微柱凝膠法在新生兒溶血病檢測中的應用效果

楊麗

微柱凝膠法在新生兒溶血病檢測中的應用效果

楊麗

目的 探討微柱凝膠法對新生兒溶血病的檢測效果。方法 對 214 例疑似新生兒溶血病患兒采用微柱凝膠法檢測 , 并對結果進行分析。結果 214 例患兒中三項試驗均為陽性者約占 29.4% ；游離、釋放試驗陽性 , 直抗試驗陰性者約占 50.5% ；直抗、釋放試驗陽性 , 游離試驗陰性者約占 6.1% ；直抗、游離試驗陰性 , 釋放試驗陽性者約占 3.3% ；確診患兒抗體釋放試驗均為陽性。結論 微柱凝膠法檢測新生兒溶血病血清用量少 , 影響因素少 , 靈敏度及特異性良好 , 結果易保存 , 臨床應用效果滿意。

新生兒溶血病 ；微柱凝膠法 ；檢測 ；效果

新生兒溶血病 (hemolytic disease of the newborn, HDN)黃疸可造成患兒大腦不可逆損害 , 生存質量降低 , 早期確診對預后十分重要 , 微柱凝膠法血清學檢測靈敏度高 , 結果穩定 , 2011 年 1 月 ～2013 年 11 月作者對 214 例新生兒溶血病疑似患兒采用微柱凝膠法檢測 , 報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 214例患兒中男 136例 , 女 78例 , 出生日齡 12 h~7 d, 均為 ABO血型系統 , 臨床主要表現為黃疸、貧血、高膽紅素血癥、肝脾腫大等 , 排除感染、葡萄糖 -6-磷酸脫氫酶缺乏等可致溶血之疾病 , 初診疑似母嬰血型不合新生兒溶血病。新生兒溶血病診斷標準：①患兒母親血清中有免疫性血型抗體 ；②血清總膽紅素 >229 μmol/L, 有貧血癥狀 ；③患兒血型與母親血型免疫性抗體一致 , 抗體釋放試驗結果陽性 ；結合臨床表現 , 可確診新生兒溶血病。

1. 2 檢測方法 微柱凝膠卡、專用孵育箱、專用離心機、抗人球蛋白檢測卡等由達亞美公司提供；ABO血型鑒定及新生兒溶血病三項血清學檢測嚴格執行相關標準［1］。

1. 2. 1 采用新生兒及母親抗凝血做 ABO血型鑒定 , 微柱凝膠卡加患兒 0.8%紅細胞懸液 50 μl, 離心 5 min后觀察直接抗人球蛋白試驗結果 , 紅細胞聚集在凝膠卡上或中部者為陽性 ,紅細胞沉積凝膠卡底部者為陰性。

1. 2. 2 游離抗體試驗及抗體釋放試驗 在凝膠卡中分別加入患兒血清或紅細胞放散液 50 μl, 患兒紅細胞放散液按文獻制備 , 按標記分別加入 0.8%A細胞、B細胞、O細胞懸液各50 μl, 置專用孵育器內 37℃孵育 15 min后 , 離心 5 min, 觀察結果 , 陽性結果判斷標準同上。

1. 3 檢測結果判定標準 對三項試驗同時陽性者可確診新生兒溶血病；未同時出現陽性者以抗體釋放試驗陽性為診斷標準 ；直接抗人球蛋白試驗和 (或 )游離抗體試驗陽性而抗體釋放試驗陽性者 , 結合臨床表現綜合分析。

1. 4 統計學方法 采用 SPSS15.0統計軟件處理數據 , 計量資料以均數 ± 標準差 ( x-±s)表示 , 采用 t檢驗 , 計數資料采用χ2檢驗。以 P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2. 1 214例患兒中直接抗人球蛋白試驗陽性者 81例 (37.9%),抗 體 游 離 試 驗 陽 性 170例 (79.4%), 抗 體 釋 放 試 驗 陽 性 193例 (90.2%)；抗體釋放試驗陽性與臨床診斷符合率約 90.2% (193/214)。

2. 2 214例中三項試驗均為陽性者 63例 , 約占 29.4%；游離、釋放試驗陽性 , 直抗試驗陰性者 108例 , 約占 50.5%；直抗、釋放試驗陽性 , 游離試驗陰性者 13例 , 約占 6.1%；直抗、游離試驗陰性 , 釋放試驗陽性者 7例 , 約占 3.3%；三項試驗均為陰性者 9.8%。

