乙肝患者外周血HBV抗原抗體表達及病毒載量與T細胞亞群檢測分析

[摘要] 目的 探討臨床中乙肝患者外周血的HBV抗原抗體的表達及病毒載量情況，并分析其與T細胞亞群之間的關系。 方法 選取我院2010年1～12月間的80例乙肝患者為研究組，另選取同期在我院體檢的80例健康對象為對照組，然后采取熒光定量法檢測HBV-DNA含量，微粒子酶免疫法檢測HBV原抗體的表達，流式細胞術檢測外周血T細胞亞群。 結果 HBV抗原抗體含量分為HBeAg陽性和HBeAg陰性，例數(shù)分別為50例、30例，對照組的CD3+、CD4+、CD8+含量均明顯高于HBeAg陽性組及HBeAg陰性組的CD3+、CD4+、CD8+的含量（P<0.05）。HBeAg陽性組及HBeAg陰性組的CD3+、CD4+、CD8+的含量比較無明顯的差異（P>0.05）。HBV-DNA含量分為三個亞組，<104 IU/mL組、（104-106）IU/mL組和（107-108）IU/mL組，例數(shù)分別為20例、25例、35例。對照組、<104 IU/mL組和（104～106）U/mL組以及（107～108）U/mL組的CD3+比較具有明顯差異（P<0.05）；對照組和（107～108）U/mL組的CD4+含量比較具有明顯的差異（P<0.05），有統(tǒng)計學意義；對照組和（104-106）IU/mL組以及（107-108）IU/mL組的CD8+比較差異有統(tǒng)計學有意義（P<0.05）。（104～106）IU/mL組和（107～108）IU/mL組的CD8+含量均明顯高于<104IU/mL組，差異有統(tǒng)計學有意義（P<0.05）。 結論 臨床中乙肝患者的HBV抗原抗體和病毒載量均與T細胞亞群之間存在聯(lián)系，并且其不同含量的T細胞亞群也存在差異，均異于常人。因此，臨床中可以通過測定病毒載量與T細胞亞群，并有效了解患者的機體免疫狀況，從而更好地指導臨床治療。

[關鍵詞] 乙肝患者；外周血；HBV抗原抗體；病毒載量；T細胞亞群

[中圖分類號] R51；R44 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）35-0071-03

乙型肝炎在我國具有較高的發(fā)病率，嚴重影響人們的身體健康。多數(shù)臨床患者存在免疫功能紊亂，出現(xiàn)這種情況與患者的乙肝病毒清除情況有關[1]。乙肝病毒的激活常常是由于T淋巴細胞的作用，使得具有特異性的CD8+和輔助性的CD4+細胞釋放更多的炎癥因子，從而引發(fā)病毒性肝炎的發(fā)生。臨床中乙型肝炎的發(fā)生和發(fā)展常常與宿主細胞的免疫功能狀態(tài)有密切的聯(lián)系，而T細胞亞群調節(jié)紊亂是誘發(fā)HBV在患者體內持續(xù)復制的重要原因。因此，筆者結合自己多年的臨床工作經(jīng)驗，對乙肝患者外周血的HBV抗原抗體的表達及病毒載量情況進行測定，并分析其與T細胞亞群之間的關系，為臨床中診斷與治療該病提供參考，具體分析如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本次研究選取我院2010年1～12月間的80例乙肝患者為研究組，另選取同期在我院體檢的80例健康對象為對照組。對照組男40例，女40例，年齡22～60歲，平均（47.3±2.3）歲，本組患者均無肝功能異常，體檢正常。研究組男42例，女38例。年齡20～57歲，平均（46.1±2.6）歲。均符合全國病毒性肝炎和肝病學術會議制定的《病毒性肝炎防治方案》中的臨床診斷標準。對照組和研究組的基本資料比較無明顯差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1標本采集 病毒載量和HBV抗原抗體的標本采集：均給予空腹靜脈外周血采血5.0 mL，并將其進行離心處理，離心率為3000 r/min，離心時間為5 min。然后選取上層血清備用，置入-20℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩細胞檢測標本：主要是靜脈采血2.0mL，并將其置于真空管中備用，并在6 h內進行檢測處理[2]。

