昆蟲過冷卻點的影響因素概述

摘 要：昆蟲體液可以耐受0 ℃以下的低溫仍不結冰，這種現象稱為“過冷卻”。當外界溫度繼續下降到一定溫度時，蟲體開始結冰，此時的蟲體溫度即為過冷卻點。過冷卻點可被用來代表昆蟲的耐寒性，因此在昆蟲耐寒性研究中常常需要測定過冷卻點。有多種因素影響過冷卻點，筆者從環境因素與食物、昆蟲發育階段與生物學狀態、含水量與生化物質以及冰核物質4個方面綜述了昆蟲過冷卻點的影響因素，這些影響因素相互關聯共同發揮作用。研究昆蟲的過冷卻點對于認識其抗凍耐寒特性與機理、保護益蟲、防治害蟲都具有重要的意義。

關鍵詞：過冷卻點；環境因素；發育階段；生化物質；抗凍蛋白

中圖分類號：Q965 文獻標識碼：A DOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.11.021

昆蟲是變溫生物，能否安全過冬直接決定了昆蟲的生存和種群的延續，因此寒冷地區的昆蟲都成功地演化出一整套安全過冬的機制。進入過冷卻狀態是北半球溫帶和寒溫帶地區昆蟲所采取的主要過冬策略。昆蟲的體液在低于冰點溫度時，仍能保持液體狀態的現象即為昆蟲的過冷卻現象。使昆蟲體液保持液態的最低溫度，稱為昆蟲的過冷卻點（supercooling point，SCP）。Bachmetjew最早開始了對昆蟲過冷卻現象的研究，為昆蟲在低溫環境下的適應能力，以及許多有關實踐問題的研究開辟了廣闊的領域[1]。

一般來說，根據昆蟲能否在體液結冰條件下存活，可將昆蟲的耐寒性劃分為兩種類型。（1）耐結冰型：昆蟲能耐受細胞外液的結冰而不死亡，此類昆蟲的過冷卻能力較差，過冷卻點較高。大多數耐結冰的昆蟲，在低溫下能主動形成冰核，使細胞外液在較高的亞致死溫度下結冰，而阻止細胞內液結冰，避免使細胞受到更嚴重的損傷；（2）避結冰型或結冰敏感：此類昆蟲對體內形成的冰晶較為敏感，形成冰晶可對蟲體造成致命傷害。因而，這些昆蟲必須最大限度地增強其過冷卻能力[2]，降低過冷卻點，以避免機體結冰。北半球溫帶及寒溫帶地區的昆蟲絕大多數屬于上述的避結冰型，過冷卻點是其能存活的最低溫度。因此，過冷卻點是描述昆蟲耐寒性的主要指標之一。

昆蟲對低溫回應的體溫變化過程如圖1所示[3]。雖然在有些昆蟲種類中，其大量死亡出現在過冷卻點以上的亞致死溫度，過冷卻點不能作為它們存活的低溫下限[4]，但其過冷卻能力在昆蟲耐寒性強弱中所起的作用不可否認。而且通過測定恒定低溫下昆蟲的存活能力及過冷卻能力來研究昆蟲耐寒性已取得了很大進展[5]。昆蟲過冷卻點在個體之間和群體之間都有很大的變化，受環境、自身發育、機體代謝狀態等很多因素影響，這些因素進而也影響昆蟲的耐寒性，筆者對影響昆蟲過冷卻點的影響因素進行了分析和總結。

1 環境因素與食物

1.1 季節變化

昆蟲的抗寒能力呈現出季節性的變化趨勢，即隨著冬季低溫的到來，其抗寒能力逐漸增強，冬季過后又隨氣溫的回升，其抗寒力逐漸減弱。一般情況下，昆蟲的過冷卻點也具有明顯的季節性變化（表1）。例如，紅褐斑腿蝗（Catantops pinguis Stal）成蟲的夏季SCP為-4.0 ℃，冬季為-19.3 ℃[6]。從表1中可以看出，紅火蟻（Solenopsis invicta Buren）[7]工蟻成蟲夏季與冬季之間的過冷卻點變化幅度最小，是5.5 ℃。此外，蛛形綱的甲螨（Phauloppiap）[8]夏季與冬季之間的過冷卻點的變化幅度比昆蟲要大很多，達到25.9 ℃。由此可以看出季節變化對昆蟲的過冷卻點有較大的影響。這可能是由于隨著季節性氣溫變化，昆蟲體內產生一些抗凍保護物質，從而使其過冷卻點發生適應性的變化[9]。

有些昆蟲的過冷卻點值波動較大，每個季節既有最高值又有最低值。同時，這兩部分的比例隨著季節性氣溫的變化有明顯的差異。氣溫較低的月份，較低SCP的比例增加，而且最小過冷卻點的值也更低；反之，較高SCP的比例增加，過冷卻點最高值也升高[10-11]。一種昆蟲的SCP為何會產生如此大的差異，Sjursen等[8]的解釋是，環境變化時一些個體能緊跟微環境的變化，而另外一些個體則需要較長時間的馴化。

