水霉菌蛋白制備方法的比較與分析

摘要：比較了3種方法對8種水霉菌（Saprolegnia）破壁處理制備蛋白的效果，并進行聚丙烯酰胺凝膠電泳分析。結果表明，加石英砂和液氮混合研磨處理制備的蛋白效果最好，條帶清晰，該方法操作簡便、快捷、較為常用，可有效地區(qū)分水霉菌株分子遺傳學背景的差異，適用于水霉菌分子流行病學研究。

關鍵詞：水霉菌（Saprolegnia）；聚丙烯凝膠電泳；處理方法

中圖分類號：S941 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）21-5342-03

Comparison and Analysis of Preparation Methods of Saprolegnia Protein

SONG Peng-peng，HU Kun，YANG Xian-le

（National Pathogen Collection Center for Aquatic Animals， Shanghai Ocean University， Shanghai 201306，China）

Abstract： The effect of three wall-breaking methods of 8 kinds of Saprolegnia preparation was compared and analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis. The results showed that the quartz sand and liquid nitrogen mixed grinding processing preparation of protein was best， the stripe was clear， the method was simple， quick， and relatively common， which could effectively distinguish between strains of molecular genetics background difference and was suitable for Saprolegnia molecular epidemiology research.

Key words： Saprolegnia； polyacrylamide gel electrophoresis； preparation method

目前，已發(fā)現的導致水生動物感染水霉病的真菌有水霉屬（Saprolegnia）、綿霉屬（Achlya）、細囊霉屬（Leptolegnia）、絲囊霉屬（Aphanomyces）、腐霉屬（Pythium）和異霉屬（Allomyces）的13 種真菌，其中以水霉、綿霉、細囊霉和絲囊霉最為常見，也最為容易導致水霉病的大面積蔓延和流行。傳統(tǒng)的真菌病原菌分類主要根據其感染部位、體外培養(yǎng)的形態(tài)、生理生化指標以及有性生殖過程的形態(tài)特征等。但這些鑒定方法主觀性強、程序繁瑣、重復性差、周期很長，且形態(tài)特征易受環(huán)境等因素的影響，加上穩(wěn)定性和分類能力上受到很多限制，因此往往很難能鑒定到種。隨著對卵菌綱生物的形態(tài)學、細胞學、生理學和分子生物學等方面的深入研究，推動了水霉菌分類鑒定的發(fā)展。在基礎分子生物學和臨床醫(yī)學的研究中，聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）技術被認為是應用最為廣泛的方法之一。聚丙烯酰胺凝膠電泳可用于蛋白質、核酸等生物大分子的分離、鑒定及其結構與功能的分析，該方法操作簡便、快捷、較為常用，可為不同水霉菌菌株的分類提供技術手段[1]。

研究表明外膜蛋白是真菌外膜中的蛋白成分，外膜蛋白結構相對穩(wěn)定，遺傳突變性小，且種間差異明顯，因此外膜蛋白常用于研究細菌性和真菌性病原菌株的流行病學特征。……