2. 3 214例中確診新生兒溶血病 193例 , 確診患兒抗體釋放試驗均為陽性 , 其中母、嬰血型 O-A者 92例 (47.7%), 母、嬰血型 O-B者 101例 (52.3%), 兩者比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

3 討論

新生兒溶血病為患兒母體內存在與胎兒紅細胞不相匹配的 IgG 血型抗體 , 引起同種被動免疫性疾病。母嬰血型不合致母體內免疫系統被動激活 , 產生對應胎兒紅細胞抗原的特異性同種免疫抗體 IgG, 經胎盤進入胎兒體內與其紅細胞結合 , 引發同種免疫性溶血反應 , 為新生兒溶血病的主要原因 ,臨床以 ABO 血型系統所致同種免疫性溶血病最常見 , 其次為 Rh 血型系統 , 多發于胎兒及新生兒 , 引起患兒高膽紅素血癥、貧血、水腫、肝脾腫大等臨床表現 , 重者可致膽紅素腦病 ,有一定的致殘率和病死率［2］。

新生兒溶血病確診依賴于直接抗人球蛋白試驗、抗體游離試驗及抗體釋放試驗 , 三項試驗的臨床意義不同 , 抗體釋放試驗、直接抗人球蛋白試驗為新生兒溶血病確診試驗 , 而游離抗體試驗檢測患兒血清中血型抗體 , 檢測結果有助于患兒預后評估 , 三項試驗以抗體釋放試驗最具診斷價值 , 直接抗人球蛋白試驗、抗體游離試驗陰性者 , 抗體釋放試驗陽性即可診斷新生兒溶血病［3］。

患兒體內游離抗體及致敏紅細胞隨發病時間延長而減少 , 大部分血型抗體以抗原抗體復合物形式存在 , 失去免疫反應性 , 導致檢出陽性率降低［4］, 檢測越早者陽性率越高。新生兒溶血癥狀較重者 , 血中抗體滴度較高 , 直接抗人球蛋白試驗多為強陽性 , 結合患兒臨床表現等 , 有助于確診新生兒同種免疫性溶血病 , 排除其他原因所致黃疸。

微柱凝膠法檢測可調節凝膠濃度 , 控制凝膠間隙 , 離心后的抗體致敏紅細胞存留于微柱上段 , 或分布于凝膠中 , 未致敏紅細胞經凝膠間隙至微柱底部 , 形成不同強度凝集反應 ,離心效果使得凝集、未凝集細胞分層及陽性、陰性區分較為明顯 , 對 ABO 血型系統新生兒溶血病檢測靈敏度略高于試管法 , 凝集強度高于試管法 , 對 ABO 血型系統、Rh 血型系統新生兒溶血病患兒 IgG 抗體特異性檢測與試管法檢測結果一致［5］。與試管法檢測比較 , 具有血清用量少 , 檢測結果影響因素少 , 靈敏度高 , 結果易保存 , 步驟減少 , 操作簡單等優點。

本研究中三項試驗均為陽性者約占 29.4% ；游離、釋放試驗陽性 , 直抗試驗陰性者約占 50.5%；直抗、釋放試驗陽性 ,游離試驗陰性者約占 6.1% ；直抗、游離試驗陰性 , 釋放試驗陽性者約占 3.3% ；確診患兒抗體釋放試驗均為陽性 , 靈敏度及特異性良好 , 應用效果滿意。

［1］葉應嫵 ,王毓三 ,申子瑜 .全國臨床檢驗操作規程 .第 3 版 .北京 : 中華人民共和國衛生部醫政司 , 2006:267-268 .

［2］劉穎 .新生兒 Rh 血型不合溶血病基囚診斷及治療進展 .中華新生兒科雜志 , 2012,27(6):428.

［3］柳美秀 ,陳超 ,華愛蘭 .新生兒母嬰血型不合溶血病的實驗室診斷技術 .中國新生兒雜志 , 2011,26(3):204-205.

［4］吳紅 ,熊莉 ,孫瑜 ,等 . 63 例新生兒溶血病血清學檢測結果分析 .江西醫學院學報 , 2009,49(1):124-126.

［5］張勇萍 ,安寧 ,李娜 ,等 .微柱凝膠法與試管法檢測新生兒溶血病免疫性抗體的比較 .臨床血液學雜志 , 2011,24(12):697-701.

2014-04-16］

464000 信陽市中心醫院檢驗科