1.2 地理位置

低緯度地區昆蟲的過冷卻點高于高緯度地區昆蟲的過冷卻點（表2）。例如，從玉米上[14]采集的棉鈴蟲通州種群（低緯度）的過冷卻點極顯著高于饒陽種群（高緯度）。麥紅吸漿蟲（Sitodiplosis mosellana）[15]河南輝縣（N35°27'）種群和天津（N39°07'）種群的過冷卻點差異為6.88 ℃；二化螟（Chilo suppressalis）[16]福建福州（N26°8'）種群和北京（N39°38'）地區種群的過冷卻點差異只有0.23 ℃。總體來看，不同維度地區同種昆蟲的過冷卻點差異不是很大，這可能是由于因為食物源的不同或者是生境壓力的差異[17-18]。

在南方地區種群中，昆蟲過冷卻點的個體變異較小，中部和北方地區個體間的變異都明顯增加，即靠北的種群個體變異相對較大，接受自然選擇的范圍擴大。而南方種群通常處于穩定而溫暖的氣候條件下，缺乏提高過冷卻能力的進化壓力。由此可見，昆蟲過冷卻能力和耐寒性的提高有其生理基礎和進化上的意義[19]。

1.3 冷馴化

昆蟲在經歷一個脅迫溫度之上較溫和的低溫后，能夠增強其抵抗低溫傷害能力的現象稱為冷馴化[22]。這一過程可能是昆蟲應對不良環境的進化適應現象。在早春或晚秋氣溫急劇波動的情況下，許多昆蟲可以通過快速冷馴化反應迅速提高它們的耐寒能力，來抵御自然界這種晝夜溫度的變化或短時間的低溫暴露。昆蟲經冷馴化后過冷卻點降低。越北腹露蝗滯育卵[9]在5 ℃適應30 d后，平均過冷卻點從-20.1 ℃顯著降低到-25.9 ℃。草地螟（Loxostege sticticalis Linne）[23]幼蟲經4 ℃處理1 d的非滯育幼蟲冰點為-2.28 ℃，而處理25 d則降低到-4.76 ℃，過冷卻點可從-13.97 ℃降低到-21.47 ℃；經4 ℃處理25，35 d的滯育幼蟲，其過冷卻點分別為-25.82 ℃和-26.79 ℃，冰點分別為-5.59 ℃和-9.13 ℃。在低溫馴化過程中，昆蟲可在體內聚集低分子量的多元醇或大分子的抗凍蛋白，這些物質能很好地維持昆蟲的過冷卻狀態[24]。

1.4 降溫速率

在測定過冷卻的過程中發現，降溫速率影響昆蟲的過冷卻點。冷卻速度越小則過冷卻點就越低。在自然界中，昆蟲對低溫的感受都是一個逐漸的過程，因此，在實驗室測定昆蟲的過冷卻點時有必要考慮以較慢的冷卻速率來降溫[25]。在0.1～15.0 ℃·min-1降溫速率范圍內測定白蛾周氏嚙小蜂（Chouioia cunea Yang）和黃粉甲（Tenebrio molitor）老熟幼蟲的SCP和FP結果表明，白蛾周氏嚙小蜂的SCP和FP與降溫速率具有一定的線性關系，而黃粉甲老熟幼蟲的SCP和FP與降溫速率間的變化不規律，但在這個降溫速率范圍內隨著降溫速率的增加，2種試蟲的SCP都有緩慢升高的趨勢[26]。昆蟲的過冷卻點在不同的冷卻速率內其測定值常不一致，原因可能與環境、營養、發育階段和蟲體結構的不同有關。

1.5 食 物

昆蟲取食的食物不同，對過冷卻點也有影響。在不同寄主中發育的桔小食蠅（Bactrocera dorsalis Hendel）SCP值存在顯著差異，其中以取食浦桃者最高，為-11.03 ℃，取食苦瓜者最低，為-13.17 ℃[27]。為害黑松和烏尾松的松突圓蚧（Hemiberlesia pitysophila）雌成蟲的過冷卻點，顯著高于為害濕地松和火炬松的松突圓蚧的過冷卻點，二者間過冷卻點的溫差為0.9～2.3 ℃[28]。棉鈴蟲（Helicoverpa armigera）幼蟲取食棉花時產生的滯育蛹的過冷卻點，低于取食玉米的滯育蛹的過冷卻點。而且采自棉花的棉鈴蟲個體間過冷卻點比較穩定，而采自玉米的個體間變化較大[14]。由于寄主的營養直接作用于昆蟲體內抗寒性物質的積累和與低溫耐寒能力等有關的生理代謝過程，因此不同寄主對昆蟲過冷卻點的影響，可能是由于寄主的營養成分和含量的不同所造成的。

