p53對(duì)三陰性乳腺癌預(yù)后的意義及與鉑類化療藥物敏感性的關(guān)系

王 燕

(寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，寧夏 銀川 750021)

三陰性乳腺癌組織分化程度低，惡性程度高，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移常見，預(yù)后差，內(nèi)分泌治療效果欠佳，無(wú)有效的靶向治療藥物〔1，2〕，因此，尋找能時(shí)刻判斷三陰性乳腺癌預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物將為臨床治療帶來(lái)重大意義。p53是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)乳腺癌重要的抑癌基因，與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有重要聯(lián)系，突變率高，且在鉑類化療藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的信號(hào)傳導(dǎo)中起重要作用〔1,3〕。本文利用乳腺癌患者藥物敏感性體外檢測(cè)結(jié)果、臨床資料、免疫組化結(jié)果及追蹤調(diào)查結(jié)果分析p53對(duì)三陰性乳腺癌患者預(yù)后的意義及與鉑類化療藥物敏感性的關(guān)系，為臨床治療提供參考。

1 資料和方法

1.1一般資料 按知情同意原則選取2007年1月至2008年6月于我院就診的經(jīng)病理檢查確診為乳腺癌患者291例，其中年齡<35歲11例，≥35歲280例；月經(jīng)未閉132例，月經(jīng)已閉159例；病理類型侵導(dǎo)型243例，浸葉型10例，其他38例；T1期腫瘤107例，T2期141例，T3～T4期43例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移115例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移176例。所有患者在就診前均未行放射治療、化療及內(nèi)分泌治療且經(jīng)影像學(xué)檢查確認(rèn)無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。采集患者手術(shù)切除的乳腺癌組織標(biāo)本，石蠟包埋備用。

1.2方法

1.2.1腫瘤細(xì)胞對(duì)鉑類化療藥物敏感性檢測(cè) 采用腫瘤原代細(xì)胞膠原凝膠體包埋化療藥物敏感性檢測(cè)技術(shù)(CD-DST法)進(jìn)行檢測(cè)，將獲取的新鮮乳腺癌組織無(wú)菌條件下剪碎用膠原蛋白酶進(jìn)行消化獲得單細(xì)胞懸液，懸液離心后接種于與體內(nèi)相似的細(xì)胞生長(zhǎng)微環(huán)境的人工細(xì)胞外基質(zhì)Ⅰ型膠原凝膠中，之后進(jìn)行三維立體培養(yǎng)，根據(jù)實(shí)際情況給予一定濃度的鉑類化療藥物(順鉑)，最后經(jīng)細(xì)胞染色及利用圖像分析評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞對(duì)該化療藥物的敏感性。判斷標(biāo)準(zhǔn)：用藥物處理的腫瘤細(xì)胞克隆量(T)與空白對(duì)照組中腫瘤細(xì)胞克隆量(C)的比值來(lái)表示。T/C≤60%，判定為體外敏感； T/C>60%，判定為耐藥。

1.2.2p53表達(dá)檢測(cè) 采用SP免疫組化法進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，鼠抗人p53單克隆抗體、即用型SP免疫組化染色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。用已知的陽(yáng)性組織切片做陽(yáng)性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對(duì)照。p53表達(dá)于細(xì)胞核中，染色后呈棕色顆粒狀，在400倍光鏡下觀察記錄結(jié)果，每份切片取10個(gè)高倍鏡視野采取雙人雙盲計(jì)數(shù)，記錄切片中陽(yáng)性細(xì)胞占同類觀察細(xì)胞總數(shù)的百分比，p53陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>10%為陽(yáng)性。

1.2.3隨訪 采用定期門診復(fù)查、信訪和電話相結(jié)合的方式進(jìn)行追蹤隨訪調(diào)查，為期5年，記錄患者是否復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或者死亡。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2分析。

