菌Lb.plantarum DSM19463積累時間的2倍[18,21]。另外，發酵時間、發酵溫度和發酵pH值會相互作用從而影響GABA的最終積累量。短乳桿菌Lb.brevis GABA 100在黑樹莓汁中發酵第15天時GABA的積累量達到最大，而當pH和發酵溫度有較大變化時，則在第12天就達到了最大積累量[36]。一些研究還通過在發酵過程的不同時間點添加底物或輔酶來增加乳酸菌合成GABA的量，這樣做也是考慮到發酵時間會對終產物積累量產生影響[22,23]。

3.4 發酵基質及培養基添加物的影響

培養基中不同種類的碳源會直接影響乳酸菌GABA的產量。在阿拉伯糖、核糖、D-木糖、半乳糖、葡萄糖、果糖和麥芽糖等多種碳源中，短乳桿菌Lactobacillus brevisNCL912合成GABA的最佳碳源是1.25%的葡萄糖[34]。Raffaella等人為了探索Lactobacillus plantarum DSM19463產GABA的最佳碳源，他們向培養基中添加不同量的葡萄汁，結果發現當葡萄汁的添加量為總碳源的4%時，菌株合成GABA的量最大[21]。Lu等人還采用D-optimal mixture design的方法優化了培養基中三種主要營養物質的添加比例，當黑米汁∶發酵大豆汁∶酶解脫脂乳=33∶58∶9時乳酸乳球菌Lc.lactic B產GABA的量最高，可達到6.41 g/L[24]。除了培養基中主要的營養成分會影響GABA的積累，一些額外添加的成分也會影響乳酸菌合成GABA的能力。很早就有文獻報道，適量的硫酸根離子可以增加谷氨酸脫羧酶的活性，促進GABA的合成且具有濃度依賴性。向培養基中分別加入硫酸銨、硫酸鈉和硫酸鎂短乳桿菌Lb.brevis IFO 12005合成GABA的量均有不同程度的提高，其中硫酸銨提高的效果最為明顯[37]。在一些能夠產生GABA的植物和谷物中，某些金屬離子（如鈣離子）作為酶的活性中心也可以增加谷氨酸脫羧酶的活性，有利于GABA的積累[38]，但在乳酸菌發酵過程中添加適量的鈣離子能否增加谷氨酸脫羧酶的活性并提高GABA產量還需要進一步研究和驗證。

4 高產GABA乳酸菌在乳制品中的應用

近年來，人們對健康的關注度越來越高，消費者希望購買具有益生保健功能食品的愿望也越來越強烈。γ-氨基丁酸是一種天然的生物活性物質，開發富含GABA的保健食品具有廣闊的市場價值；同時乳酸菌作為一種公認的食品級安全微生物其多種保健功能已逐漸被認可，因此使用具有產GABA能力的乳酸菌作為發酵劑生產富含GABA的乳制品能夠將乳酸菌和GABA兩者的益生功能加以結合。

目前，許多研究者都致力于開發富含GABA的乳制品，如酸奶[35]、發酵豆奶[39]、干酪[26]、發酵乳及發酵乳飲料[40]等等，但由于乳酸菌合成GABA的能力各異，且乳酸菌的種類及其作為發酵劑時的添加量都對發酵乳制品的感官品質尤其是風味影響較大，因此選擇合適的產GABA的菌株作為發酵劑是生產富含GABA乳制品的關鍵。另外，已報道的能夠產GABA的乳酸菌大部分需要以谷氨酸或其鹽類作為底物，因此向乳制品中添加較多的谷氨酸或谷氨酸鹽以保證GABA的產量不僅影響乳制品本身的風味和口感，也增加了產品生產成本，同時谷氨酸攝入量較多也不利于機體健康。今后，研制富含GABA發酵乳制品時應當不僅考慮發酵劑乳酸菌產GABA的能力，同時更應該注意菌株是否能將底物盡可能多的轉化成我們需要的產物，以減少底物殘留對產品口感的影響。因此，篩選能夠高效利用谷氨酸或谷氨酸鹽產生GABA的乳酸菌，將會是開發富含GABA的發酵乳制品未來方向。

5 總結與展望

利用乳酸菌合成γ-氨基丁酸是一種經濟、安全、環保生產高附加值天然活性物質的重要手段。具有合成GABA能力的乳酸菌種類較多且合成能力具有種屬差異，因此從食品中或與食品相關環境中篩選高產GABA的乳酸菌是研究產GABA乳酸菌性質和開發相關產品的基礎。乳酸菌合成GABA的影響因素有很多，其中一些因素還會相互作用、綜合影響GABA的終產量。

谷氨酸脫羧酶的活性與GABA產量密切相關，目前對乳酸菌GABA產量的優化主要從優化該酶活性入手，與之相關的影響因素研究的也比較透徹。但與GABA代謝相關的酶除谷氨酸脫羧酶還有GABA轉氨酶和琥珀酸半醛脫氫酶等[38]，因此找到影響其他關鍵酶活性的因素并研究這些因素是否影響乳酸菌產GABA的能力對理解和分析乳酸菌GABA的整體代謝途徑至關重要，同時也有助于構建乳酸菌中GABA合成與分解的代謝通路。

[1]葉惟憐.γ-氨基丁酸的發現史[J].生理科學進展,1986,17(2):187-189.