2 昆蟲發育階段與生物學狀態

大量研究表明，處于不同發育階段和不同生物學狀態的昆蟲其耐寒能力和過冷卻點都有較大的不同。由于昆蟲是完全變態的，體內不同發育階段所合成的物質組成有很大區別，比如幼蟲期主要物質為蛋白質、礦物質元素，并且含水量較高；而成蟲期主要為脂肪類、灰分，含水量較幼蟲期低[29]。

2.1 發育階段

一般而言，隨著幼蟲蟲齡的增加，過冷卻點逐漸降低（表3）。相鄰齡期幼蟲的過冷卻點均未呈現出顯著性差異，但低齡幼蟲和高齡幼蟲間存在顯著性差異[30]。例如光滑鱉甲（Anatolica polita borealis）[31]1齡幼蟲的SCP最高（-9.50 ℃），6齡最低（-15.7 ℃）。隨著蟲齡增加，SCP逐漸降低，表明耐寒性逐漸增強。但也有一些昆蟲的幼蟲隨著蟲齡的增加，過冷卻點逐漸升高（表3）。例如，甜菜夜蛾（Spodoptera exigua Hübner）[32]1齡幼蟲的SCP最低（-15.96 ℃），5齡的最高（-8.65 ℃）。這可能是由于昆蟲過冷卻能力與其體質量成反比，昆蟲越小越容易進入過冷卻狀態，較大昆蟲的過冷卻能力通常更為有限[2]。

2.2 雌雄成蟲

有些昆蟲的雌蟲的過冷卻點較雄蟲的過冷卻點低，但是差異不顯著（表4）。例如龍眼長跗螢葉甲（Monolepta occifuvis）成蟲[39]的雌蟲體過冷卻點為-13.38～-5.56 ℃，平均-10.75 ℃；雄蟲體過冷卻點為-11.22～-5.56 ℃，平均-8.88 ℃；雌蟲的耐寒性強于雄蟲。中華通草蛉（Chrysoperla sinica）第4代成蟲（越冬代）中[40]，雌蟲的SCP是-13.29 ℃，雄蟲是-12.84 ℃，雌蟲的抗寒能力極顯著高于雄蟲。表4中10種昆蟲雌蟲和雄蟲的SCP差異在0.14～1.87 ℃。呈此現象的主要原因是，昆蟲在越冬以后隨著春季光照時數的增加其自身滯育開始解除，雌雄開始交配，雌蟲進行大量取食并產卵，體內脂肪含量增加，其抗寒力較強；但雄成蟲由于其自身的使命就是和雌蟲交配，故其體內生理生化的變化不及雌蟲，其抗寒力較弱[40]。

2.3 滯 育

昆蟲滯育是指昆蟲事先感受到不利環境變化的某種信號（如光周期、溫度等），通過體內一系列生理、生化變化的編碼過程，隨后誘導的生長、發育、繁殖停滯的現象[47]，滯育亦是昆蟲對不良環境適應的一種反應。

昆蟲的滯育蟲體較非滯育蟲體的平均過冷卻點低（表5）。例如，越北腹露蝗（Fruhstorferiola tonkinensis Will.）滯育卵的SCP是-20.1 ℃，非滯育卵是-12.4 ℃[9]，差異較大（7.7 ℃）。二化螟（Chilo suppressalis Walker）滯育幼蟲SCP是-9.09 ℃，非滯育幼蟲SCP是-8.28 ℃[16]，差異較小（0.81 ℃）。滯育昆蟲可能是在滯育期間積累了脂肪、滲透保護物質等抗寒物質來增強其抗寒能力[48]。

2.4 化 性

魯新等[50]發現亞洲玉米螟（Ostrinia furnacalis Guenee）一化性越冬代的過冷卻點比二化性越冬代低4 ℃左右。一化性種群苜蓿切葉蜂（Megachile rotundata F.）前蛹[51]的過冷卻點低于二化性種群2.03 ℃，過冷卻點間的差異隨低溫（5 ℃）時間的增加而減少，低溫處理12個月后，兩種類型種群的苜蓿切葉蜂前蛹過冷卻點間的差異不明顯（P<0.05）。

3 昆蟲體內的含水量及抗凍保護物質

上述環境因素與食物、昆蟲的發育階段與生物學狀態等因素對昆蟲過冷卻點的影響最終都是通過昆蟲體內含水量、抗凍保護物質的產生與變化來實現的。

3.1 體內含水量

過冷卻點和昆蟲體內的總含水量呈正相關，總含水量高的蟲體，其SCP也較高。有些昆蟲的總含水量基本不變，SCP與結合水含量呈負相關，與自由水含量呈正相關。

甘薯天峨（Agrius convolvuli L.）幼蟲[52]和中華通草蛉（Chrysoperla sinica）成蟲[40]體內含水量和SCP 呈現出較好的正相關，體內含水量高的幼蟲，其SCP較高。桑螟（Diaphania pyloalis Walker）越冬幼蟲[53]和異色瓢蟲（Harmonia axyridis）[11]體內含水量隨氣溫下降逐漸減少，過冷卻能力隨體內水分的減少而增強，越冬后期隨水分的增加而降低。蟲體總水含量下降造成血淋巴體積減小，導致無機鹽類如K+、Na+和Mg2+含量增大，從而改變了離子平衡電勢和跨膜電化學勢[54]，提高了通過調節蟲體細胞原生質黏性和加大滲透壓，來降低蟲體結冰的可能性[55]。