2 結(jié) 果

2.1p53在三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌中的表達(dá)情況 免疫組化結(jié)果顯示：291例乳腺癌患者中三陰性乳腺癌45例，p53在三陰性乳腺癌患者中的表達(dá)陽(yáng)性率為55.56%(25例)，高于在非三陰性乳腺癌患者中的30.08%(74例)(P<0.05)。另外，p53在三陽(yáng)性乳腺癌中陽(yáng)性20例(44.44%)，在非三陽(yáng)性乳腺癌中172例(69.9%)。

2.2三陰性乳腺癌患者p53表達(dá)情況與鉑類化學(xué)藥物敏感性的關(guān)系 45例三陰性乳腺癌患者對(duì)鉑類化療藥物的敏感率為62.22%，其中p53表達(dá)陽(yáng)性患者其對(duì)順鉑的敏感率為44.00%，低于陰性患者敏感率85.00%(P<0.05)；且陽(yáng)性患者耐藥14例(56.00%)，陰性患者31例(15.00%)。

2.3p53對(duì)三陰性乳腺癌患者預(yù)后情況的影響 p53表達(dá)陽(yáng)性患者其5年無(wú)瘤生存率為52.00%(13例)，低于陰性患者的90.00%(18例)(P<0.05)；p53表達(dá)陽(yáng)性患者與陰性患者其局部胸壁復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況相近〔4例(16.00%)vs 2例(10.00%)；18例(72.00%) vs 11例(55.00%)〕，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

乳腺癌是一種在組織學(xué)形態(tài)、生物學(xué)行為、免疫表型、預(yù)后及治療反應(yīng)上存在很大差別的異質(zhì)性明顯的惡性腫瘤。其主要治療方法包括手術(shù)治療、放化療、激素治療及靶向治療等。三陰性乳腺癌是其中分化程度低、惡性程度高的一種高危類型，由于靶向治療及內(nèi)分泌治療效果不明顯，患者預(yù)后差，已被臨床熱門關(guān)注〔4，5〕。p53基因是目前發(fā)現(xiàn)的與人類惡性腫瘤相關(guān)程度非常高的一種基因，其表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、治療及耐藥等均有很大程度的關(guān)系，可作為評(píng)價(jià)惡性腫瘤的預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，但是目前p53的表達(dá)對(duì)于三陰性乳腺癌患者預(yù)后及治療的影響尚未有明確結(jié)果。

本研究說(shuō)明三陰性乳腺癌患者p53表達(dá)陽(yáng)性程度高，出現(xiàn)這種情況的原因是p53主要有野生型及突變型兩種，野生型p53是一種抑癌基因，但是由于其半衰期短而無(wú)法通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)，而突變型p53會(huì)抑制野生型p53的活性從而轉(zhuǎn)變?yōu)榘┗颍龠M(jìn)細(xì)胞惡變、延遲惡性細(xì)胞凋亡，半衰期長(zhǎng)可被免疫組化法檢測(cè)，因此三陰性乳腺癌患者p53表達(dá)陽(yáng)性程度高〔6〕；本研究采用腫瘤原代細(xì)胞膠原凝膠體包埋化療藥物敏感性檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行體外藥敏檢測(cè)，野生型p53在鉑類化療藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的信號(hào)傳導(dǎo)中起重要作用，而表達(dá)陽(yáng)性患者其突變型p53表達(dá)陽(yáng)性程度高抑制野生型p53表達(dá)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥的發(fā)生；最后通過(guò)追蹤隨訪結(jié)果與國(guó)內(nèi)外已有結(jié)果相同〔2,7〕，說(shuō)明p53表達(dá)陽(yáng)性是預(yù)后差的一個(gè)影響因素。

總而言之，p53陽(yáng)性表達(dá)降低了三陰性乳腺癌患者對(duì)鉑類化療藥物的敏感性，并降低了患者的5年生存率，可作為判斷三陰性乳腺癌患者預(yù)后較差的指標(biāo)。

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