天門冬水提液體外抗氧化及抑菌作用觀察

譚 娟， 黃 靜， 歐立軍

(生命科學系湘西藥用植物與民族植物學湖南省高校重點實驗室 民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點實驗室懷化學院，湖南懷化418008)

天門冬Asparagus cochinchinensis (Lour. )Merr. ，百合科天門冬屬植物，在我國分布較廣，其塊根有養(yǎng)陰潤燥、清肺生津的作用，是多個民族使用的中藥材，同時可以作為滋補品使用［1］。目前對天門冬抗氧化能力的研究主要集中在體內(nèi)，有研究發(fā)現(xiàn)，天門冬醇提液和水提液均可顯著降低小鼠肝細胞膜MDA 水平［2］，醇提取液能顯著提高小鼠腦組織中NOS 和SOD 活性，使NO 水平增加［3］，水提液能顯著增強小鼠血清中NOS 活性，提高NO 水平［4］。天門冬屬植物被報道有一定的抑菌作用，如蘆筍［5］和長刺天門冬［6-7］，而對該屬中的主要藥用植物天門冬的體外抗氧化和抑菌的研究少見報道。本實驗通過分析天門冬水提液體外對DPPH、ABTS、羥基自由基和超氧陰離子等的清除及對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、蘇云金芽孢桿菌和銅綠假單胞菌的抑制作用，探討天門冬水提液體外抗氧化和抑菌能力，為開發(fā)天門冬深加工產(chǎn)品提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料 天門冬，實驗室自產(chǎn)，經(jīng)曾漢元教授鑒定為百合科天門冬屬天門冬物種。將天門冬烘干后，粉碎成粗粉。取20 g，加水160 mL 煮提3 次，1 h/次，合并3 次提取液，抽濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得天門冬水提液，冷藏備用。參照《中國藥典》［8］和熊大勝等［9］，以人體實際所用天門冬生藥劑量為標準，設定天門冬水提液的生藥低、中和高質(zhì)量濃度分別為1.0、2.0 和4.0 mg/mL。以BHT、Vc、青霉素和羅紅霉素作為陽性對照，其配制方法如下:分別稱取1g BHT 和Vc 溶于10 mL 的酒精中得到100 mg/mL 的BHT和Vc 溶液;分別稱取0.1 g 羅紅霉素和青霉素溶于10 mL的酒精中得到10 mg/mL 溶液，用10 倍稀釋法稀釋得到10 μg/mL羅紅霉素和青霉素溶液。

1.2 方法

1.2.1 體外抗氧化作用

1.2.1.1 DPPH 自由基清除作用的測定 參考Jiang 等［10］，取樣品溶液2 mL，加入2 mL 1.25 ×10-4mol/L 的DPPH 溶液，迅速混勻后，室溫下避光靜置30 min，在517 nm 下測定溶液的吸光值，以無水乙醇代替樣品作為空白，BHT 和Vc 作為陽性對照，根據(jù)公式，測出清除率:D% = ［1 -(Ai-Aj)/Ac］ ×100%，Ai為加入樣品后的吸光值，Aj為樣品本底吸光值，Ac為空白吸光值。

1.2.1.2 ABTS 自由基清除作用的測定 參考程超等［11］，稍做修改，用2.45 mmol/L 的過硫酸鉀配制7 mmol/L 的ABTS 貯備液，室溫、避光條件下靜置12 ～16 h，將ABTS貯備液用10 mmol/L pH 7.4 磷酸緩沖液稀釋制備ABTS 測試液，使其在734 nm 的吸光度為(0.7 ±0.02)，取4 mL ATBS 測試液，加入40 μL 樣品溶液，振搖30 s，反應6 min 后，測定734 nm 波長處的吸光度，根據(jù)公式，測出清除率:清除率/% = (1 -A樣品/0.700) ×100)。

1.2.1.3 羥基自由基和超氧陰離子的測定 按照南京建成生物工程研究所研制的試劑盒進行。

1.2.2 天門冬提取液抑菌作用

1.2.2.1 菌種活化 將融化的培養(yǎng)基裝入試管，滅菌后擺斜面。在無菌條件下用劃線法將供試菌種移接入相應的斜面培養(yǎng)基上，于37 ℃下培養(yǎng)18 ～24 h，進行菌種斜面活化。

