反應(yīng)溫度和時(shí)間對分光光度法測定乳粉中左旋肉堿的影響

摘 要：采用分光光度法測定乳粉中左旋肉堿的含量，從溫度和時(shí)間對反應(yīng)的影響進(jìn)行分析研究，

關(guān)鍵詞：分光光度法；左旋肉堿；反應(yīng)溫度；反應(yīng)時(shí)間

中圖分類號：TS252.51 文獻(xiàn)標(biāo)識號：A 文章編號：1001-4942（2013）11-0120-03

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料、儀器與試劑

1.1.1 試驗(yàn)材料 兩種乳粉，標(biāo)記為樣品1和樣品2。

1.1.2 儀器

1.2 試驗(yàn)原理

試樣經(jīng)過水提取，用高氯酸沉淀蛋白質(zhì)后過濾，濾液經(jīng)堿皂化后使其中結(jié)合態(tài)的左旋肉堿游離出來；左旋肉堿與乙酰輔酶A在乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶的催化下反應(yīng)生成乙酰肉堿和游離的輔酶A；

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品處理

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置 2 結(jié)果與分析

2.1 加入顯色劑和乙酰輔酶A后反應(yīng)溫度和時(shí)間的確定

吸光度隨時(shí)間的變化

2.2 加入乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶后反應(yīng)溫度和時(shí)間的確定

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及樣品測定將分光光度計(jì)的波長調(diào)為412 nm。準(zhǔn)確吸取2 ml不同濃度左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品處理液至具塞比色皿中，加入0.8 ml顯色劑和100 μl乙酰輔酶A溶液，混合均勻后放入分光光度計(jì)中并計(jì)時(shí)， 6 min后歸零；迅速加入100 μl乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶溶液，混合均勻后放入分光光度計(jì)中，反應(yīng)6 min后記錄吸光度（表1）。以左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程相關(guān)系數(shù)R=1，由此計(jì)算出樣品1乳粉中左旋肉堿的含量為25.8 mg/100g，樣品2為24.2 mg/100g。

表1 左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣液的吸光度

3 小結(jié)

在加入顯色劑和乙酰輔酶A后，試劑會產(chǎn)生一個(gè)本底值吸光度，所以在測量中要扣除該吸光度。溫度對反應(yīng)的影響比較顯著，在比較高的溫度（29℃）下反應(yīng)時(shí)間縮短，但不宜控制，故選用室溫24℃并保持實(shí)驗(yàn)過程中溫度恒定，在此條件下，加入顯色劑和乙酰輔酶A 6 min后歸零，再加入乙酰肉堿轉(zhuǎn)移酶反應(yīng)6 min。……