[2]HAYAKAWA K,KIMURA M,KATSUO K.Mechanism Underlying Gamma-aminobutyric acid-induced Antihypertensive Effect in Spontaneously Hypertensive Rats[J].Eur.J.Pharmac.,2002,438:107-113.

[3]JAMES M B,GERARD M F,GERALD L K,et al.Plasma GABA Levels Correlate with Aggressiveness in Relatives of Patients with Unipolar Depressive Disorder[J].Psychiatry Research,2001,101:131-136.

[4]WONG C G,BOTTIGLIERI T,SNEAD O C.GABA,Gamma Hydroxybutyric Acid,and Neurological Disease[J].Ann.Neurol.,2003,54:3-12.

[5]TUJIOKA K,OHSUMI M,HORIE K,et al.Dietary Gamma-aminobutyric Acid Affects the Brain Protein Synthesis Rate in Ovariectomized Female Rats[J].J.Nutr.Sci.Vitaminol.,2008,55:75-80.

[6]DENG Y,HE N T,XU L J,et al.New Function of Two Non-protein Amino Acids:Mechanism of Interaction with Malondialdehyde[J].Acta Chimica Sinica,2010,68(23):2457-2462.

[7]NEPTON S,HONGMIN Q,MILA A,et al.GABA Exerts Protective and Regenerative Effects on Islet Beta Cells and Reverses Diabetes[J].National Acad Sci.,2011,108(28):11692-11697.

[8]LI H,QIU T,GAO D,et al.Medium Optimization for Production of Gamma-aminobutyric Acid by Lactobacillus brevis NCL912[J].Amino Acid,2010,38:1439-1445.

[9]TANNOCK G W.A Special Fondness for Lactobacilli[J].Appl.Environ.Microbiol.,2004,70:3189-3194.

[10]HWANHLEM N,WATTHANASAKPHUBAN N,RIEBROY S,et al.Probiotic Lactic Acid Bacteria from Kung-Som:Isolation,Screening,Inhibition of Pathogenic Bacteria[J].Int.J.Food Sci.Technol.,2010,45:594-601.

[11]PARK K B,OH S H.Production and Characterization of GABA Rice Yogurt[J].Food Sci.Biotech.,2005,14:518-522.

[12]MIN J K,KEUN S K.Isolation and Identification of γ-Aminobutyric Acid(GABA)-producing Lactic Acid Bacteria from Kimchi[J].J.Korean Soc.Appl.Biol.Chem.2012,55:777-785.

[13]SIRAGUSA S,DE A M,DI C R,et al.Synthesis of γ-Aminobutyric Acid by Lactic Acid Bacteria Isolated from a Variety of Italian Cheeses[J].Appl.Environ.Microbiol.2007,73:7283-7290.

[14]BARRETT E,ROSS R P,O’TOOLE P W,et al.γ -Aminobutyric Acid Production by Culturable Bacteria from the Human Intestine[J].J.Appl.Microbio.,2012,113:411-417.

[15]TADAYUKI T,TOMOKO H,KIYOSHI M.Enzyme-based Microtiter Plate Assay for γ-Aminobutyric Acid:Application to the Screening of γ-Aminobutyric Acid-producing Lactic Acid Bacteria[J].Analytica Chimica Acta,2005,504:293-297.

[16]YOKOYAMA S,HIRAMATSU J,HAYAKAWA K.Production of Gamma-aminobutyric Acid from Alcohol Distillery Lees by Lactobacillus brevis IFO-12005[J].J.Biosci.Bioeng.,2002,93:95-97.

[17]CHOI S I,LEE J W,PARK S M,et al.Improvement of Gammaaminobutyric Acid (GABA)Production Using Cell Entrapment of Lactobacillus brevis GABA057 [J].J.Microbiol.Biotechnol.,2006,16:562-568.

[18]KOMATSUZAKI N,SHIMA J,KAWAMOTOA S,et al.Production of γ-Aminobutyric Acid (GABA)by Lactobacillus paracasei Isolated from Traditional Fermented Foods[J].Food Microbiol.,2005,22:497-504.

[19]CHO Y R,CHANG J Y,CHANG H C.Production of Gammaaminobutyric Acid (GABA)by Lactobacillus buchneri Isolated from Kimchi and its Neuroprotective Effect on Neuronal Cells[J].J.Microbiol.Biotechnol.,2007,17:104-109.

[20]CODA R,RIZZELLO C G,GOBBETTI M.Use of Sourdough Fermentation and Pseudo-cereals and Leguminous Flours for the Making of a Functional Bread Enriched of γ-aminobutyric Acid (GABA)[J].Int.J.Food Microbiol.,2010,137:236-245.

[21]DI C R,MAZZACANE F,RIZZELLO C G,et al.Synthesis of γ-Aminobutyric Acid (GABA)by Lactobacillus plantarum DSM19463:Functional Grape Must Beverage and Dermatological Applications[J].Appl.Microbiol.Biotechnol.,2010,86:731-741.

