急性髓細(xì)胞白血病患者NGF及p75NTR測定的臨床意義

韓秀華，李秀梅，姜玉龍，江亞軍，劉小林

(連云港市第二人民醫(yī)院，江蘇 連云港 222000)

研究表明，神經(jīng)生長因子(NGF)不僅可以作為一種絲裂原促進(jìn)膽管癌、乳腺癌等腫瘤細(xì)胞的有絲分裂，還能抑制食管癌、胃癌等腫瘤細(xì)胞的增殖，促進(jìn)腫瘤分化。但是，NGF在急性髓細(xì)胞白血病(AML)中的水平變化和發(fā)病機(jī)制中的作用在國內(nèi)外鮮有報道。本研究測定AML患者血清NGF水平以及骨髓白血病細(xì)胞群表面低親和性NGF受體(p75NTR)的表達(dá)并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2008年3月～2010年9月于連云港市第二人民醫(yī)院住院并確診初治AML患者24例(病例組)，男14例、女10例，年齡13～79(42.8±21.1)歲。其中 M12 例，M29 例，M36 例，M43例，M53例，M61例。化療方案包括DA、CAG、HA、MA、全反式維甲酸+亞砷酸等。根據(jù)張之南主編的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行療效判斷，其中完全緩解(CR)15例，未緩解(NR)7例。CR患者按照鞏固強(qiáng)化維持治療并隨訪3年總體生存率(OS)，隨訪終點(diǎn)為患者死亡或至2011年2月28日止，隨訪時間為1～36(15.4±13.1)個月。選擇同期15例健康者作為對照組，男9例、女6例，年齡15～74(38.3±19.1)歲;其性別、年齡構(gòu)成與病例組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 ELISA法測定血清NGF水平 清晨空腹采取靜脈血3 ml置于無抗凝物的真空采血管中，1000 r/min離心20 min后分離血清后置于-70℃冰箱保存。樣本收集完畢后用人NGF ELISA試劑盒(美國Genzyme公司產(chǎn)品)標(biāo)定，用e-STAR-PLUS酶標(biāo)儀在波長450 nm依序測量各孔的光密度(OD值)。

1.2.2 流式細(xì)胞儀測定p75NTR 分別于化療前和治療過程中不同時間點(diǎn)抽取患者骨髓液2 ml置于3.8%枸櫞酸鈉抗凝的真空采血管中。各取骨髓液200 μl至2個檢測管，對照管加入CD45-percep、IgG1-PE(購自美國BD公司)，測量管加入熒光標(biāo)記抗體CD45-percp、p75NTR-PE(購自美國 BD公司)各 20 μl，振蕩混勻后室溫避光孵育 20 min，加入0.1 mol/L pH 7.0 PBS 2 ml。1000 r/min 離心 20 min后PBS緩沖液洗滌2遍，棄上清后，加入500 μl的PBS緩沖液混勻，懸浮細(xì)胞，流式細(xì)胞儀(美國BD公司)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組NGF和p75NTR的表達(dá) 兩組血清NGF水平及骨髓白血病細(xì)胞群表面p75NTR表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。見表1。

表1 兩組NGF和p75NTR表達(dá)水平變化()

表1 兩組NGF和p75NTR表達(dá)水平變化()

注:與對照組比較，*P ＜0.05

組別 n NGF(pg/ml) p75NTR(%)病例組 24 115.08 ±65.51* 56.10 ±16.76*對照組15 64.60 ±33.11 83.39 ±10.99

2.2 NGF和p75NTR表達(dá)與AML患者臨床特征的關(guān)系 AML患者血清NGF和骨髓白血病細(xì)胞群表面p75NTR表達(dá)水平在不同年齡、性別、外周白細(xì)胞計數(shù)以及骨髓幼稚細(xì)胞比例間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P 均 ＞0.05)。

2.3 AML不同臨床療效患者NGF和p75NTR的表達(dá) 24例初治AML患者中，除1例放棄治療和1例早期死亡外，余22例患者經(jīng)2個周期標(biāo)準(zhǔn)方案化療后獲CR 15例(CR組)、NR 7例(NR組)，總體緩解率為68.18%(15/22)。AML患者不同臨床療效間NGF和p75NTR表達(dá)變化見表2。

