兩種運送培養基及無菌棉拭子維持細菌活性能力的比較

2013-12-31 00:00:00杜玉海葉金艷吳莉萍

中國現代醫生 2013年14期

[摘要] 目的比較兩種運送培養基以及無菌棉拭子三種標本運送系統維持細菌活性的能力。方法選用金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌，在0 h、1 h、4 h、8 h、12 h、24 h分別檢測它們在三種運送系統上存活的情況，每個時相點重復檢測10次。結果金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌24 h內在三種運送系統上存活，且菌量無明顯變化。但對苛養菌包括化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌在兩種運送培養基上的存活時間和菌量不同程度優于無菌棉拭子。結論運送培養基運送臨床微生物標本效果好于無菌棉拭子，特別是對苛養菌的細菌培養意義重大。

[關鍵詞] 運送培養基；無菌棉拭子；細菌培養

[中圖分類號] R378 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）14-0085-04

微生物標本的正確采集和及時送檢是臨床診斷、疾病預防和控制、食品衛生管理和監督、醫學衛生科學研究等領域的基礎性工作，而期間的樣品運送培養對檢測結果的正確起著關鍵性的作用[1，2]。目前大部分醫院多使用一次性無菌棉拭子采集和運送標本，由于無菌棉拭子不能為標本中的細菌提供養分和水分，放置時間過長，標本易干燥，導致細菌死亡，降低檢出率，甚至造成假陰性。為此，本課題組實驗室出于運送病原菌樣品的需要，引進兩種一次性使用運送培養基，以期延長標本中細菌存活時間，避免或盡量減少出現假陰性。但運送培養基維持細菌活性的能力如何以及與無菌棉拭子比較有何區別少有文獻報道。本實驗主要探討兩種運送培養基及無菌棉拭子維持細菌活性的能力，以便選擇一個更適用于臨床的標本運送系統。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

金黃色葡萄球菌質控菌株ATCC25923，大腸埃希菌質控菌株ATCC25922，白色念珠菌質控菌株ATCC64548，其他為臨床標本隨機分離菌株，包括福氏志賀菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌。

1.2材料

兩種運送培養基（法國生物梅里埃公司、浙江拱東醫療科技有限公司生產）；無菌棉拭子（浙江拱東醫療科技有限公司生產）；哥倫比亞血平板（鄭州博賽生物技術股份公司生產）；巧克力平板（法國生物梅里埃公司生產）；淋球菌平板（鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產）；沙保羅氏平板（江門市凱林貿易有限公司生產）。

1.3 方法

①將待測菌培養18～24 h，挑取菌落溶于無菌生理鹽水，用比濁儀調至0.5麥氏單位，再稀釋10倍備用。②每種菌液用三種運送系統棉拭子各6支沾取。③分成6個時間段：0 h、1 h、4 h、8 h、12 h、24 h，各菌株分別接種于相適應培養基平板，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌接種于哥倫比亞血平板，卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌接種于巧克力平板，淋病奈瑟菌接種于淋球菌平板，白色念珠菌接種于沙保羅氏平板。四分區劃線，放入35.5℃、5%CO2孵箱培養24～48 h觀察并記錄各菌株生長情況，按四分區劃線記錄生長情況，一區～四區生長分別記錄為：1～4對應+～++++，0表示平板未見細菌生長。每組實驗重復10次。

1.4統計學分析

采用SPSS19.0軟件處理，所有數據都以均數±標準差（x±s）表示，組間比較使用方差分析，兩兩比較采用t檢驗，P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

三種運送系統對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌24 h內維持細菌活性能力無明顯區別。但對所選苛養菌，兩種運送培養基維持細菌活性能力不同程度好于無菌棉拭子，尤其是卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌。見表1～6。