[22]YANG S Y,LU F X,LU Z X,et al.Production of γ-Aminobutyric Acid by Streptococcus salivarius subsp.thermophilus Y2 under Submerged Fermentation[J].Amino Acids,2008,34:473-478.

[23]LU X,XIE C,GU Z.Optimisation of Fermentative Parameters for GABA Enrichment by Lactococcus lactis[J].Czech.J.Food Sci.,2009,27(6):433-442.

[24]LU X,XIE C,GU Z.Isolation of γ-Aminobutyric Acid Producing Bacteria and Optimization of Fermentative Medium[J].Biochem.Eng.J.,2008,41:48-52.

[25]RIZZELLO C G,CASSONE A,CAGNO R,et al.Synthesis of Angiotensin I-Converting Enzyme (ACE)-Inhibitory Peptides and γ-Aminobutyric Acid(GABA)During Sourdough Fermentation by Selected Lactic Acid Bacteria[J].J.Agric.Food Chem.,2008,56:6936-6943.

[26]LACROIX N,ST-GELAISD,CHAMPAGNECP.Gammaaminobutyric Acid-producing Abilities of Lactococcal Strains Isolated from Old-style Cheese Starters[J].Dairy Sci.Technol.,2013,93:315-327.

[27]SU M T,TAKESHI K,TIANYAO L,et al.Isolation,Characterization,and Utilization of γ-Aminobutyric Acid (GABA)-producing Lactic Acid Bacteria from Myanmar Fishery Products Fermented with Boiled Rice[J].Fish Sci.,2011,77:279-288.

[28]YONG C S,WOON Y C,?JI S K,et al.Enhancement of the Cognitive Effects of Gamma-aminobutyric Acid from Monosodium Glutamate Fermentation by Lactobacillus sakei B2-16 [J].Food Biotechnol.,2012,26(2):29-44.

[29]ANUSSARA R,DUANGPORN K,WILAWAN C,et al.Enhancement of γ-Aminobutyric Acid (GABA)in Nham (Thai fermented pork sausage)Using Starter Cultures of Lactobacillus namurensis NH2and Pediococcus pentosaceus HN8[J].Int.J.Food Microbiol.,2013,167:170-176.

[30]KERSTIN B,PATRIZIA V,BORIS F.Rapid Analysis of GABA and Glutamate in Microdialysis Samples using High Performance Liquid Chromatography and Tandem Mass Spectrometry [J].J.Neurosci.Mehtods,2009,182(1):78-84.

[31]HORIE H,RECHNITZ G A.Enzymatic Flow-injection Determination of Gamma-aminobutyric Acid[J].Anal.Lett.,1995,28:259-266.

[32]HAIXING L,DANDAN G,YUSHENG C.A High γ-Aminobutyric Acid-producing Lactobacillus brevis Isolated from Chinese Traditional Paocai[J].Annals Microbio.,2008,58(4):649-653.

[33]HUANG J,MEI L,WU H,et al.Biosynthesis of γ-Aminobutyric Acid(GABA)Using Immobilized Whole Cells of Lactobacillus brevis[J].World J.Microbiol.Biotechnol.,2007,23:865-871.

[34]LI H,QIU T,HUANG G,et al.Production of Gamma-aminobutyric Acid by Lactobacillus brevis NCL912 Using Fed-batch Fermentation[J].Microb.Cell Fact.,2010,9:85-92.

[35]PARK K B,OH S H.Production of Yogurt with Enhanced Levels of Gamma-Aminobutyric Acid and Valuable Nutrients Using Lactic Acid Bacteria and Germinated Soybean Extract[J].Bioresour.Technol.,2007,98:1675-1679.

[36]KIM J Y,LEE M Y,JI G E,et al.Production of γ-Aminobutyric Acid in Black Raspberry Juice during Fermention by Lactobacillus breivs GABA100[J].Int.J.Food Microbiol.,2009,130:12-16.

[37]UENO Y,HAYAKAWA K,TAKAHASHI S,et al.Purification and Characterization of Glutamate Decarboxylase from Lactobacillus brevisIFO12005[J].Biosci.Biotech.Biochem.,1997,61:1168-1171.

[38]YUANXIN G,RUNQIANG Y,HUI C,et al.Accumulation of γ-Aminobutyric Acid in Germinated Soybean(Glycine max L.)in Relation to Glutamate Decarboxylase and Diamine Oxidase Activity Induced by Additives under Hypoxia[J].Eur.Food Res.Technol.,2012,234(4):679-687.

[39]TSAI J S,LIN Y S,PAN B S,et al.Anti-hypertensive Peptides and Gamma-aminobutyric Acid from Prozyme 6 Facilitated Lactic Acid Bacteria Fermentation of Soymilk[J].Process Biochem.,2006,41:1282-1288.

[40]INOUE K,SHIRAI T,OCHIAI H,et al.Blood-pressure-lowering Effect of a Novel Fermented Milk Containing Gamma-Aminobutyric Acid (GABA)in Mild Hypertensives[J].Eur.J.Clin.Nutr.,2003,57:490-495.