NAA和6—BA對野生參薯愈傷組織誘導和不定芽分化、生根的影響

摘要：考察了NAA和6-BA對野生參薯（Dioscorea alata Linn.）愈傷組織誘導和不定芽分化、生根的影響。結果表明，愈傷組織誘導的最適培養基為MS + 1.0 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L NAA + 30 g/L蔗糖+ 6.0 g/L瓊脂；愈傷組織分化不定芽的最適培養基為MS + 0.5 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA + 30 g/L蔗糖+ 6.0 g/L瓊脂；不定芽生根的最適培養基為MS + 0.01 mg/L 6 -BA + 0.3 mg/L NAA + 30 g/L蔗糖+6.0 g/L 瓊脂。生根試管苗在室溫下煉苗7～10 d后，開瓶煉苗2～3 d， 移栽成活率在95%以上。

關鍵詞：野生參薯（Dioscorea alata Linn.）；愈傷組織；不定芽；生根；蘄春縣

中圖分類號：Q943.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）19-4809-03

參薯（Dioscorea alata Linn.）又名大薯，是薯蕷科薯蕷屬多年生藤質草本植物，其塊莖富含淀粉和粗蛋白，可作糧食和蔬菜食用，并可制取淀粉和供藥用[1，2]。醫圣李時珍故里湖北省蘄春縣具有悠久的山藥種植歷史，是鄂東名產“蘄山藥”的原產地[3]。在蘄春縣北部檀林鎮檀林村和青石鎮太平村、界嶺村等地的低山丘陵區，自然散生著大量的野生參薯，其葉片寬大、莖蔓粗壯、塊莖肥大、抗逆性強，具有一般栽培山藥所無法比擬的農藝性狀，潛在的育種價值較大[4，5]。本研究采用植物組織培養技術，考察了NAA和6-BA對野生參薯愈傷組織誘導和不定芽分化、生根的影響，實現野生參薯的植株再生，為下一步人工馴化野生參薯和利用野生參薯種質資源進行雜交育種提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

野生參薯采自蘄春縣檀林村，組織培養用生化試劑均購自上海稼豐園藝有限公司。

1.2 外植體的制備

12月上旬，挖取野生參薯塊莖置于室內通風處晾放1周后，放入干燥、陰涼地方貯藏至第二年春季，將塊莖取出盆栽，等蔓莖長成后，用剪刀選取長約1～2 cm的帶節莖段，先用自來水沖洗30 min，接著用75%的無水乙醇處理15 s，然后用2%的次氯酸鈉溶液處理10 min，再用無菌水洗滌4～5次后，最后置于無菌濾紙上吸干水分備用。

1.3 NAA和6-BA對野生參薯愈傷組織誘導的影響

以MS+30 g/L蔗糖+6.0 g/L瓊脂為基本培養基（pH 6.0），用NAA（0.1、0.2、0.3 mg/L）和6-BA（1.0、1.5、2.0 mg/L）進行配比試驗，篩選野生參薯愈傷組織誘導的最適培養基。溫度25 ℃、光照時間14 h/d、光照度3 000 lx（下同），每個處理接種10個外植體，重復3次，接種20 d后統計愈傷組織誘導率。愈傷組織誘導率=（分化出愈傷外植體個數/接種外植體個數）×100%

1.4 NAA和6-BA對野生參薯愈傷組織分化不定芽的影響

以MS+30 g/L蔗糖+6.0 g/L瓊脂為基本培養基（pH 6.0），以NAA（0.05、0.10、0.20 mg/L）和6-BA（0.1、0.5、1.0 mg/L）進行組合配比試驗，篩選愈傷組織分化不定芽的最適培養基。

1.5 NAA和6-BA對野生參薯不定芽生根的影響

以MS+30 g/L蔗糖+6.0 g/L瓊脂為基本培養基，以NAA（0.10、0.15、0.20、0.30、0.40 mg/L）和0.01 mg/L 6-BA進行組合配比試驗，篩選野生參薯的最適生根培養基。

2 結果與分析

2.1 不同濃度的NAA和6-BA對野生參薯愈傷組織誘導的影響

不同濃度的NAA和6-BA對野生參薯愈傷組織誘導的影響見表1。由表1可知，野生參薯帶節莖段接種4 d后，部分處理（處理5、處理7、處理8、處理9）外植體在剪切傷口處出現膨大現象；接種7 d后，處理1、處理9外植體在剪切口處也有不同程度的膨大。接種20 d后，除了處理1沒有愈傷組織出現，其他處理都有愈傷組織出現，但愈傷組織誘導率差異較大。處理8誘導率最高，達86.7%；其次是處理9，愈傷誘導率為83.3%；處理5也有較高的誘導率；其他處理的誘導率均較低。因此，培養基MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.0 g/L瓊脂為野生參薯愈傷組織誘導的最適培養基。

2.2 不同濃度的NAA和6-BA對愈傷組織分化不定芽的影響

不同濃度的NAA和6-BA對愈傷組織分化不定芽的影響見表2。由表2可以看出， 9個處理都有較高的不定芽分化率，其中處理5的不定芽分化率最高，達100.00%；其次是處理2，不定芽分化率為93.33%；處理3也有較高的分化率，達90.00%。從外植體分化不定芽數及不定芽長勢來看，單個外植體分化不定芽數較高的是處理5、處理4、處理2和處理3，其不定芽數分別為4.53、4.10、3.83和3.80，并且分化出的不定芽健壯、飽滿，長勢很好（圖1），將這些不定芽轉入生根培養基，全部都能成苗。因此，0.5 mg/L 6-BA與0.1 mg/L NAA最適于野生參薯愈傷組織分化不定芽。

2.3 不同濃度的NAA與6-BA對不定芽生根的影響

將不定芽接種在不同濃度的NAA和6-BA的生根培養基上，3～5 d在不定芽下端可見明顯的白色突起，10 d左右即可見伸長的須根，20 d后大部分處理的不定根已經很發達（圖2）。不同濃度的NAA與6-BA對不定芽生根的影響見表3。由表3可知，處理2生根率最高，達100.00%；處理3也有較高的生根率，達到93.33%，其他處理的生根率相對較低，僅為56.67%～73.33%。因此，0.01 mg/L 6-BA與0.3 mg/L NAA最適于野生參薯不定芽生根。

2.4 生根苗移栽

將野生參薯生根組培苗先在室內煉苗2～3 d，然后開瓶煉苗3～5 d，最后移栽至營養土中（園土∶蛭石=5∶5），幼苗成活率可達95%以上（圖3）。

3 小結

本試驗研究了采自鄂東大別山蘄春縣野生參薯的組織培養技術，優化了愈傷組織誘導、愈傷組織分化不定芽、不定芽生根培養及生根苗移栽等環節，成功實現了野生參薯的離體再生，為下一步人工馴化野生參薯和開發利用參薯野生種質資源奠定了基礎。

參考文獻：

[1] 宋德勛.藥用植物栽培學[M].貴陽：貴州科學技術出版社，2000. 151.

[2] 徐 良.中國名貴藥材規范化栽培與產業化開發新技術[M].北京：中國協和醫科大學出版社，2001.339.

[3] 康 薇，王本忠，周緒鵬.蘄山藥及其優質豐產栽培技術[J].黃石理工學院學報，2010，26（4）：30-31，55.

[4] 姜芳婷，李明靜，史會齊，等.山藥及其同屬植物參薯中多糖含量的測定[J].化學研究，2004，15（3）：47-49.

[5] 梁小娟，杜偉鋒，張 云，等.參薯研究進展[J].中華中醫藥學刊，2011，29（5）：1085-1087.