滅多威對MDEC—07114細胞周期及Cyclin—D1的影響

摘要：為探討滅多威對家蠅胚胎細胞系MDEC-07114細胞周期及細胞周期蛋白Cyclin-D1的影響，用流式細胞儀檢測不同濃度滅多威對MDEC-07114細胞周期的影響，應用免疫組化S-P法（Streptavidin-perosidase）檢測細胞周期蛋白Cyclin-D1表達。結果表明滅多威作用于MDEC-07114后，各濃度組G0/G1期升高，S+G2/M期細胞占比及PI降低；從滅多威1 mg/mL處理組開始Cyclin-D1表達出現降低，且隨濃度的增加降幅增大?？梢姕缍嗤梢酝ㄟ^下調Cyclin-D1使細胞周期阻滯而抑制細胞生長。

關鍵詞：MDEC-07114細胞；滅多威；細胞周期；Cyclin-D1

中圖分類號：Q965.9 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）20-4949-02

Effects of Methomyl on Cell Cycle and Cyclin-D1 of MDEC-07114 Cell

LIU Liu，HE Li-fang，LIU Hui，HUANG Xue-gui，ZHANG Xi

（Department of Parasitology， Zunyi Medical College， Zunyi 563003， Guizhou， China）

Abstract： To investigate the effects of Methomyl on cell cycle and cyclin-D1 of MDEC-07114 Cell， experiments were conducted to measure the effects on cell cycle with flow cytometry and expression of cyclin-D with immunohistochemical S-P method. For the MDEC-07114 cell under Methomyl， the percentage of G0/G1 was increased while the percentage of S+G2/M and the cell proliferation index were obviously reduced at the all concentration-groups. From the 1mg/mL groups of Methomyl， the expression of cyclin-D1 was reduced with the increase of the concentration.Therefore， the growth of MDEC-07114 may be inhibited by reducing expression of cyclin-D1 to block cell cycle.

Key words： MDEC-07114 cell； Methomyl； cell cycle； Cyclin-D1

MDEC-07114是遵義醫學院寄生蟲學課題組自建的家蠅胚胎細胞系，滅多威為氨基甲酸酯類殺蟲劑，對昆蟲卵有殺傷作用，對家蠅也有毒殺作用，前期研究表明滅多威對體外培養的MDEC-07114細胞有抑殺作用[1]。家蠅抗藥性問題日趨嚴重，尋找新的殺蟲劑成為必然。昆蟲細胞凋亡的研究是探討昆蟲殺蟲劑作用機制、尋找昆蟲防治新途徑的探索和嘗試。細胞凋亡與細胞周期阻滯有關[2-4]。本試驗研究滅多威對MDEC-07114的細胞周期及細胞周期調控蛋白的影響，為新的昆蟲防治方法提供思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試細胞 家蠅胚胎細胞系MDEC-07114，由遵義醫學院寄生蟲學教研室提供。

1.1.2 滅多威溶液 滅多威[含量99.9%，批號BW（E）060546] 購自北京恒元啟天化工技術研究院，丙酮（分析純）購自成都化學試劑廠。先用無血M3培養基溶解丙酮，配制成1%丙酮溶液，抽濾，4 ℃保存。然后用1%丙酮溶液溶解滅多威，混勻抽濾配成20 mg/mL滅多威母液，4 ℃保存。使用時用1%丙酮溶液稀釋成不同濃度供試驗用。

1.1.3 碘化丙啶溶液 將碘化丙啶（美國Sigma公司生產）溶于PBS中，終濃度為100 mg/mL，含RNase 100 μg/mL，4 ℃避光保存?！?br>