光滑鱉甲（A.polita）成蟲在不同季節的總含水量基本穩定。準備越冬過程中，結合水含量升高，自由水含量降低。結合水含量與SCP高度相關，表明光滑鱉甲通過提高結合水的比例降低SCP[31]。將越冬期水稻二化螟（Chilo suppressalis Walker）幼蟲游離水和結合水含量分別與SCP呈正、負相關，說明二化螟幼蟲暴露于冬季低溫時，通過減少游離水含量而增加結合水含量來降低體液SCP，提高自身過冷卻能力[56]。在越冬前將體內游離水排出或部分轉化為結合水，以提高體液濃度確保體內較大又連續的水相可被一些組織或高濃度物質分隔，或誘導抗凍蛋白生成等來阻止蟲體胞內結冰，從而避免胞內或其它重要部位遭冷害[57]。

3.2 脂 肪

昆蟲蟲體內總脂肪的含量與其SCP呈負相關，體內脂肪含量越高，其SCP越低[31，40，52]。此外，游離脂肪和結合脂肪含量分別與過冷卻點呈正、負相關。

甘油含量與過冷卻點呈負相關，甘油含量越高，SCP越低。光滑鱉甲體內甘油濃度每增加1 mg·mL-1，蟲體的SCP降低0.62 ℃，表明該蟲可通過啟動體內甘油合成與代謝，來調控其耐寒性以應對低溫脅迫[31]。越冬期二化螟幼蟲游離脂肪和結合脂肪含量分別與同期SCP呈正、負相關，說明該越冬幼蟲可通過自發調節體內兩種脂肪比例來增強其耐寒性[56]。

3.3 小分子碳水化合物

過冷卻點與昆蟲體內碳水化合物的總量呈正相關。碳水化合物含量越高，SCP越低。總糖含量可作為昆蟲耐寒性的一個指標[56]。

昆蟲血淋巴內的葡萄糖、海藻糖、山梨醇等小分子碳水化合物，可以有效保護蟲體免于冰凍的損傷。由于這些物質結冰時被濃縮，它們的存在可以將鹽保持在溶液中，保證了體內正常代謝的進行。多元醇的羥基能有效地與水結合，減少水分流動性，從而也減少參與結冰的水分。多元醇類還可以通過調節胞外結冰所引的胞內脫水產生的滲透壓變化而穩定蛋白質的結構，減少快速結冰造成的損傷，從而協同血淋巴高效晶核，維持昆蟲的耐凍性[58]。海藻糖能穩定膜的結構，從而抑制體內水分降低所引起的膜和凝膠的轉相，海藻糖對膜結構的穩定效應大大強于雙糖、單糖或多元醇[59]。

3.4 抗凍蛋白

抗凍蛋白是具有熱滯效應，能結合并抑制新的冰晶生長，能抑制冰的重結晶的一類蛋白質。抗凍蛋白可降低溶液的冰點而不影響其熔點，由此產生抗凍蛋白特有的熱滯活性（thermal hysteresis activity，THA）。熱滯活性越大，抗凍能力越強[60]。例如，光滑鱉甲的THA的季節性變化與蟲體SCP的變化趨勢一致，血淋巴的熱滯活性每增加1 ℃，蟲體的SCP降低5.26 ℃[31]。此外，過冷卻點和AFP代謝有時間上的對應性，例如昆蟲Meracantha contracta，在2月份當地氣溫最低時，體液過冷卻點最低，AFP積累量也最大；隨著氣溫回升，過冷卻點也升高，AFP積累量減少[61]。目前認為AFP合成的調節是氣候因子（低溫，短日照，低的相對濕度）正向作用于中樞神經系統，導致內分泌激素（AKH，JH等）增加，促使在脂肪體合成AFP[62]。

根據氨基酸組成的差異，將AFP分成3種類型：Ⅰ型，富丙氨酸；Ⅱ型，富半胱氨酸；Ⅲ型，不富丙氨酸也不富半胱氨酸[63]。抗凍蛋白的功能除了能產生熱滯效應外，還能改變冰晶的形態，能夠結合并抑制新的冰晶生長，降低血漿的冰點；另外，它還能抑制冰的重結晶，防止小的冰晶凝聚成大的冰晶[64]。Rubinsky等[65]還發現AFP能阻斷Ca+、K+通道，維持細胞膜的穩定性，抑制冰晶對細胞膜的損傷。AFP還可能與昆蟲體內水分平衡有關，可增強細胞或體液的保水能力[66]。相比于其他的抗凍保護物質，由于抗凍蛋白能非依數性降低昆蟲體液的冰點[67]，因而認為抗凍蛋白在昆蟲的抗凍過程中起著十分重要的作用。