3 討論

微生物標本采集后的及時運送對病原菌的培養和正確檢測起著關鍵性的作用[3]。按規范，從標本采集到微生物實驗室標本接種不得超過2 h[4]。目前標本采集后，多由護工（少量的由護士）運送至實驗室，由于護工要兼顧多個科室的工作，不是每次都能隨叫隨到，故標本采集到送至微生物實驗室接種培養經常超過2 h，如遇夜班時間，放置時間可能會更長。有些細菌如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌，特別是淋病奈瑟菌容易死亡，放置時間過長，會降低檢出率，導致細菌培養出現假陰性，影響臨床醫生的診斷和治療[5-8]。

目前，大部分醫院多使用一次性無菌棉拭子采集和運送標本，這主要是因為其價格便宜，操作簡便，基本上也能滿足標本采集的要求。無菌棉拭子的不足之處就在于它不能為標本中的細菌提供養分和水分，維持細菌活性的能力差，易導致細菌死亡，影響檢測的正確性。本實驗數據表明，如果使用無菌棉拭子采集細菌、培養標本，那么從標本采集到實驗室接種就不能超過1 h，特別是淋病奈瑟菌的采集、運送到接種培養，最好在0.5 h內完成，否則難于保證檢測的正確性[9，10]。

本實驗數據表明，課題組實驗室引進的兩種一次性使用運送培養基，可為所選各種細菌提供良好的生存環境，有利于采集標本中細菌的存活。試驗所選的兩種運送培養基均是由一支無菌纖維拭子和含有能維持細菌生物活性的半固體培養基塑料管組成。培養基能為插入其中的標本提供養分和水分，保證細菌存活，使標本能夠較長時間保存[11]。本實驗數據表明，臨床標本采集后，使用兩種運送培養基轉運4 h內，完全可保證細菌存活，特別是梅里埃運送培養基，即使遇到夜班，標本放置過夜，仍能保持標本中的細菌存活，這為臨床標本的采集、運送和及時接種、培養、檢驗留出了足夠的時間和空間，為避免臨床病原菌的漏檢、提高檢測的正確性創造了有利條件。

本實驗所選菌種為臨床常見病原菌[12-15]，對環境不敏感的細菌，如金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌，三種運送系統24 h內細菌數量未見明顯減少（P > 0.05），其中白色念珠菌24 h帶菌量還略有增加。但對苛養菌，如流感嗜血桿菌、卡他布蘭漢菌、淋病奈瑟菌，所選兩種運送培養基與無菌棉拭子維持細菌活性能力的差異比較明顯（P < 0.05）。運送培養基對化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他不蘭漢菌、流感嗜血桿菌24 h內維持細菌活性能力較好，24 h帶菌量變化不大（P > 0.05）。而無菌棉拭子對卡他不蘭漢菌、流感嗜血桿菌8 h即無細菌生長，特別是淋病奈瑟菌，1 h帶菌量明顯減少（P < 0.05），4 h無細菌生長。

兩種運送培養基對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、白色念珠菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌、流感嗜血桿菌24 h內維持細菌活性能力相似（P > 0.05），只是梅里埃運送培養基對肺炎鏈球菌24 h帶菌量略有減少，而拱東運送培養基流感嗜血桿菌24 h帶菌量有減少。兩種運送培養基在對維持淋病奈瑟菌活性方面區別比較明顯（P < 0.05），拱東生產的運送培養基4 h內無變化，8 h減少，12 h無細菌生長，梅里埃生產運送培養基24 h內帶菌量未見減少，可見對于淋病奈瑟菌，梅里埃運送培養基要優于拱東運送培養基。

綜上所述，本課題組實驗室引進的兩種一次性使用運送培養基維持細菌活性的能力明顯優于無菌棉拭子，更適合臨床、公共衛生和科研使用。在兩種運送培養基中，梅里埃運送培養基的性能優于拱東運送培養基，即使夜班采集的標本擱置過夜仍能保證細菌存活。本研究對三種運送系統作了較為詳細、客觀的評價，為臨床選擇和運用提供了科學依據。

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