俄色總黃酮對糖尿病的藥理作用研究

[摘要] 目的 探討俄色總黃酮（ Total Flavonoids from E’se， ES）對糖尿病（Diabetes Mellitus，DM）小鼠的治療作用。方法 建立鏈脲佐菌素（ Streptozotocin，STZ）致DM小鼠模型，灌胃ES 180、90、45 mg/kg連續7 d。結果 試驗后測得DM小鼠體重減輕，血糖升高，肝及脾腫大、胸腺萎縮的癥狀得以緩解，肝糖原含量有一定程度的降低、血清胰島素含量有一定程度的升高。結論 ES能改善DM小鼠一般狀態，明顯降低肝臟和脾臟系數，有調節血糖、肝糖原合成和血清胰島素分泌作用趨勢，具有治療DM的作用。

[關鍵詞] 糖尿病；俄色總黃酮；鏈脲佐菌素

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2013）05（b）-0025-03

藏藥“俄色”是我國四川省甘孜藏族自治州民間習用藏藥，最早記載于《藏藥晶鏡本草》和《藏漢大辭典》，經本草考證為來自變葉海棠M.toringoides （Rehd.） Hughes.或花葉海棠M.transitoria （Batal.） Schneid.的葉[1]，在當地常與酥油同煮作茶飲，對防治高血糖、高血脂和高血壓效果較好。ES是從俄色中提取的有效成分群，其藥理作用尚不明確。該課題采用實驗性DM模型，擬初步探討ES對DM的治療作用，從而為俄色的開發提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

ES，由西南民族大學少數民族藥物研究所提供，批號20100709，人日用量為450 mg，相當于原藥材15 g/kg，用蒸餾水配制成4.5、9.0、18.0 mg/ml藥液備用；STZ（批號S0130），臨用前用檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH=4.3）配制成15 mg/mL；鹽酸二甲雙胍片（批號110S124）；檸檬酸、檸檬酸鈉（批號分別為：20101026、20101017），按1：1.32的比例配成緩沖溶液（pH=4.3）；肝/肌糖元試劑盒（批號20111223）；小鼠胰島素ELISA試劑盒，（批號201204）。

1.2 動物

昆明種小鼠，清潔級，體重雄性23～26 g，雌性18～22 g，由成都中醫藥大學動物研究中心提供，動物質量合格證號：SCXK（川）2008-11。

1.3 主要儀器

羅氏血糖檢測儀及血糖試紙；TD12001B型電子天平；Varioskan型多功能酶標儀。

1.4 實驗方法

1.4.1 DM小鼠模型制備 取健康、合格的SPF級昆明種小鼠100只，雌雄各半，待適應環境后，分為空白組（N=10）和造模組（N=90）。將小鼠禁食不禁水12 h后，參考文獻報道并根據預試，造模組按150 mg/kg腹腔注射STZ溶液，空白組注射生理鹽水，給藥體積10 mL/kg，然后常規飼料喂養。3 d后，禁食6 h，尾尖采血測血糖，以空腹血糖>11.1 mmol/L者為DM小鼠模型，其余動物淘汰。

1.4.2 分組與給藥 將造模成功的小鼠按血糖和體重隨機分成模型組、二甲雙胍組和ES高、中、低劑量組。自模型制備成功當天開始灌胃相應藥液10 mL/kg，其中空白組和模型組灌胃蒸餾水，ES高、中、低劑量組給藥劑量依次為180、90、45 mg/kg，1次/d，連續7 d。

1.4.3 指標測定 實驗期間觀察動物的一般狀態，隔日稱體重。給藥第3 d和第7 d測定給藥后1 h空腹血糖；第7 天各組小鼠測血糖后眼眶取血，酶聯免疫法測定血清胰島素水平，剖取肝、脾和胸腺，稱濕重，計算臟器系數（臟器濕重/體重×100%），留取部分肝臟組織，勻漿后測定肝糖原。

1.4.4 統計方法 實驗數據采用SPSS 17.0統計軟件包進行分析。所有數據均以均數±標準差（x±s）表示，數據分方差齊性與方差不齊，采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 對一般狀態的影響

造模的90只小鼠中共49只血糖超過11.1 mmol/L，造模成功率約60%。注射STZ后，模型小鼠在24～48 h內即出現多飲、多食、多尿和體重減輕，小鼠精神萎靡不振，活動減少，被毛逐漸稀疏無光澤，甚至泛黃，排泄物有異味。ES高、中、低劑量灌胃模型小鼠可改善上述癥狀，體重有升高趨勢，但與模型組比較無統計學意義。二甲雙胍能改善模型小鼠整體狀態，體重無明顯上升。體重變化如圖1所示。

2.2 對空腹血糖的影響

與空白組相比，模型組血糖在給藥期間顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，ES高、中、低劑量在給藥后第3、第7 天均有降低血糖的趨勢，以高劑量作用最明顯，但差異無統計學意義。二甲雙胍組在第3天血糖明顯低于模型組（P<0.01），第7天亦降低，但差異無統計學意義。結果見表1。

