HPLC法同時測定復方龍脷膠囊中大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量

摘要：建立復方龍脷膠囊中3種蒽醌類成分（大黃素、大黃酚和大黃素甲醚）的測定方法。

關鍵詞：復方龍脷膠囊；HPLC；大黃素；大黃酚；大黃素甲醚

中圖分類號：O657.7+2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）19-4789-03

龍脷葉[1]是廣西特有的壯族藥用資源，在壯醫臨床上用于治療肺熱咳嗽、吐血、風火牙痛、風濕骨痛等癥，廣西龍脷葉資源豐富，極具開發潛力。壯藥復方龍脷膠囊組方來源于壯藥經驗方，其由壯藥龍脷葉（壯藥名為蒙凜壟）、大黃等藥味組成，具有清熱潤肺、疏肝除煩、養陰通便的功效，經多年臨床使用，對精神病障礙引起的陰虛火旺、煩躁、便秘等癥狀有很好的療效。復方龍脷膠囊中的大黃有清熱涼血之功效，能迅速瀉火通便排毒，又助君藥滋陰養血，血盈津豐，火不自生。大黃瀉下的有效成分為游離型蒽醌。為有效控制復方龍脷膠囊的質量，本研究參考相關文獻[2-9]并在此基礎上建立了復方龍脷膠囊中大黃素、大黃酚和大黃素甲醚3種成分的含量測定方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀（1260 Series，美國Agilent公司），配備四元泵，在線脫氣機，自動進樣器，柱溫箱；超聲波清洗器（KQ3200B 型，昆山超聲儀器有限公司）；臺式高速離心機（LG16-WA，北京京立離心機有限公司）；超純水系統（Millipore公司）；電子分析天平（CP224S，德國Sartorius公司）。

1.2 試劑

大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110756-200110），大黃酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110796-200615），大黃素甲醚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110758-201013）。復方龍脷膠囊（批號：120601-120606 ）由廣西鴻博藥業有限公司提供。乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 色譜條件

Waters Symmetry C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫25 ℃；流動相為甲醇-水（95∶5，V/V），流速1.0 mL/min；檢測波長254 nm，進樣量10 μL。此色譜條件下，大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰與其他組分分離良好。

1.4 溶液配制

1.4.1 對照品溶液 分別稱取大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品適量，加甲醇制成每毫升含大黃素0.108 0 mg，大黃酚0.110 0 mg和大黃素甲醚0.063 4 mg的溶液，即得大黃素、大黃酚和大黃素甲醚儲備液。

1.4.2 供試品溶液 稱取復方龍脷膠囊內容物（批號120602）約0.7 g，置具塞三角瓶中，加入甲醇25 mL，超聲處理20 min，放冷，補足減失重量。濾過后取濾液離心10 min，靜置，用0.45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

1.4.3 陰性樣品溶液 按處方比例及工藝配制不含大黃的復方龍脷膠囊，按供試品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液。

2 結果與分析

2.1 系統適應性試驗結果

分別吸取大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品溶液和供試品溶液及陰性樣品溶液各10 μL注入高效液相色譜儀，結果顯示，大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的保留時間分別為5、7和9 min左右，陰性對照樣品對測定無干擾，色譜圖見圖1，大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰與鄰近峰達到基線分離，分離度良好。

2.2 方法學考察

2.2.2 精密度試驗結果 精確吸取大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品溶液，重復進樣6次，測得峰面積的RSD分別為0.09%、0.07%和0.06%，表明精密度良好。

2.2.3 穩定性試驗結果 吸取供試品溶液按上述條件分別于 0、2、4、6、8、12 h進樣測定，測得大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD為0.96%、0.88%和0.23%。結果表明，樣品溶液在12 h內穩定。

2.2.4 重復性試驗結果 取同一批號的龍脷膠囊樣品（批號120602）6 份，分別制備供試品溶液，并依照上述方法進行測定，計算得大黃素、大黃酚和大黃素甲醚平均含量為 0.34 mg/粒、1.02 mg/粒和0.23 mg/粒，RSD分別為1.4%、1.2%和1.2%，說明該方法重復性較好。

2.2.5 加樣回收率試驗結果 取已知含量的樣品（批號120602）6份，取約 0.35 g，分別加入一定量的上述大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品溶液。結果表明，大黃素平均加樣回收率為100.30%，RSD為1.96%；大黃酚平均加樣回收率為100.51%，RSD為1.15%大黃素甲醚平均加樣回收率為101.26%，RSD為1.62%，說明本方法準確度較好。結果見表1、表2、表3。

2.2.6 樣品含量測定 取6個批號樣品，按上述方法分別進行測定，結果見表4。

3 小結與討論

參考文獻：

[1] 廣西壯族自治區壯藥質量標準（第一卷）[M].南寧：廣西科學技術出版社，2008.

[2] 張玉臣，劉學東，王永平，等.HPLC測定大黃通便顆粒中大黃素和大黃酚的含量[J]. 中成藥，2005，27（4）：478-479.

[3] 高 建，趙 萍，夏 泉，等.HPLC法同時測定八號膏中大黃素和大黃酚[J].中成藥，2012，34（8）：1610-1612.

[4] 黎 陽，劉素香，張鐵軍，等. HPLC法測定麻仁軟膠囊中7種成分[J].中草藥，2011，42（5）：890.

[5] 羅建明，黃清松，李 桃.HPLC法同時測定虎杖根中4種蒽醌類成分的含量[J].中藥材，2012，35（5）：736-738.

[6] 楊月娥，胡文帥，龐 婕，等.道地產區大黃中5種蒽醌類化合物含量測定[J].安徽農業科學，2011，39（11）：6378-6379，6429.

[7] 朱玲英，任愛農，葛 進，等.大黃藥材蒽醌苷元類成分的HPLC指紋圖譜研究[J].中成藥，2003，25（6）：438-440.

[8] 岳淑梅，馮玲玲，齊瀟瀟，等.肝寧顆粒中大黃所含5種蒽醌苷元的HPLC測定[J].中成藥，2008，30（8）：1155-1158.

[9] 魏鳳玲，單光璇，朱立平，等.大黃中總大黃素成分含量測定條件優選[J].中國實驗方劑學雜志，2002，8（1）：14-15.

[10] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M]. 北京：中國醫藥科技出版社，2010.