3.5 氨基酸

昆蟲進入越冬期后丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸等氨基酸含量增加，對比蟲體和血淋巴內氨基酸含量可以看出，惟有丙氨酸含量均增加，可以認為丙氨酸為越冬幼蟲的主要抗寒物質。丙氨酸參與降低過冷卻點的直接證據還沒有，但是在極地海洋魚的研究中發現，抗凍蛋白中60%的氨基酸殘基是丙氨酸。抗凍蛋白的主要作用是吸附潛在的晶核，而丙氨酸側鏈的甲基起著疏水屏障的作用，阻止了水分子同晶核結合。由此可見，游離丙氨酸可能參與屏蔽晶核的作用，從而降低冰點和過冷卻點[68]。

影響昆蟲過冷卻點的因素并不是單獨作用的，而是相互關聯，共同作用。大多數昆蟲都由幾種抗寒物質組成一個系統，如歐樺小蠹（Scolytus ratzeburgi）幼蟲的甘油-山梨醇-葡萄糖-海藻糖系統[69]，桑尺蠖（Phthonandria atrilineata）越冬幼蟲的小分子糖-氨基酸-糖蛋白系統[70]，黃地老虎（Agrotis segetum）幼蟲的小分子糖類-氨基酸-糖蛋白系統[71]。昆蟲利用多物質系統可以避免因某種物質過量積累而造成中毒，在寒冷適應過程中大量積累小分子抗寒物質，通過溶質效應降低體液的冰點和過冷卻點，同時這些物質也非常容易通過代謝產生和去除[72]。

4 冰核物質

在適當的低溫下，體系內需存在起始結冰的冰核，才能誘導冰晶產生，此物質稱為冰核劑。相對于昆蟲來說，冰核可以分為同源冰核和異源冰核。當同源冰核含量很高時，蟲體能保持較高的過冷卻狀態。低溫生物學研究表明，水分保持過冷卻的能力與其中存在的冰核有關，當只有同源冰核時，過冷卻可以保持-39 ℃[73]。而異源冰核的含量越高，蟲體的過冷卻能力越低，容易在接近0 ℃以下溫度結冰。一些越冬昆蟲之所以能在很低的溫度下保持過冷卻狀態，與其體內缺乏異源冰核有很大的關系[74]。異源冰核有生物冰核和腸道冰核兩類。

4.1 生物冰核

冰核細菌和冰核真菌能夠顯著升高避凍型昆蟲的過冷卻點。通過冰核細菌飼喂昆蟲或噴灑蟲體，能使谷蠢（Rhizopertha dominica Fabricius）體液的結冰溫度提高10.5 ℃[75]，使棉鈴蟲的冰點提高6.65 ℃[76]，使光肩星天牛（Anoplophora glabripennis Motschulsky）冰點提高7.1 ℃[77]，使印度谷螟（Plodia interpunctella Hübner）的冰點提高13 ℃[78]，使二化螟的過冷卻點提高14.4 ℃[79]。

利用冰核真菌F9502 （禾谷鐮刀菌Fusarium graminearum Schwabe）接種棉鈴蟲，使棉鈴蟲蛹的冰點提高了10.9 ℃[80]，使赤擬谷盜的平均過冷卻點提高了8.25 ℃[81]。

4.2 腸道冰核

腸道冰核主要是指昆蟲消化道內的食物顆粒、塵粒、部分植物蛋白質以及體內的含有蛋白質性質的冰核物質。在低溫時，冰核物質會誘發結冰，導致昆蟲消化道或細胞膨脹破裂而死。在冬季來臨之前，避凍型昆蟲可以通過排出腸道內的冰核物質使過冷卻點降低，增加過冷卻能力，降低蟲體結冰的危險。例如，非滯育的麻蠅在幼蟲與蛹的過渡期，通過排出異源冰核，過冷卻點從-11 ℃降至-23 ℃[82]。避免凍型幼蟲Ceruchus piceus 冬季通過清除腸腔內冰核物質，可使幼蟲的SCP從夏天的-7 ℃降低到冬季的-20 ℃[83]。

綜上所述，影響昆蟲過冷卻點的因素很多，這些因素相互關聯共同發揮作用。季節變化、食物等環境因素影響昆蟲的發育和生物學狀態，而這些因素對過冷卻點的影響最終都是通過昆蟲體內甘油、氨基酸、抗凍蛋白等抗凍保護劑的產生與變化來實現的。研究昆蟲的過冷卻點對于認識其抗寒特性與機理，進而保護農業益蟲，防治農業害蟲都有重要的意義。

參考文獻：

[1] Somme L. The physiologhy of cold hardiness research in terrestrial arthropods[J].Eur J Entomol， 1999 （96）：1-10.