①與空白組比較，Levene方差齊性檢驗，治療前、第3天、第7天的F值分別是4.326、2.876、9.560，P值分別為0.002、0.023、0.000，均為方差不齊，采用Tamhane檢驗，模型組與空白組比較，治療前、第3天、第7天的P值分別為0.001、0.000、0.000；

②與模型組比較，Levene方差齊性檢驗，第3天的F值分別是2.876，P值分別為0.023，為方差不齊，采用Tamhane檢驗，二甲雙胍組在第3天P值為0.002。

2.3 對肝、脾、胸腺臟器系數的影響

DM小鼠肝、脾臟器系數較空白組均升高，其中肝臟系數有顯著性差異（P<0.01）。與模型組比較，ES高劑量顯著降低肝臟系數，中劑量顯著降低脾臟系數（P<0.05）。二甲雙胍有降低脾臟系數的趨勢。見表2。

①與空白組比較，Levene方差齊性檢驗，肝臟系數、脾臟系數、胸腺系數的F值分別是1.157、1.048、0.257，P值分別為0.342、0.400、0.935，均為方差齊，采用LSD檢驗，模型組與空白組比較，肝臟系數、脾臟系數、胸腺系數的P值分別為0.000、0.168、0.065；

②與模型組比較，Levene方差齊性檢驗，肝臟系數、脾臟系數的F值分別是1.157、1.048，P值分別為0.342、0.400，均為方差齊，采用LSD檢驗，ES高劑量肝臟系數P值為0.016；ES中劑量脾臟系數P值為0.043。

2.4 對肝糖原和血清胰島素的影響

DM小鼠血清胰島素水平有降低趨勢，肝組織糖原有升高趨勢，但與空白組比較均差異無統計學意義。與模型組比較，ES各劑量肝糖原含量有降低，高、低劑量血清胰島素有升高，但均無統計學意義。二甲雙胍有降低肝組織糖原作用趨勢。結果見圖2。

3 討論

DM是由遺傳因素和環境因素導致的慢性全身性代謝性疾病，全球發病率高，預計至2025年，世界上的DM患者數目將達到3.8億[2]，并發癥多，嚴重影響患者生活質量，并威脅生命，因此DM的防治成為世界難題。許多中藥和其他民族藥被報道具有降血糖作用，機制為保護、修復和促進胰島β細胞分泌、拮抗升糖激素、提高胰島素敏感性、增強對糖的吸收利用和糖原合成、抑制α-葡萄糖苷酶活性等[3]。大劑量STZ誘導的1型DM模型是經典的模型之一，其機理是破壞胰島β細胞從而導致體內胰島素的絕對不足。該課題在參考文獻劑量的基礎上并結合預試，以150 mg/kg一次性腹腔注射制備模型，出現典型的“三多一少”癥狀和持續的高血糖，模型建立成功，成模率達60%以上。ES 45、90、180 mg/kg灌胃可明顯改善上述癥狀，具有降低血糖的趨勢。

STZ所致DM小鼠肝臟系數變大，肝功能損傷，從而影響肝臟調節血糖功能[4]。有文獻報道該模型小鼠有脾臟和胸腺系數的降低，從而導致免疫功能下降[5]。該研究中模型小鼠脾臟系數無明顯變化，胸腺系數有所下降，ES高劑量能明顯降低肝臟系數，同時有升高胸腺系數的作用趨勢，提示本藥可通過改善肝功能和免疫功能調節血糖。

機體的血糖濃度主要是通過肝臟調節、血糖自身調節和神經-激素調節3大途徑來調節的。其中，肝臟主要是通過糖原的合成與分解及糖異生作用調節血糖，當血糖濃度高于正常時，肝糖原合成作用加強而糖異生減弱，使血糖降低。胰島素是機體內唯一的降血糖激素，主要由胰島β細胞分泌，DM是因為機體胰島素的絕對或相對不足或機體對胰島素敏感性下降所致。該實驗中，因模型組小鼠一直處于高血糖狀態，刺激肝臟肝糖原合成增多，經ES或二甲雙胍治療后，血糖水平有所下降，因此肝糖原合成亦相對減少，如結果所示。模型小鼠血清胰島素水平有下降的趨勢，經ES治療后有所升高，提示，ES可能有促胰島素分泌作用。

綜上，ES可通過改善全身狀態、調節糖原合成和促進胰島素分泌、增強免疫等多途徑綜合作用治療DM，具有開發前景。

[參考文獻]

[1] 王道清，李 敏，石萬銀.藏藥“俄色”的資源調查及生藥學研究[J].中藥與臨床，2011，2（3）：14-16.

[2] 邵義文，嚴群超，朱 媛.中藥對糖尿病并發癥的治療現狀[J]. 廣東藥學院學報，2009，25（1）：108-110.

[3] 盧兆蓮，黃才國.中藥降糖作用機理的研究進展[J].中醫藥導報，2009，15（11）：76-78.

[4] 邢莎莎，陳 超.香椿子總多酚對糖尿病小鼠的糖血糖作用[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（11）：169-171.

[5] 黃桂紅，黃純真，黃仁彬.陽桃根多糖對糖尿病小鼠胰島素及胸、脾指數的影響[J].中國藥師，2009，12（7）：848-850.

（收稿日期：2012-12-28）