百合病毒的多重RT—PCR檢測技術

摘要：根據百合（Lilium brownii var. viridulum）常見的黃瓜花葉病毒（CMV）、百合斑駁病毒（LMoV）、無癥病毒（LSV）引物序列，設計2組特異引物，以18S rRNA為內參基因，采用多重RT-PCR，2組引物均能擴增得到LMoV和LSV預期大小一致的片段，未檢測到CMV，檢測結果不受病株取材部位的影響。該方法的建立為百合脫毒苗的規模化生產提供了高效檢測技術。

關鍵詞：百合（Lilium brownii var. viridulum）；病毒；多重RT-PCR

中圖分類號：S682.2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）20-5051-03

Studies on Multiplex RT-PCR Detection on Viruses of Lily

ZOU Ying-chun1，2，YANG Chao-zhu2，QIN Da-ji1，2，ZHAO Qing-hua2，XIANG Ji-qian1，2，YIN Hong-qing1，2，

YANG Yong-kang1，2，HUANG Jian-min1，2，PI Lei1，2

（1. Enshi Qingjiang Bio-Engineering Co.， Ltd.， Enshi 445000， Hubei， China； 2. West Comprehensive Experiment Station of Hubei Provincial Agriculture ST Innovation Center， Enshi 445000， Hubei， China）

Abstract： Based on the primers detecting lily （Lilium brownii var. viridulum） cucumber mosaic virus（CMV）， lily mottle virus（LMoV） and lily symptomless virus（LSV）， two groups of specific primers were designed. Using 18S ribosomal RNA as internal control gene， multiplex RT-PCR method were established to detect the 3 major viruses. LMoV and LSV were detected， but CMV was not detected. This detecting method will promote the large-scale production of the virus-free lily seedling.

Key words： lily（Lilium brownii var. viridulum）； virus； multiplex RT-PCR

百合（Lilium brownii var. viridulum）是百合科百合屬多年生草本球根植物，主要分布在亞洲東部、歐洲、北美洲等北半球溫帶地區。我國栽培的百合種球主要依賴進口，長期的無性繁殖導致優良品種種球帶毒嚴重，部分病毒感染率高達60%[1]。目前，國內外已報道侵染百合的病毒有20余種，其中黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、百合斑駁病毒（Lily mottle virus，LMoV）和百合無癥病毒（Lily symptomless virus，LSV）是目前危害最大的3種主要病毒，它們單獨和混合侵染可造成百合切花與鱗莖品質和產量的嚴重下降[1-5]。對這3種病毒的檢測成為種球質量評估的關鍵，也是后續的分球和組培生產脫毒苗關鍵技術[6-9]。

目前，常見的百合病毒檢測方法有電子顯微鏡法、血清學方法、分子雜交、反轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）、血清學和PCR相結合的方法以及基因芯片法等。其中，RT-PCR方法被證實是目前特異性最強、靈敏度最高的病毒檢測方法，現已廣泛應用于病原診斷和檢測。而后來發展起來的多重RT-PCR（multiplex RT-PCR）可以一次檢測多種病毒，特異性強，靈敏度高，成為百合等常年無性繁殖作物病毒的高效檢測方法。近年來湖北省恩施州百合產業發展較快，引進了不少國內外品種，但病毒的檢測仍依賴于異地檢測。……