[2] Baust J G， Rojas R R.Review—Insect cold hardiness：facts and fancy[J].J Insect Physiol， 1985，3l（10）：755-759.

[3] Lee R R.Insect cold-hardiness：to freeze or not to freeze [J].Bio Science，1989，39（5）：308-313.

[4] Bale J S. Insect cold hardiness：A matter of life and death[J].Eur J Entomol，1996，93：369-382.

[5] Renault D，Salin C，Varmier G， et al. Survival at low temperatures in insects：what is the ecological significance of the supercooling point？[J].Cryoletters，2002，23（4）：217-228.

[6] 王世貴， 古麗米熱·阿布克里木.紅褐斑腿蝗的耐寒能力及其季節性變化[J].應用生態學報，2006，17（6）：1133-1136.

[7] 陳浩濤，羅禮智，江幸福.我國大陸紅火蟻不同等級和蟲態過冷卻點的測定[J].昆蟲學報，2009，52（5）：502-508.

[8] Sjursen H，Somme L.Seasonal changes in tolerance to cold and desiccation in Phauloppia sp.（Acari，Oribatida）from Finse，Norway[J].J Insect Physiol，2000，46（10）：1387-1396.

[9] 陳偉，吳偉堅，劉婷，等.越北腹露蝗卵的過冷卻特性[J].昆蟲知識，2006，43（4）：479-481.

[10] 景曉紅，康樂.飛蝗越冬卵過冷卻點的季節性變化及生態學意義[J].昆蟲知識，2003，40（4）：326-328.

[11] 趙靜，于令媛，李敏，等.異色瓢蟲成蟲耐寒能力的季節性變化[J].昆蟲學報，2008，51（12）：1271-1278.

[12] Hou F，Ma J，Liu X， et al. Seasonal changes in antifreeze protein gene transcription and water content of beetle Microdera punctipennis（Coleoptera；Tenebrionidae） from Gurbantonggut desert in central Asia[J].Cryoletters，2010，31（5）：359-370.

[13] 孫緒艮，韓瑞東.赤松毛蟲越冬幼蟲抗寒性研究[J].山東農業大學學報：自然科學版，2003，34（3）：315-320.

[14] 楊燕濤，謝寶瑜，高增祥，等.寄主植物對棉鈴蟲越冬蛹抗寒能力的影響[J].昆蟲知識，2003，40（60） ：509-512.

[15] 陳華爽，雷朝亮，武予清，等.不同地區麥紅吸漿蟲圓繭過冷卻點的測定[J].華中農業大學學報，2012，31（2）：212-215.

[16] 張堵，吳孔明，林克劍，等.二化螟溫帶和亞熱帶地理種群的滯育特征與抗寒性差異[J].中國農業科學， 2005，38（12）：2451-2456.

[17] Leather S R.The ecology of insect overwintering[M].London：Cambridge University Press，1995.

[18] Quarles A，Kostecke R M，Phillips S A.Supercooling of the red imported fire ant（Hymenoptera： Formicidae）on a latitudinal temperature gradient in Texas[J].Southwest Nat，2005（50）：302-306.

[19] 陳兵，康樂.南美斑潛蠅地理種群蛹過冷卻點隨緯度遞變及其對種群擴散的意義[J].動物學研究，2003，24（3）：168-172.

[20] 鐘景輝，張飛萍，江寶福，等.不同地區松突圓蚧耐寒性的研究[J].中國生態農業學報，2010，18（1）：117-122.

[21] 劉寧，文麗萍，何康來，等.不同地理種群亞洲玉米螟抗寒力研究[J].植物保護學報，2005，32（2）：164-168.

[22] 王憲輝，齊憲磊，康樂.昆蟲的快速冷馴化現象及其生態適應意義[J].自然科學進展，2003，13（11）：1128-1133.

[23] 李朝緒，羅禮智，潘賢麗.草地螟滯育和非滯育幼蟲抗寒能力的研究[J].植物保護，2006，32（2）：41-44.

[24] Zachariassen K E. Physiology of cold tolerance in insects[J].Physiol Rev，1985，65（4）：799-832.

[25] 景曉紅，康樂.昆蟲耐寒性的測定與評價方法[J].昆蟲知識，2004，41（4）：7-10.

[26] 孫守慧，許哲，王亞斌，等.降溫速率和反復凍融對白蛾周氏嚙小蜂過冷卻點測定的影響[J].沈陽農業大學學報，2011，42（1）：50-53.

[27] 任璐， 陸永躍，曾玲，等.寄主對桔小實蠅耐寒性的影響[J].昆蟲學報，2006，49（3）：447-453.

[28] 鐘景輝，張飛萍，江寶福，等.不同寄主松樹對松突圓蚧耐寒性的影響[J].林業科學，2009，45（10）：100-106.

