一例轉(zhuǎn)基因克隆水牛主要臟器組織結(jié)構(gòu)觀察

摘要：應(yīng)用石蠟切片及HE染色技術(shù)觀察轉(zhuǎn)基因克隆水牛牛犢的心臟、肝、腎、胰腺、睪丸等主要臟器組織結(jié)構(gòu)，并使用激光共聚焦顯微鏡對(duì)其心臟、肝、腎、睪丸冰凍組織切片進(jìn)行熒光觀察。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因克隆水牛心臟結(jié)構(gòu)異常，心肌纖維間隙過大，閏盤結(jié)構(gòu)不明顯，出現(xiàn)炎癥、出血等病理現(xiàn)象；肝、腎、胰腺、睪丸結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞形態(tài)、分布均正常。激光共聚焦顯微鏡下各冰凍組織切片中均可見較均勻綠色熒光，初步證實(shí)綠色熒光蛋白（Green fluorescent protein，GFP）基因成功整合到了水牛體內(nèi)。

關(guān)鍵詞：水牛；轉(zhuǎn)基因克隆；臟器；組織結(jié)構(gòu)

中圖分類號(hào)：S814.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）21-5251-02

Observation of Main Visceral Organ Structure in one Transgenic Cloned Buffalo

LU Jun-qiu，HU Wei-kun，ZHOU Yue，WANG Xiao-li

（College of Animal Science and Technology， Guangxi University， Nanning 530005， China）

Abstract： The main visceral organs such as heart，

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物克隆技術(shù)是20世紀(jì)中后期興起的一項(xiàng)技術(shù)。近年來，隨著轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究的發(fā)展和深入，該技術(shù)被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、免疫學(xué)、生物制藥及畜牧育種等領(lǐng)域[1，2]。

2010年初，廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院的科研人員將一只3月齡的水牛胎兒的成纖維細(xì)胞經(jīng)體外傳代培養(yǎng)后，把含標(biāo)記基因[綠色熒光蛋白（Green fluorescent protein，GFP）]和篩選基因的轉(zhuǎn)基因載體導(dǎo)入，構(gòu)建得到轉(zhuǎn)基因克隆重構(gòu)胚，并于2010年2月5日植入一頭2歲半的母牛子宮內(nèi)。同年12月19日順利產(chǎn)下一對(duì)雄性雙胞胎。其中一頭體重為20.5 kg，正常存活；另一頭體重為14 kg，夭折，無法憑外部觀察判斷死因。對(duì)夭折牛犢用紫外燈照射，可見頭部和四肢明顯表達(dá)綠色熒光蛋白基因[3]。

本試驗(yàn)試圖通過組織冰凍切片和熒光顯微觀察技術(shù)查證外源基因是否成功轉(zhuǎn)入水牛的內(nèi)部組織器官；并通過石蠟切片和HE染色技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因克隆水牛主要臟器組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察分析，為探查犢牛死亡原因提供理論依據(jù)，也為今后轉(zhuǎn)基因克隆水牛的研究提供必要的理論基礎(chǔ)。……