液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用探析

摘 要：質(zhì)譜技術(shù)是一種高效的分析技術(shù)，使用氣相色譜、液相色譜等技術(shù)的分離功能將混合物中的成分分離出來，使用質(zhì)譜對(duì)分離出來的組分進(jìn)行鑒定。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)合使用比液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)合使用技術(shù)能對(duì)復(fù)雜樣品分析的靈敏度更高。本文對(duì)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用情況進(jìn)行了探討和分析。

關(guān)鍵詞：液相色譜；串聯(lián)質(zhì)譜；檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)；應(yīng)用

中圖分類號(hào)：R446.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-0515（2013）8-022-01

雖然色譜和質(zhì)譜技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)中一種重要的技術(shù)，但是仍然很少被應(yīng)用在臨床的實(shí)驗(yàn)中，通常只在少數(shù)的專業(yè)性實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用。主要是因?yàn)楹同F(xiàn)在普遍實(shí)驗(yàn)的免疫分析方法和臨床化學(xué)分析方法比較，色譜和質(zhì)譜的技術(shù)操作要更加熟練，在應(yīng)用的過程中經(jīng)常會(huì)發(fā)生較為復(fù)雜的故障和問題。隨著液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（簡稱LC-TMS）技術(shù)的逐步完善，在臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中得到了廣泛的應(yīng)用和發(fā)展。

一、液相色譜-質(zhì)譜

在70年代后期到80年代初期，高效液相色譜技術(shù)得到了發(fā)展，同時(shí)也推動(dòng)了質(zhì)譜技術(shù)的進(jìn)步[1]。但是，液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)在臨床的應(yīng)用中仍存在著較多的問題，如在實(shí)驗(yàn)中，需要在常壓、常溫的環(huán)境下進(jìn)行待測(cè)物的離子化和容積的蒸發(fā)，才可以在高效液相色譜中使用質(zhì)譜技術(shù)。

二、串聯(lián)質(zhì)譜

串聯(lián)質(zhì)譜（簡稱TMS）的主要技術(shù)是將撞擊誘導(dǎo)解離（CID）進(jìn)行引入，對(duì)撞擊誘導(dǎo)解離碎片的第二級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行分析。串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)是使用中性丟失掃描、子離子掃描或者是母離子掃描等掃描形式取得豐富的化合物結(jié)構(gòu)的信息。子離子掃描主要應(yīng)用在特定質(zhì)量數(shù)的化合物結(jié)構(gòu)分析中，母離子掃描主要是對(duì)結(jié)構(gòu)類似物進(jìn)行快速的尋找，而中性丟失掃描是補(bǔ)充母離子的掃描結(jié)果。使用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）可以對(duì)復(fù)雜樣本體系中的目標(biāo)化合物進(jìn)行快速的定量，一般第一級(jí)質(zhì)譜按照質(zhì)荷比選擇對(duì)應(yīng)的化合物母離子，當(dāng)母離子進(jìn)到撞擊室后，和氬氣分子進(jìn)行撞擊解離，分成幾個(gè)典型的子離子，當(dāng)子離子產(chǎn)生后，按照對(duì)應(yīng)的質(zhì)荷比在第二十四級(jí)桿中開始對(duì)子離子進(jìn)行掃描。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)中，質(zhì)譜指紋的生成是選定完整母離子在撞擊室控制條件下進(jìn)行的解離的過程。因?yàn)槭褂昧藘蓚€(gè)四級(jí)桿進(jìn)行串聯(lián)分離，串聯(lián)質(zhì)譜比質(zhì)譜的特異性得到了明顯的提高，對(duì)高效液相色譜比氣相色譜（GC）分離能力上的不足進(jìn)行了補(bǔ)充。

