大蒜拮抗性內生細菌的篩選

摘 要：本實驗以市面銷售大蒜作為實驗材料，通過表面消毒，利用粉碎機粉碎方法得到植物組織原液的方法，由平板涂布法分離得到藥用植物組織內的內生細菌或者直接在無菌環境中取大蒜組織塊在PDA培養基或NA培養基直接進行培養，通過不斷地分離純化提取得到的較純植物內生細菌作為目標菌，以大腸桿菌（Escherichia coli），耐甲氧西林金色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aurous，MRSA），金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aurous）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtitles）作為指示菌進行內生菌抑菌試驗，由內生細菌對不同病原菌的抑菌圈大小的比較篩選出抑菌最強的內生細菌。研究結果表明：大蒜中有大量的內生細菌，分離得到16株內生細菌，16株菌對4種以上病原菌均有不同程度的抑制作用。其中DS1、DS2和BS2對四種病原菌的拮抗能力均較強，BS2對四種靶標菌的相對抑菌率在200%以上。

關鍵詞：大蒜 內生細菌 拮抗作用 篩選

中圖分類號：S633.4 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2013）05（b）-0217-02

大蒜（Alliums ativum L.）屬于百合科（Liliaceace）蔥屬類的植物，據研究大蒜的鱗莖含有豐富的生物活性成分以及營養物質，同時也具有良好的抗癌防癌作用，不但對癌細胞有直接殺傷作用，而且能抑制致癌物質（如亞硝胺）在人體內的合成，并能防治腦血管病、糖尿病等常見病狀[1]，經常使用大蒜也能增加能量轉換和促進血液循環，提高我們肌體免疫力，恢復和重建愛滋病患者的免疫系統功能等[2]。此外，大蒜里的某些成份，有類似維生素E與維生素C的抗氧化、防衰老特性，自古被稱為天然殺菌劑，有“天然抗生素”之稱[3]。大蒜除了有以上作用外，其生物體內所含的硫化合物也具有較強的抗菌消炎作用，對多種細菌、真菌都有殺死和抑制的作用[4]。當前，關于藥用植物大蒜內生細菌的研究報道少見。面對著各種各樣新的疾病對人們健康的威脅，抗生素的廣泛運用使致病菌的賴藥性變得越來越強，迫使人們不得不尋找新的治病材料和途徑。與此同時人們的生活水平的提高，對健康越來越注重，提倡綠色無公害食品，需要采用一種新的方法取代化學防腐劑。因此，當前人們正致力于從動植物及微生物的代謝產物中尋找抗菌物質以取代化學防腐劑，利用藥用植物內生細菌進行工業化發酵生產某些重要天然藥物。植物內生細菌一直以來備受關注，因為其具有的作為新型藥物篩選資源的巨大潛力[5]。不僅如此，植物內生細菌的發展也能有效地緩解一些天然藥用植物的資源缺失，甚至對生態平衡破壞，物種滅絕也將起到有效緩解作用，同時也為植物資源的合理有效利用提供了理論基礎[6]。本實驗對藥用植物大蒜內生細菌進行分離純化以及拮抗菌篩選試驗，進一步明確藥用植物大蒜內生細菌及其抗菌作用，為大蒜內生菌的進一步發展及開發利用以及探尋有效拮抗微生物資源提供基礎保障。

1 材料與方法

1.1 實驗植物

市售紫皮獨蒜（Alliums ativum L.（Garlic））、白皮鮮蒜（Alliums ativum L.（Garlic））。

1.2 靶標菌

大腸桿菌（Escherichia coli）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtitles）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aurous）、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（Methicillin resistant Staphylococcus aurous，MRSA），均由由本校病理實驗室提供。

1.3 培養基

大蒜組織的表面消毒及組織液制備：稱取10 g供試大蒜組織樣品，放于滅菌的培養皿或者三角瓶中，無菌水洗3至5遍，再用百分之五的次氯酸鈉消毒3次，2 min每次，后用無菌水再洗3至5遍，用打漿機打碎，最后將粉碎的供試植物組織液置于無菌三角瓶中196480cbb39e53a959546c17453d654d備用[9]。

大蒜內生細菌的分離純化：在無菌操作臺上分別用無菌移液槍將得到的大蒜組織液取100 ul種到無菌PDA平板培養基上，取最后一次洗滌液作為對照，每種處理重復三次。37 ℃培養18～24 h。待培養基上長出菌落時，根據菌落的顏色和形態，將不同種類的內生細菌劃線接種至PDA無菌平板培養基上培養，得到無純培養后接種到斜面保存備用[10～11]。

1.5 大蒜內生細菌的拮抗性篩選

2 結果與分析

2.1 大蒜內生細菌的分離

2.2 拮抗菌株的篩選結果分析

3 結論與討論

（1）通過對大蒜內生細菌的分離純化及其對一些常見病原菌的拮抗性作用，表明在大蒜內生細菌中廣泛存在具有較高抗菌活性的菌株。拮抗實驗表明大蒜鱗莖內生菌主要為細菌，故內生細菌為其優勢內生菌，所分離的16株內生細菌對病原菌均有廣譜抗菌作用。

（2）本實驗表明大蒜內生細菌在常溫下對常見的病原菌有拮抗作用，但其經過熱處理后其抗菌活性是否穩定還有待進一步研究。

（3）從藥用植物大蒜中篩選出的內生細菌DS1，DS2和BS2對病原菌的拮抗性明顯，因此，具有廣闊的開發前景，具有潛在的應用價值。

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