[29] 史樹森，徐偉，程彬，等.黃褐油葫蘆蟲體營養成分與發育階段的相關性研究[J].昆蟲知識，2005， 42（4）：439-443.

[30] 趙琦， 張云慧， 韓二賓，等.旋幽夜蛾各蟲態的過冷卻點測定[J].植物保護，2011，37（2）：63-66.

[31] 馬延龍，候鳳，馬紀.荒漠昆蟲光滑鱉甲的耐寒性季節變化及其生理機制[J].昆蟲學報，2009，52（4）：372-379.

[32] 韓蘭芝，翟保平，張孝羲.甜菜夜蛾的抗寒力研究[J].植物保護學報，2005，32（2）：169-173.

[33] 梁中貴，許永玉，孫緒艮，等.泰安地區松阿扁葉蜂越冬幼蟲抗寒性[J].生態學報，2005，25（12）：3259-3262.

[34] 劉曉靜，石萌，馬紀.小胸鱉甲各齡期幼蟲過冷卻點的測定[J].新疆農業科學，2012，49（6）：1080-1085.

[35] 馮從經，呂文靜，董秋安，等.低溫處理對亞洲玉米螟幼蟲抗寒性的誘導效應[J].昆蟲學報，2007，50（1）：1-6.

[36] 劉奎，彭正強，李文德，等.椰心葉甲過冷卻點的測定[J].植物檢疫，2005，19（1）：24-26.

[37] 鞠瑞亭，王鳳，肖娛玉，等.上海地區紅棕象甲的耐寒性研究[J].昆蟲學報，2012，53（2）：226-232.

[38] 徐淑，周興苗，曾俊雷，等.二化螟不同年齡段越冬幼蟲的耐寒性比較[J].植物保護學報，2009，36（1）：11-15.

[39] 楊朗，賢振華，鄧國榮，等.龍眼長跗螢葉甲成蟲耐寒性及卵的發育起點溫度和有效積溫的研究[J].中國農學通報，2009，25（02）：196-198.

[40] 郭海波，許永玉，鞠珍，等.中華通草蛉成蟲抗寒能力季節性變化[J].生態學，2006，26（10）：3240-3243.

[41] 闕曉堂，王竹紅，黃建.小黑瓢蟲過冷卻點和結冰點的測定[J].生命科學研究，2011，12（27）：80-84.

[42] 肖廣江，曾玲，李慶，等.椰心葉甲的耐寒力測定[J].昆蟲知識，2006，43（4）：527-530.

[43] 侯柏華，張潤杰.桔小實蠅不同發育階段過冷卻點的測定[J].昆蟲學報，2007，50（6）：638-643.

[44] 徐鹿，吳珍泉.美洲大蠊耐寒性的初步研究[J].福建農林大學學報，2009，38（5）：475-478.

[45] 呂寶干，韋曼麗，金啟安，等.椰心葉甲兩種寄生蜂過冷卻點及冰點測定[J].熱帶作物學報，2011，32（8）：1537-1540.

[46] 叢明亮，孟艷玲，王鵬，等.山東威海凹唇壁蜂過冷卻點的測定[J].延邊大學農學學報，2010，32（1）：56-58.

[47] 徐衛華.昆蟲滯育的研究進展[J].昆蟲學報，1999，42（1）：100-107.

[48] 陳豪，梁革梅，鄒朗云，等.昆蟲抗寒性的研究進展[J].植物保護，2010，36（2）：8-24.

[49] 郭線茹，高玉紅，羅梅浩，等.煙夜蛾滯育蛹和非滯育蛹的耐寒性[J].昆蟲知識，2006，43（2）：189-191.

[50] 魯新，周大榮.亞洲玉米螟化性與抗寒能力的關系[J].玉米科學，1997，5（4）：72-73，77.

[51] 李茂海，李建平，楊桂華，等.苜蓿切葉蜂化性與抗寒能力的關系[J].吉林農業科學，2009，34（4）：35-36.

[52] 蔣智林，文禮章，李有志.甘薯天蛾過冷卻點變化與生化成分的關系[J].昆蟲知識，2009，46（2）：294-297.

[53] 陳永杰，孫緒艮，張衛光，等.桑螟越冬幼蟲體內水分、脂肪、甘油的變化與抗寒性的關系[J].蠶業科學， 2005，31（1）：22-25.

[54] Kostal V，Yanagimoto M，Bastl J.Chilling-injury and disturbance of ion homeostasis in the coxal muscle of the tropical cockroach （Nauphoeta cinema）[J].Comp Biochem Physiol B，2006（143）：171-179.

[55] 楊大榮，楊躍雄，沈發榮.白馬蝠蛾幼蟲的抗寒性研究[J].昆蟲學報，1991，34（1）：32-37.

[56] 強承魁，杜予州，于玲雅，等.水稻二化螟越冬幼蟲耐寒性物質的動態變化[J].應用生態學報，2008，19（3）：599-603.

