關于超廣譜β-內酰胺酶與細菌耐藥性的研究

張鳳春

關于超廣譜β-內酰胺酶與細菌耐藥性的研究

張鳳春

目的 了解鞍山市第二醫院大腸桿菌和肺炎克雷伯菌產超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)菌的發生率及其與細菌耐藥性的關系。方法 雙紙片、酶抑制劑增強紙片擴散法；Kirby-Bauer(KB)法測定ESBLs株對抗菌藥物的敏感性。結果 大腸桿菌中產ESBLs菌株占26.67%, 肺炎克雷伯菌中為24.27 %；上述產ESBLs株對第三代頭孢菌素和氨曲南多為耐藥, 亞安培南的耐藥株少見, 對阿米卡星、環丙沙星等多為耐藥。結論 超廣譜β-內酰胺酶是對第三代頭孢菌素、單環β-內酰胺類抗生素耐藥的重要機制。

超廣譜β-內酰胺酶；藥敏試驗；耐藥機制

超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)是以滅活窄譜和廣譜頭孢菌素、單環類抗生素及抗革蘭氏陰性桿菌青霉素等抗生素為特征的β-內酰胺酶［1］。而ESBLs產生菌導致的耐藥性已日益成為臨床治療的難題, 因此作者對遼寧省鞍山市第二醫院2012年1月～2013年5月臨床分離的大腸桿菌和肺炎克雷伯菌菌株產ESBLs株的發生率及耐藥性進行了測定。

1 材料與方法

1.1 菌株來.2012年1月～2013年5月鞍山市第二醫院檢驗科細菌室住院患者的各種標本中分離出的肺炎克雷伯菌206株, 大腸桿菌135株, 全部經ATB系統鑒定。質控菌株大腸桿菌ATCC25922(非β-內酰胺酶產生株)、大腸桿菌ATCC35218(β-內酰胺酶產生株)以及肺炎克雷伯菌WHO12(ESBLs產生株)。

1.2 抗生素紙片 氨芐西林(AMP)、頭孢唑林(CEZ)、頭孢克羅(CEC)、頭孢呋辛(CXM)、頭孢噻肟(CTX)、頭孢三嗪(CRO)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢哌酮(CFP)、氨曲南(ATM)、亞安培南(IM)均為英國OXOID公司產品；頭孢哌酮/舒巴坦(CFP/SU)、頭孢噻肟/克拉維酸(CTX/CA)、頭孢他啶/克拉維酸(CAZ /CA)為美國BBL公司產品；阿莫西林/克拉維酸(AMX/CA)、阿米卡星(AK)、環丙沙星(CIP)為北京天壇藥物生物技術開發公司產品。

1.3 藥敏試驗 采用紙片擴散法, 結果按美國臨床實驗室標準委員會1999年標準［2］判讀, 同時作質控。

1.4 ESBLs檢測 ①采用雙紙片協同擴散法, 選擇AMX/ CA、CTX、CAZ、CRO和ATM五種抗生素紙片, 周圍紙片與中央紙片中心距離定為20 mm。②NCCLS ESBLs表型確證試驗：利用酶抑制劑增強紙片擴散法, 選擇CAZ/CA與CAZ, CTX/CA與CTX將它們貼在事先涂布好待測菌的藥敏平板上, 設立單藥對照組藥敏平板。

2 結果

2.1 ESBLs檢出情.341株臨床菌株中, 共檢出ESBLs菌86株, ESBLs檢出率為25.22%；其中肺炎克雷伯菌為24.27%(50/206), 大腸桿菌為26.67%(36/135)。

2.2 產ESBLs 株與非產ESBLs株對14種抗生素的耐藥率(%)比較。大腸桿菌(135株)ESBLs株(36)非ESBLs株(99)：AMP各占100%、81.9% ；CEZ各占98.6%、19%；CEC各占 97.6%、18.9% ；CXM 各占95.9%、18.4%； CTX各.59.1%.5%；CFP各占82.1%、6.9%；CRO各占76.8%、6.7%；ATM各占25.4%、3.5%；IMP各占2.3%、0.4 %；AMK各占51.4%、8.7 %；CIP各占86.7%、77.3%；AMX/CX各占62.4%、9.9%；CFP/ SU各占51.2%、7.5%；CTX/CA各占54.2%、6.3%。

