水質檢測中大腸菌群的研究

摘 要：介紹了大腸菌群概念和水質檢測中相關檢測項目和檢測方法，并比較了用多管發酵法和固定底物酶底物法檢測水源水中的耐熱大腸菌群，結果表明兩種方法無差異。固定底物酶底物法可以作為準確的檢測方法推廣。

關鍵詞：大腸菌群 水質檢測 多管發酵法 酶底物法

中圖分類號：X832 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2013）07（c）-0129-01

由于我國飲用水的水源水大部分都取自城市生活污水直接排放的江河湖泊，所以近年來我國的水質標準對于微生物特別是對于大腸菌群的標準要求越來越嚴格。GB5749-2006《生活飲用水衛生標準》中大腸菌群增加了大腸埃希氏菌﹑耐熱大腸菌群，修訂了總大腸菌群。

1 水質檢測中大腸菌群的相關檢測項目

總大腸菌群，37 ℃培養24 h內能夠發酵乳糖產酸產氣及乙醛。主要包括埃希氏菌屬（Escherichia）、檸檬酸桿菌屬、克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。此名稱并非細菌學分類，而是衛生領域用語，是指具有某些特性的一組與糞便相關的細菌[1]。耐熱大腸菌群，44.5 ℃具有與大腸菌群相同發酵及生物化學性能的菌群，包括埃希氏菌和耐熱克雷伯菌屬。此名稱也是衛生領域用語。大腸埃希氏菌，好氧革蘭氏陰性短桿菌，無芽孢，大小約0.5～0.8×2.0～3.0 μm，能分解乳糖產酸產氣，直接指示糞便污染。

2 水質檢測中大腸菌群的相關檢測方法

大腸菌群的標準檢驗方法有多管發酵法，濾膜法，固定底物酶底物法。有文獻報道[2]還可以采用PCR技術、免疫學等方法，但這些方法雖靈敏度高，但檢測成本較高很難廣泛應用。濾膜法是過濾水樣將細菌截留在0.45 μm的過濾膜膜上然后在選擇性培養基中培養24 h，計數膜上生長出的典型細菌菌落。但此方法適用于較大體積水樣，結果易受其它細菌的影響。所以一般情況下我們主要采用多管發酵法和固定底物酶底物法。

2.1 多管發酵法和固定底物酶底物法的比較

我們以耐熱大腸菌群檢測為例。

2.2.1 原理

多管發酵法采用耐熱大腸菌群能使乳糖發酵，在44.5 ℃條件下培養24 h生長產酸產氣的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。固定底物技術酶底物法（Defined Substrate Technology）采用耐熱大腸菌群細菌能產生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培養液呈黃色，來判斷水樣中是否含有耐熱大腸菌群[1]。

2.2.2 材料與設備

試劑：MMO-MUG（Minimum Media ONPG-MUG）培養基—Colilert試劑；多管發酵法的試劑按照《生活飲用水衛生標準 生活用水標準檢驗方法》（GB5750-2006）中規定的配制。設備：定量程控封口機。

2.2.3 試驗方法

多管發酵法檢測耐熱大腸菌群方法參見《生活飲用水衛生標準 生活用水標準檢驗方法》（GB5750-2006）。酶底物法用無菌稀釋瓶分別量取100 ml水樣及陽性對照物，加入Colilert試劑，混搖均勻使之完全溶解并倒入97孔定量盤內，用定量封口機封口，放入44.5±0.2 ℃培養箱中培養24 h。24 h后進行結果判讀，如結果為可疑陽性，可延長培養時間到28 h進行結果判讀，超過28 h之后出現的顏色不作為陽性結果。如果孔穴內水樣變成黃色或比陽性對照物深則表示該孔穴中含有耐熱大腸菌群。如無黃色或顏色淺則表示不含有耐熱大腸菌群。計算黃色反應的孔穴數，對照MPN表查出耐熱大腸菌群的最大可能數，結果以MPN/100 ml表示。如果所有孔未產生黃色，則可報告耐熱大腸菌群未檢出。數據統計方法使用Excel軟件及SPSS統計。

2.2.4 試驗結果

在本項試驗中采用35份水源水進行耐熱大腸菌群的檢測結果如圖1所示。

3 討論

對于兩種方法檢測耐熱大腸菌群結果進行配對t檢驗，t=1.882，P=0.068，表明兩種結果具有顯著相關性，在統計學上沒有差異。通過分析上述的試驗結果，筆者認為多管發酵法操作時間需48～72 h，步驟繁瑣，且需要進一步進行驗證試驗，不能對衛生狀況快速評價，但成本低，適用于大多數實驗室。而酶底物法操作時間為24 h，靈敏度高，過程簡便，可用于快速檢測，值得推廣。

參考文獻

[1]丁程成.歐美水質大腸菌群相關檢驗標準探究[J].環境科技，2010（1）：67-69.

[2]ISO17994：Water quality-Criteria for establishing equivalence between microbilogical methods[J].First edition，2004.