[57] Lundheim R，Zachariassen K E.Water balance of over-wintering beetles in relation to strategies for cold tolerance[J].J Comp Physiol B，1993，163（1）：1-4.

[58] 韓瑞東，孫緒艮，許永玉，等.赤松毛蟲越冬幼蟲生化物質變化與抗寒性的關系[J].生態學報，2005，25（6）：1352-1356.

[59] 李毅平，龔和.昆蟲耐凍的生理生化適應機制[J].昆蟲知識，1998，35（6）：364-369.

[60] Horwath K L， Easton C M， Poggioli G J，et al.Tracking the profile of a specific antifreeze protein and its contribution to thermal hysteresis activity in cold hardy insects[J].Eur J Entomol，1996（93）：419-433.

[61] Patterson J L，Duman J G.The role of thermal hysteresis producing proteins in the low temperature and water balance of larvae of the mealworm[J].Tenebrio Molitor J Exp Zool，1978（210）：361-367.

[62] Duman J G， Wu D W，Olsen T M， et al.Thermal-hysteresis proteins[J].Adv low-temp Biol，1993， 2（33）：131-182.

[63] Davies P L， Roach A H， Hew C L. DNA sequence coding for an antifreeze protein precursor from winter flounder [J].Proc Natl Acad Sci U S A，1982，79（2）：335-339.

[64] Antikainen M， Griffith M. Antifreeze protein accumulation in freezing-tolerant cereals[J]. Physiol Plant，1997（99）：423-432.

[65] Rubinsky B，Mattioli M， Araw A， et al. Inhibition of Ca2+ and K+ currents by “antifreeze” ptoteins[J].Am J Physiol，1992（262）：R542-R545.

[66] Ramsay J A. The rectal complex of the mealworm， Tenebrio molitor L.（Coleptera，Tenebrionidae） [J].Philosophical Transactions of the Royal Society of London，1964（248）：279-314.

[67] 費云標，江勇，趙淑慧.昆蟲抗凍蛋白的研究進展[J].昆蟲學報，2000，43（1）：98-100.

[68] 梁中貴，張衛光，劉學輝，等.松阿扁葉蜂越冬幼蟲體內抗寒物質分析[J].昆蟲知識，2005，42（6）：695-699.

[69] Holden C P， Storey K B. Purification and characterization of aldolase from the cold hardy insect Epiblema scudderiana：Enzyme role in ghycerol biosynthesis[J].Insect Biochem Mol Biol，1994，24（3）：265-270.

[70] 孫緒艮，郭慧玲.桑尺蠖越冬幼蟲的抗寒性研究[J].蠶業科學，2000，26（3）：129-132.

[71] 黃國洋，王蔭長，尤子平.黃地老虎抗寒機理初探[J].浙江林學院學報，1990，7（2）：140-146.

[72] 韓召軍，王蔭長，尤子平.陸生昆蟲抗寒性機制[J].昆蟲知識，1989，26（1）：34-42.

[73] Lee R E，Denlinger D L.Insects at low temperatures[M].New York： Chapman Hall，1991.

[74] Lindow S E.The role of bacterial ice nucleation in frost injure to plants[J].Annu Rev Phytopathol，1983（21）：363-384.

[75] Lee R E，Strong-gunderson J M，Lee M R， et al. Ice-nucleating active bacteria decrease the cold-hardiness of stored grain insects[J].J Econ Entomol，1992，85（2）：371-374.

[76] 晃龍軍，呂全，賈秀珍，等.生物冰核研究和應用前景[J].林業科學研究，2001，14（4）：446-454.

[77] 孫福在，邢偉，張永祥，等.冰核細菌對光肩星天牛幼蟲促凍殺蟲的初步研究[J].林業科學研究，1997，10（1）：96-99.

[78] 馮玉香，何維勛.細菌冰核提高印度谷螟過冷卻點的研究[J].昆蟲學報，1996，9（l）：53-57.

[79] Tsumuki H， Konno H， Maeda T，et al.An ice-nucleating active fungus isolated from the gut of the rice stem borer，Chilo suppressalis Walker （Lepidoptera：Pyralidae）[J].J Insect Physiol，1992，38（2）：119-125.

[80] 趙廷昌，張敏，孫福在，等.冰核真菌促凍棉鈴蟲的初步研究[C]//植物保護21世紀展望暨第三屆全國青年植物保護科技工作者學術研討會論文集，1998.

[81] 馮玉香，何維勛.冰核真菌削弱赤擬谷盜抗寒力的初步研究[J].昆蟲學報，2002，45（1）：148-151.

[82] 李冰祥，陳水林，蔡惠羅.過冷卻和昆蟲的耐寒性[J].昆蟲知識，1998，35（6）：361-364.

[83] Neven L G， Duman J G， Beals J M， et al.Overwintering adaptations of the stag beetle，Ceruchus piceus：Removal of ice nucleators in the winter to promote supercooling[J]. J Comp Physiol B，1986，156（5）：707-716.