反應溫度和時間對分光光度法測定乳粉中左旋肉堿的影響

摘 要：采用分光光度法測定乳粉中左旋肉堿的含量，從溫度和時間對反應的影響進行分析研究，

關鍵詞：分光光度法；左旋肉堿；反應溫度；反應時間

中圖分類號：TS252.51 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2013）11-0120-03

1 材料與方法

1.1 試驗材料、儀器與試劑

1.1.1 試驗材料 兩種乳粉，標記為樣品1和樣品2。

1.1.2 儀器

1.2 試驗原理

試樣經過水提取，用高氯酸沉淀蛋白質后過濾，濾液經堿皂化后使其中結合態的左旋肉堿游離出來；左旋肉堿與乙酰輔酶A在乙酰肉堿轉移酶的催化下反應生成乙酰肉堿和游離的輔酶A；

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品處理

1.3.2 標準溶液配置 2 結果與分析

2.1 加入顯色劑和乙酰輔酶A后反應溫度和時間的確定

吸光度隨時間的變化

2.2 加入乙酰肉堿轉移酶后反應溫度和時間的確定

2.3 標準曲線制作及樣品測定將分光光度計的波長調為412 nm。準確吸取2 ml不同濃度左旋肉堿標準溶液或樣品處理液至具塞比色皿中，加入0.8 ml顯色劑和100 μl乙酰輔酶A溶液，混合均勻后放入分光光度計中并計時， 6 min后歸零；迅速加入100 μl乙酰肉堿轉移酶溶液，混合均勻后放入分光光度計中，反應6 min后記錄吸光度（表1）。以左旋肉堿標準溶液的濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，制作標準曲線。得到標準曲線回歸方程相關系數R=1，由此計算出樣品1乳粉中左旋肉堿的含量為25.8 mg/100g，樣品2為24.2 mg/100g。

表1 左旋肉堿標準溶液及樣液的吸光度

3 小結

在加入顯色劑和乙酰輔酶A后，試劑會產生一個本底值吸光度，所以在測量中要扣除該吸光度。溫度對反應的影響比較顯著，在比較高的溫度（29℃）下反應時間縮短，但不宜控制，故選用室溫24℃并保持實驗過程中溫度恒定，在此條件下，加入顯色劑和乙酰輔酶A 6 min后歸零，再加入乙酰肉堿轉移酶反應6 min。如果環境溫度較低，可以適當延長歸零時間和反應時間至10 min。

參 考 文 獻：

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