表2 AML不同臨床療效間NGF和p75NTR表達(dá)變化()

表2 AML不同臨床療效間NGF和p75NTR表達(dá)變化()

注:與 NR組化療前比較，*P＜0.05;與對照組比較，△P＜0.05;與 CR 組化療后比較，▲P ＜0.05

組別 n NGF(pg/ml) p75NTR(%)病例組CR 15化療前 119.13 ±54.58 61.18 ±15.58*化療后 88.33 ±48.86 73.86 ±12.00 NR 7化療前 120.00 ±92.87 44.29 ±15.61化療后 114.43±60.90△ 46.82±19.34△▲對照組15 64.60 ±33.11 83.39 ±10.99

2.4 NGF和p75NTR表達(dá)與患者3年OS的關(guān)系以全部24例患者治療前NGF和p75NTR表達(dá)水平的中位數(shù)設(shè)定為界值分為NGF或p75NTR高表達(dá)組、NGF或p75NTR低表達(dá)組，以此分別繪制Kaplan-Meier生存曲線觀察患者3年OS。NGF高表達(dá)組3年OS為38.9%，低表達(dá)組為48.6%，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.672);p75NTR高表達(dá)組3年OS為43.6%，低表達(dá)組為38.5%，兩組比較差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.548)。

3 討論

p75NTR具有復(fù)雜的生物學(xué)功能，可以介導(dǎo)細(xì)胞的存活、增殖、分化或凋亡等效應(yīng)，在不同的細(xì)胞類型、發(fā)育階段及局部環(huán)境中執(zhí)行的功能往往不同［1］。

近年來大量臨床和基礎(chǔ)研究顯示，NGF及其受體在腫瘤組織中異常表達(dá)，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展但表達(dá)水平卻不盡一致［2～6］。NGF 在膽管癌、乳腺癌［7］以及伴肝硬化的肝細(xì)胞癌中高表達(dá)，支持了NGF在腫瘤進(jìn)展中起促進(jìn)癌細(xì)胞增殖的作用，并提示NGF陽性表達(dá)隨著腫瘤惡性程度的增高而增高，且與腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。目前，p75NTR被認(rèn)為是一個潛在的抑癌基因，p75NTR可有效地抑制前列腺癌、膀胱癌、胃癌及視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤等惡性腫瘤細(xì)胞的生長，這種抑制作用是通過改變細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)來影響細(xì)胞周期、誘導(dǎo)凋亡來實(shí)現(xiàn)的。相反，也有研究報道胰腺導(dǎo)管癌p75NTR表達(dá)較正常胰腺組織表達(dá)上調(diào)［6］。目前，對于不同腫瘤組織p75NTR表達(dá)差異的具體機(jī)制仍未完全闡明。Troeger等研究120例ALL兒童患者的低親和性NGF受體水平發(fā)現(xiàn)，p75NTR高表達(dá)是小兒ALL良好的預(yù)后標(biāo)記。為此我們推測血清NGF高表達(dá)可能參與B-ALL的發(fā)生發(fā)展過程，且可能參與白血病骨髓微環(huán)境的維系，并對白血病的發(fā)生發(fā)展起促進(jìn)作用;而p75NTR表達(dá)下調(diào)可能通過調(diào)節(jié)TrkA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及抑制白血病細(xì)胞凋亡等作用機(jī)制參與白血病的發(fā)生發(fā)展，此有待進(jìn)一步研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，隨著白血病病情的緩解，NGF和p75NTR均不同程度地恢復(fù)正常，提示兩者對判斷白血病患者的近期療效可能具有一定的參考價值。雖然緩解后AML患者NGF和p75NTR與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但從表達(dá)水平看尚未完全正常。本文結(jié)果還顯示，NGF和p75NTR高表達(dá)組3年OS較低表達(dá)組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，此不排除樣本量不足對研究結(jié)果的影響。因此，我們下一步將擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步評價NGF和p75NTR在預(yù)后評價中的意義。

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