肺炎克雷伯菌(206株)ESBLs株(50) 非ESBLs株(156)：AMP各占100% 、99.8%；CEZ各占95.3%、22.6%；CEC各占 94.2%、22.4%CXM各占 96.1%、24.7%；CTX各.55.0 %、9.6%；CFP各占90.1%、15.5 %；CRO各占86.6%、16.4%；ATM各占81.4%、15.8 %；IMP各占1.7%、1.5%；AMK各占87.5%、16.7%；CIP各占45.3%、15.5%；AMX/CX各占67.4%、11.7%；CFP/SU各占60.7%、10.5% ；CTX/CA各占63.5%、7.8%。

2.3 產ESBLs(86)株的病房分布 產ESBLs(86)株主要分布在重癥病房 ICU占27.2%；腦外占18.1%；普外占14.8% ；CCU占14.5%；呼吸內占13.3 %；泌尿內占6.8%；內分泌占2.9%；消化內占2.4%。

3 討論

細菌耐藥性的機制：①滅活酶：主要為 β-內酰胺酶 (200多種), 使抗生素失效。②靶位改變：與抗生素結合靶位的改變, 使抗生素作用下降。③細菌膜通透性的改變：使抗生素不能或很少進入細菌體內到達作用靶位。細菌耐藥性的發展從醫院內菌株(如腸桿菌科、金黃色葡萄球菌)到醫院外菌株(如肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、淋球菌), 其耐藥性從對單種藥物耐藥發展至多重耐藥, 例如金黃色葡萄球菌對青霉素耐藥;ESBL菌株對多種常用抗生素耐藥。本組資料顯示大腸桿菌和肺炎克雷伯菌中的多數產ESBLs株對第三代頭孢菌素、氨曲南等耐藥, 此外, 近半數或以上的產ESBLs株對AMK和CIP耐藥, 但對亞安培南和頭孢西丁則多數顯示敏感。因此ESBLs株的藥物敏感性試驗對于指導臨床合理用藥有重要意義。

自從1983年德國報道首例產ESBL肺炎克雷伯菌以來［3］, ESBLs產生菌導致的耐藥性已日益成為臨床治療的問題。它是革蘭氏陰性桿菌對第三代頭孢菌素及單環β-內酰胺類抗生素耐藥的最重要和常見的機制之一。本組資料顯示, 非ESBLs組菌株對受試抗生素均較ESBLs組顯著敏感, 因此,臨床實驗室有必要將其作為常規檢測, 以便及時給臨床報告,從而指導臨床合理用藥。

產ESBLs株菌多分布在重癥病房, 可能與這些病房的抗生素應用及患者情況有關。

β-內酰胺酶抑制劑CA、SUL等對于ESBLs具有抑制作用, 可用于產ESBLs菌感染的治療。本研究結果顯示, 亞安培南作用最強, 這與文獻報道的相一致［4,5］。因此, 它是治療產ESBLs感染的首選藥物。在臨床治療產ESBLs菌感染時不宜選用第三代頭孢菌素, 應根據感染部位、感染嚴重程度及患者情況合理選用有效抗菌藥物。此外, 臨床上應嚴格掌握和限制使用第三代頭孢菌素, 以減輕抗生素的選擇壓力,避免醫院內產ESBLs菌株的產生和流行。

［1］ Philippon A, Labia R, Jacoby G.Extended-spectrum betalactamases. Antibimicrobial Agents and Chemotherapy.1989.33(8):1131-1136.

［2］ Natonal Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibily testing. Approval standard M100-S9. Pennsylvania: NCCLS.1999:72-75.

［3］ Jacoby G A, Medeiros A A.More extended-spectrum betalactamases.Antibimicrobial Agents and Chemotherapy.1991.35(9).1697-1704..

［4］ Livermore D M. β-lactamase-mediated resistance and opportunities for its control.Journal of Antimicrobial Chemotherapy.1998.41(4).25-41.

［5］ Siro D.Extended-spectrum beta-lactamases.Journal of Antimicrobial Chemotherapy .1995.36(1).19-34.

114014 遼寧省鞍山市第二醫院檢驗科