稻瘟菌激活蛋白基因的克隆及表達

摘要：以提取的稻瘟菌（Magnaporthe grisea）基因組DNA為模板，PCR擴增出激活蛋白目的基因DW，構(gòu)建融合表達載體pGEX-KG-DW并進行IPTG誘導(dǎo)表達。SDS-PAGE電泳分析結(jié)果表明，pGEX-KG-DW載體添加IPTG后能在BL21中表達，在68 ku處存在一條特異性帶。

關(guān)鍵詞：稻瘟菌（Magnaporthe grisea）；激活蛋白；克隆；表達

中圖分類號：Q786 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）19-4807-02

激活蛋白是從交鏈孢菌（Alternaria spp.）、紋枯病菌（Rhizoctonia solani）、黃曲霉菌（Aspergillus spp.）、葡萄孢菌（Botrytis spp.）、青霉菌（Penicillium spp.）、木霉菌（Trichoderma spp.）、鐮刀菌（Fusarium spp.）等多種真菌中篩選、分離、純化出的一種新型蛋白[1]。其蛋白分子質(zhì)量為42 ku，等電點為4.8[2]，能誘導(dǎo)多種植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，促進植物生長，改善作物品質(zhì)，可作為一種新型的廣譜、高效、多功能的生物農(nóng)藥[3]。稻瘟病是由稻瘟菌（Magnaporthe grisea）引起的真菌病害[4]。從稻瘟菌中提取出的激活蛋白稱稻瘟菌激活蛋白[5]，該蛋白能明顯促進植物的發(fā)芽、生長、抗逆[6]。研究表明，經(jīng)過激活蛋白處理后，水稻幼苗可增加對稻瘟菌的抗性[7]。植物激活蛋白也能干擾煙草花葉病毒外殼蛋白的體外聚合過程[8]。大田試驗證明激活蛋白處理后植物抗病率高達70%以上[9]。激活蛋白具有無公害、無殘留、無污染等特征，既可作為植物生長調(diào)節(jié)劑，又可作為生物農(nóng)藥用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)[10]。本研究通過構(gòu)建稻瘟菌激活蛋白表達載體，并在大腸桿菌中實現(xiàn)該基因的高效表達，以期為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)該蛋白提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 材料

稻瘟菌北1-24，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所提供；化學(xué)誘導(dǎo)型表達載體pGEX-KG，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所分子生物學(xué)實驗室保存；pMD18-T載體，購于天根生化科技（北京）有限公司。……