1.2.2 病毒載量檢測 本次研究對于病毒的檢測主要采取熒光定量法進行檢測，主要采取德國的Roche lightcycle480型的PCR定量檢測儀進行測定，試劑由上海申友生物工程股份有限公司提供。整個操作流程均嚴格按照試劑盒的說明書進行，并詳細記錄檢測情況[3]。

1.2.3 HBV抗原抗體檢測 本研究對HBV抗原抗體的檢測主要采取微粒子酶免疫法，主要采用美國Abbott公司生產(chǎn)的ARCHITECT i2000型診斷分析儀及配套試劑，整個操作均嚴格按照試劑盒說明書進行，詳細記錄檢測情況[4]。

1.2.4 T細胞亞群檢測 T細胞亞群主要采取流式細胞術，采用FACSCalibur儀進行檢測，其中熒光素標記單克隆抗體和溶血素均由美國BD公司提供，整個操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。首先，按照試驗要求進行染色處理，然后進行流式細胞分析。開機后自動檢測儀器的靈敏度，并開啟自動設定試驗，采取sminulset軟件分析T細胞亞群，并將其獲得的結果分析T淋巴細胞數(shù)（CD3+）和輔助/誘導T細胞（CD4+）以及抑制/細胞毒T細胞（CD8+）占淋巴總細胞的比例[5]。

1.3 亞分組方法

本次研究依據(jù)病毒載量和HBV抗原抗體含量進行亞分組，并探討其與T細胞亞群之間的聯(lián)系。

1.4 統(tǒng)計學分析

本次研究的數(shù)據(jù)資料均采取SPSS19.0的統(tǒng)計學軟件進行分析與處理，計量資料采取均數(shù)±標準差（x±s）表示，獨立樣本采取t檢驗，多組間計量資料比較進行方差檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 HBV抗原抗體含量與T細胞亞群聯(lián)系

本次研究主要將HBV抗原抗體含量分為HBeAg陽性和HBeAg陰性，例數(shù)分別為50例、30例，對照組的CD3+、CD4+、CD8+含量均明顯高于HBeAg陽性組以及HBeAg陰性組的CD3+、CD4+、CD8+的含量，且組間比較具有明顯差異（F=23.12、18.35、14.21，P<0.05）。HBeAg陽性組以及HBeAg陰性組的CD3+、CD4+、CD8+的含量比較無明顯差異（t=0.231、0.503、0.236，P>0.05）。見表1。

表1 HBV抗原抗體含量與T細胞亞群聯(lián)系（x±s，%）

注：與對照組比較，*P<0.05

2.2 病毒載量與T細胞亞群聯(lián)系

本次研究將HBV-DNA含量分為三個亞組，<104 IU/mL組、（104～106）U/mL組和（107～108）IU/mL組，例數(shù)分別為20例、25例、35例。對照組、<104 IU/mL組和（104～106）IU/mL組以及（107-108）IU/mL組的CD3+比較具有明顯差異（F=12.31，P<0.05）；對照組和（107～108）IU/mL組的CD4+含量比較具有明顯差異（t=7.24，P<0.05）；對照組和（104～106）IU/mL組以及（107～108）IU/mL組的CD8+比較具有明顯差異（F=8.23，P<0.05）。（104～106）IU/mL組和（107～108）IU/mL組的CD8+含量均明顯高于<104IU/mL組，差異有統(tǒng)計學有意義（F=9.21，P<0.05）。見表2。