1.2.2.2 供試菌株懸浮液的制備 麥氏比濁法制作菌懸液(9.8 mL 的1%的硫酸和0.2 mL 的0.25%的氯化鋇溶液，制得的菌懸液含菌量為2.0 ×108CFU/mL):將活化好的菌種，在無菌條件下，每種分別挑取兩環(huán)菌苔，各用生理鹽水稀釋，再與麥氏比濁液對比(調(diào)節(jié)生理鹽水的用量)，使菌液的渾濁度與麥氏比濁液渾濁度基本一樣。

1.2.2.3 含菌平板制作 將新鮮配制的培養(yǎng)基于121 ℃條件下滅菌，當培養(yǎng)基冷至50 ～60 ℃時，超凈工作臺上將培養(yǎng)基倒入滅菌的90 mm 培養(yǎng)皿中，每皿15 ～20 mL 培養(yǎng)基，待平板冷卻后，每皿中加入0.1 mL 菌懸液，用三角玻璃涂棒均勻涂成薄板備用。

1.2.2.4 抑菌作用測定 無菌操作，用鑷子取無菌濾紙片在各個藥液中浸濕，在容器壁瀝去多余的溶液，在標記的相應位置的平板上貼好濾紙片(每組平行3 次，取平均值)，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并測量抑菌環(huán)直徑，比較抑菌效果(注:抑菌圈在15 mm 以上，抑菌能力強;抑菌圈在10 ～15 mm，抑菌能力較強;抑菌圈在10 mm 以下，抑菌能力弱)。

2 結(jié)果與分析

2.1 天門冬水提液體外抗氧化作用分析

2.1.1 天門冬水提液對DPPH 自由基的清除作用 天門冬水提液對DPPH 自由基的清除作用隨著質(zhì)量濃度的提高而增強，低、中和高質(zhì)量濃度天門冬水提液對其的清除效果存在顯著差異，但3 個質(zhì)量濃度的提取液的清除效果都不如BHT 和Vc，這表明天門冬水提液有一定的DPPH 自由基的清除效果，但清除能力不如BHT 和Vc (表1)。

表1 天門冬水提液對DPPH 自由基的清除作用

2.1.2 天門冬水提液對ABTS 自由基的清除作用 天門冬水提液對ABTS 自由基的清除作用隨著質(zhì)量濃度的提高而增強，低和中質(zhì)量濃度提取液的清除效果無明顯差異，高質(zhì)量濃度的水提液的清除效果與Vc 的清除效果接近，但低于BHT 的作用效果，這說明高質(zhì)量濃度天門冬提取液對ABTS 自由基的清除作用較強，但不如BHT (表2)。

表2 天門冬水提液對ABTS 自由基的清除作用

2.1.3 天門冬水提液對羥基自由基的清除作用 天門冬水提液對羥基自由基的清除能力隨著質(zhì)量濃度的提高而增強，且不同質(zhì)量濃度提取液的清除效果存在顯著差異，高質(zhì)量濃度水提液的清除效果顯著高于BHT 和Vc，中質(zhì)量濃度水提液的清除效果顯著高于Vc，低質(zhì)量濃度提取液的清除效果與Vc 接近，這說明天門冬提取液對羥基自由基的清除作用較強(表3)。

表3 天門冬水提液對羥基自由基的清除作用

2.1.4 天門冬水提液對超氧陰離子的清除作用 天門冬水提液對超氧陰離子的清除能力隨著質(zhì)量濃度的提高而增強，且不同質(zhì)量濃度提取液的清除效果存在顯著差異，高質(zhì)量濃度水提液的清除效果顯著高于BHT 和Vc，中質(zhì)量濃度水提液的清除效果顯著高于Vc，低質(zhì)量濃度提取液的清除效果弱于Vc，這說明天門冬提取液有較強的清除超氧陰離子能力(表4)。

表4 天門冬水提液對超氧陰離子的清除作用

2.2 天門冬水提液體外抑菌作用分析 天門冬水取液對供試的細菌都有抑菌活性，且其隨質(zhì)量濃度的提高，抑菌作用增強，其中對金黃色葡萄球菌的抑制作用較強，最低抑菌質(zhì)量濃度為0.5 g/mL，對大腸桿菌、蘇云金芽孢桿菌和銅綠假單胞菌抑制作用較差，最低抑菌質(zhì)量濃度為2 g/mL(表5)。