三、液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

1.在微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用

串聯(lián)質(zhì)譜可以實(shí)現(xiàn)細(xì)菌多種成分的分析，主要有多肽、DNA、脂寡糖、脂多糖、脂類、蛋白質(zhì)和其它可以被離子化的分子。細(xì)菌中的一部分成分可以分析出唯一的質(zhì)荷比，能夠作為生物標(biāo)識(shí)分子特異鑒定細(xì)菌。串聯(lián)質(zhì)譜可以使用中性丟失掃描、子離子掃描或者是母離子掃描等多種掃描方式對(duì)裂解細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)株間和種間特異保守峰進(jìn)行分析，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行識(shí)別。串聯(lián)質(zhì)譜也可以應(yīng)用在糖類細(xì)菌鑒定中，由于串聯(lián)質(zhì)譜的敏感性較高，可以檢測(cè)到20～50個(gè)孢子或者是10～100個(gè)細(xì)菌的存在。串聯(lián)質(zhì)譜可以在不同條件下對(duì)細(xì)菌的提取物進(jìn)行試驗(yàn)分析，說明串聯(lián)質(zhì)譜的時(shí)間和溫度穩(wěn)定性較好，可以進(jìn)行高通量的分析實(shí)驗(yàn)。

2.在激素水平測(cè)定中的應(yīng)用

在先天性腎上腺增生和激素水平檢測(cè)等疾病的診斷中也可以應(yīng)用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)。甾體類激素通常使用免疫分析和氣相質(zhì)譜方法進(jìn)行檢測(cè)，使用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)可以提高特異性，而且無需進(jìn)行復(fù)雜的樣品處理。合成代謝類激素雙氫睪酮、睪酮、雄烯二酮的定量分析也可以使用串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，和常規(guī)方法比較，使靈敏度得到了提高。同時(shí)，串聯(lián)質(zhì)譜在興奮劑和藥物濫用檢測(cè)方面和某些內(nèi)分泌疾病診斷方面也具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

3.對(duì)治療藥物的檢測(cè)應(yīng)用

對(duì)治療藥物進(jìn)行檢測(cè)是為了防止體內(nèi)藥物的濃度較低使體內(nèi)藥物濃度過量或者是治療失敗引起的毒性反應(yīng)。重癥病人所使用的藥物需要在用藥時(shí)監(jiān)測(cè)血藥濃度[2]。目前的藥物檢測(cè)主要是使用免疫化學(xué)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，該方法較為簡單，操作時(shí)較為容易，但是能夠進(jìn)行檢測(cè)的藥物種類較少，而串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)可以對(duì)所有藥物進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并且具有較高的準(zhǔn)確度。

4.對(duì)新生兒篩查的應(yīng)用

目前在新生兒遺傳病的篩查中主要應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，通常的篩查方法要對(duì)每一種需要篩查的項(xiàng)目進(jìn)行單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)，而液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)則可以同時(shí)對(duì)一份標(biāo)本進(jìn)行多項(xiàng)檢測(cè)，并且液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)具有較高的靈敏度，當(dāng)今主要用于中聯(lián)酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥（MCAD）、苯丙酮尿癥（PKU）等病癥，常規(guī)的篩查方法對(duì)有機(jī)酸代謝障礙、脂肪酸氧化缺陷、氨基酸稀有代謝障礙的查出率較低，使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)可以使篩查的效率得到提高，是當(dāng)今新生兒遺傳保健篩查的主要方法。同時(shí)，因?yàn)橐合嗌V-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的特異度和準(zhǔn)確度都有了較大的提升，可以提早的對(duì)患兒進(jìn)行特殊的膳食喂養(yǎng)，避免患兒出現(xiàn)猝死和治理損害的現(xiàn)象，使病死率和致殘率降低。

使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜能夠防止繁瑣樣品的衍生反應(yīng)，在分析的過程中，可以防止樣品的熱分解，對(duì)氣相色譜無法檢測(cè)的極性進(jìn)行分析，并且揮發(fā)性較低，主要應(yīng)用在負(fù)載而且具有高極性的樣品分析中，能夠獲得結(jié)構(gòu)、元素組成、分子量等信息，是一種較為理想的快速分析方法，可以使分析的時(shí)間縮短，對(duì)感興趣的組分進(jìn)行靶分析。所以，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)可以在醫(yī)藥的各領(lǐng)域中進(jìn)行應(yīng)用，能夠使更大的作用得到發(fā)揮。

參考文獻(xiàn)：

[1]郭智，張煊，宋冬梅，王蓮.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法在藥物代謝研究中應(yīng)用最新進(jìn)展[J]. 中國新藥雜志，2007，23：1981-1985+1989.

[2]蘇萌.液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜在強(qiáng)極性獸藥殘留分析中的應(yīng)用研究[D].河北科技大學(xué)，2012.