表2 病毒載量與T細胞亞群聯(lián)系（x±s，%）

注：與對照組比較，*P<0.05；與<104IU/mL組比較，#P<0.05

3 討論

乙型肝炎是臨床中常見疾病之一，在我國具有較高的發(fā)病率，嚴重影響人們的身體健康。臨床中通過檢測抗原抗體進行診斷該病的病毒傳染情況，但是這種診斷方法并不能夠直接地反映患者乙肝病毒的含量情況[6，7]。隨著臨床中人們對該病的不斷研究，HBV感染的不同時期和不同狀態(tài)下，患者血清中病毒載量存在明顯的差異，并且這種變化與患者的免疫功能有密切的聯(lián)系[8，9]。因此，臨床中可以有效地依據(jù)HBV-DNA定量分析進行判斷HBV感染的情況，從而為患者的治療提供指導方向[10]。

機體的免疫系統(tǒng)主要是通過對一系列的免疫細胞進行調節(jié)，從而發(fā)揮其具體的免疫功能[11]。其中T淋巴細胞的調節(jié)是整個免疫過程中的一個重要過程。T淋巴細胞一般可以分為CD4+和CD8+兩種亞群，在臨床免疫疾病的診斷中具有重要的應用價值[12，13]。臨床資料顯示，對于完全清除病毒急性HBV感染患者體內存在有特異性的CD4+T淋巴反應，同時其CD4+T淋巴細胞的數(shù)量也明顯降低，使得CD8+T淋巴細胞的活性也快速降低。在乙型肝炎的潛伏期患者出現(xiàn)的HBV特異性CD4+T與CD8+T淋巴細胞反應，主要是由于這些細胞控制HBV感染。臨床資料顯示，人體中的各個淋巴細胞亞群之間具有相互協(xié)調的作用，從而有效地維持正常的免疫功能。但是不同的淋巴細胞亞群的數(shù)量和相關的功能異常往往會導致相關疾病的發(fā)生[14]。而乙型肝炎屬于肝病毒侵入肝臟細胞之后而引發(fā)的一系列免疫系統(tǒng)疾病，并且多數(shù)患者存在T細胞免疫功能失調的情況，整個活動與其病情的發(fā)展有密切聯(lián)系[15]。

通過本次的臨床研究分析，臨床中乙肝HBeAg陽性和HBeAg陰性患者的CD3+和CD4+均明顯低于正常人。由此分析，HBV感染的患者很容易出現(xiàn)免疫下降，身體的抵抗力也明顯下降。其中CD3+T淋巴細胞的數(shù)量下降進一步地提示機體參加細胞的免疫反應不足，也提示HBV感染患者體內的細胞免疫功能比較低下。同時數(shù)據(jù)還顯示，HBV感染患者的CD8+含量明顯高于正常人。由此分析，T抑制/細胞毒細胞的比值增加，從而有效地增加患者溶血機制發(fā)揮其抑制作用，增加病情發(fā)展。本組數(shù)據(jù)還顯示，病毒載量在低于<104 IU/mL時，CD3+異于常人。進一步分析，機體總的細胞免疫功能下降，而病毒載量達到（104～106）IU/mL的情況時，CD8+含量與正常人比較具有明顯差異。進一步分析，患者的機體免疫逐漸下降，從而增加病情嚴重性。本次研究數(shù)據(jù)還顯示，在病毒載量達到（107～108）IU/mL的情況下，CD3+、CD4+、CD8+的含量均異于常人。由此分析，具有高載量病毒感染的乙型感染患者，在出現(xiàn)有機體免疫下降的同時還伴有免疫損傷的情況發(fā)生[16，17]。另外，CD8+T淋巴細胞的不斷增加，使得CD4+T/CD8+T的淋比值下降。同時，也進一步提示HBV感染很容易影響外周血T巴細胞亞群的不斷變化，很容易加重患者體內細胞免疫功能的紊亂情況。

綜上所述，乙肝患者的HBV抗原抗體和病毒載量均與T細胞亞群之間存在聯(lián)系，并且其不同含量的T細胞亞群也存在差異，均異于常人。因此，臨床中可以通過測定病毒載量與T細胞亞群，有效了解患者的機體免疫狀況，從而更好地指導臨床治療。

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（收稿日期：2013-10-22）