表5 不同濃度的天門冬水提液對細菌生長的抑制(抑菌圈直徑單位cm)

3 討論

有研究報道，天門冬的70%乙醇提取液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、黑曲霉有較強的抑制作用［12］。本研究卻表明，天門冬水提液對金黃色葡萄球菌抑菌效果相對較好外，對其他3 種菌的抑制效果都較差，可能與天門冬的提取溶劑有關，這與嚴寒靜等［13］對金櫻子，歐陽蒲月等［14-15］對頂芽狗脊莖、華南十大功勞的不同提取物體外抑菌活性研究結(jié)果類似，即不同提取物的抑菌效果不一致，且有研究認為，天門冬水提液的體內(nèi)抗氧化效果優(yōu)于其他提取液的效果［16］，這可能與不同提取方法對不同化學成分的提取效果不一相關。同時，本研究認為，天門冬水提液的自由基清除能力隨質(zhì)量濃度的增加而增強;高質(zhì)量濃度提取液對DPPH 和ABTS 自由基清除能力低于BHT 和Vc，中和高質(zhì)量濃度提取液對羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除能力不低于BHT 和Vc。

綜上所述，天門冬水提液雖然抑菌能力較差，但有較強的體外抗氧化能力。因此天門冬作為藥食兼用保健植物，可以與其他食物一起食用，達到清除體內(nèi)自由基，抗氧化和預防衰老的作用。

［1］ 姚念環(huán)，孔令義. 天門冬屬植物化學成分及生物活性研究進展［J］. 天然藥物研究與開發(fā)，1999，11(2):67.

［2］ 曲鳳玉，毛金軍. 天門冬對D-半乳糖衰老模型小鼠紅細胞膜、干細胞膜MDA 影響的實驗研究［J］. 中草藥，1999，30(10):763-764.

［3］ 張鵬霞，曲鳳玉. 天冬醇提取液對D-半乳糖致衰小鼠腦抗氧化作用的實驗研究［J］. 中國老年學雜志，2000，20(1):42.

［4］ 趙玉佳，孟祥麗. 天門冬水提液及其納米中藥對衰老模型小鼠NOS、NO、LPF 的影響［J］. 中國野生植物資源，2005，24(3):49-51.

［5］ 馮翠萍，王亞琴. 蘆筍皮抑菌作用的研究［J］. 食品科學，2007，28(12):105-109.

［6］ Mandal S C，Nandy A，Pal M，et al. Evaluation of antibacterial activity of Asparagus racemosus root［J］. Phytother Res，2000，14(2):118-119.

［7］ Uma B，Prabhakar K，Rajendran S. Anticandidal activity of Asparagus racemosus［J］. India J Pharm Sci，2009，71(3):342-343.

［8］ 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典:2010 年版一部［S］. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:52.

［9］ 熊大勝，許云香，郭春秋. 天冬塊根藥用成分對小鼠抗氧化延緩衰老的影響［J］. 湖南文理學院學報，2009，21(4):40-43，46.

［10］ Jiang S H，Li H Q，Ma H L，et al. Antioxidant activities of selected Chinese medicinal and edible plants［J］. Int J Food Sci Nutr，2011，62(5):441-444.

［11］ 程 超，朱玉婷，田 瑞，等. 噴霧冷凍干燥對葛仙米藻膽蛋白抗氧化特性的影響［J］. 食品科學，2012，33(13):36-39.

［12］ 方 芳，張 恒，趙玉萍，等. 天門冬的體外抑菌作用［J］. 湖北農(nóng)業(yè)科學，2012，51(5):931-934.

［13］ 嚴寒靜，王振偉，田素英. 金櫻子莖提取物體外抑菌活性研究［J］. 亞熱帶植物科學，2012，41(3):7-10.

［14］ 歐陽蒲月，楊 斌，陳功錫，等. 頂芽狗脊提取物抑菌活性的初步研究［J］. 中藥材，2012，35(1):111-115.

［15］ 歐陽蒲月，黃智璇，莫端峰. 華南十大功勞提取物抑菌活性初步研究［J］. 亞熱帶植物科學，2012，41(3):1-6.

［16］ 歐立軍，趙麗娟，劉良科，等. 天門冬不同提取液對D-半乳糖衰老小鼠部分生理指標的影響［J］. 中成藥，2013，35(11):2520-2522.