血沉、HLA-B27基因、C反應(yīng)蛋白測(cè)定對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎的診斷價(jià)值

韋蓉梅 董麗平 吳紅慧 徐燕群

廣東省廣州市正骨醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510045

強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是以骶髂、外周關(guān)節(jié)和肌腱附著點(diǎn)出現(xiàn)慢性炎癥為特征的一種進(jìn)行性疾病，其發(fā)病隱匿，一旦發(fā)病，病情逆轉(zhuǎn)較難，早期的診斷可為治療及預(yù)后爭(zhēng)取時(shí)間。 許多文獻(xiàn)表明，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等參與了人體的炎性反應(yīng)，對(duì)關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展意義重要。還有研究認(rèn)為血沉（ESR）、C 反應(yīng)蛋白（ C-reactive protein， CRP）比血清VEGF 能更準(zhǔn)確反映疾病活動(dòng)性[1-5]，另外，AS 的發(fā)病與HLA-B27 密切相關(guān)[6]。因此本研究通過(guò)測(cè)定對(duì)照組與早期AS 患者血清中ESR、HLA-B27、CRP 水平的變化，并通過(guò)受試者工作曲線（ROC 曲線）的分析，探討參與AS 的臨床及其對(duì)AS 的診斷意義。 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010 年2 月～2012 年2 月來(lái)廣東省廣州市正骨醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）門(mén)診和病房接受治療的AS 患者60 例（AS 組），均符合AS 的分類標(biāo)準(zhǔn)[7]，其中男31 例，女29 例，年齡19～63 歲，平均（38.2±4.7）歲，病程2～7 年。 另選擇同期來(lái)我院進(jìn)行健康體檢者30 例（對(duì)照組），其中男18 例，女12 例，年齡18～60 歲，平均（36.2±7.2）歲。 兩組在性別、 年齡等基本資料上比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P >0.05），具有可比性。

1.2 測(cè)定方法

采集兩組對(duì)象靜脈血各2 mL， 分別置于空白真空管和血常規(guī)抗凝管中。 備用。

1.2.1 ESR 測(cè)定 3000 r/min 離心10 min，吸去血清，取上清液。 應(yīng)用Westergren 法檢測(cè)（正常范圍男0～15 mm/1 h，女0～20 mm/1 h）。

1.2.2 CRP 檢測(cè) 3000 r/min 離心10 min，吸去血清，取上清液。 采用免疫濁度分析法檢測(cè)（正常范圍≤10 mg/L）。 ESR和CRP 測(cè)定試劑均由美國(guó)貝克曼公司提供，儀器為Beckman-Coulter Immage。

1.2.3 HLA-B27 檢測(cè) 6 h 內(nèi)行熒光抗體染色。 抗凝全血（25 μL）與熒光抗體（15 μL）徹底混合后放置暗處孵育30 min，室溫，然后加入溶血素（1∶10 稀釋）2 mL 迅速混勻，再置暗處孵育10 min， 室溫，2000 r/min 離心5 min， 吸去上清，加入pH 7.2 磷酸鹽緩沖液（PBS）2 mL 洗滌。 HLA-B27直標(biāo)單克隆抗體以及溶血素均由美國(guó)Becton-Dickinson（BD）公司提供，儀器為FCSCalibur 流式細(xì)胞儀（BD）公司。

1.3 病情活動(dòng)評(píng)價(jià)

采用Cowling 法[8]，共分3 個(gè)水平，活動(dòng)、可疑活動(dòng)、靜止。 活動(dòng)：前4 周內(nèi)腰痛或晨僵加重，需增加非甾體抗炎藥（ NSAIDs）用量；或足跟痛、足底腿炎并骶髂關(guān)節(jié)壓痛；可疑活動(dòng)：持續(xù)、穩(wěn)定疼痛或晨僵，需堅(jiān)持NSAIDs 治療；靜止：極少癥狀或無(wú)癥狀，需少量服藥或不用藥。

表1 兩組患者基本資料比較

1.4 納入標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)照組： 無(wú)異常臨床表現(xiàn)和影像學(xué)表現(xiàn)。 AS 組：X 線片提示雙側(cè)Ⅱ～Ⅲ級(jí)或單側(cè)Ⅲ～Ⅳ級(jí)骶髂關(guān)節(jié)炎，并伴以下任一項(xiàng)臨床表現(xiàn)：①腰背痛、晨僵超過(guò)3 個(gè)月，但休息無(wú)緩解；②在前后和側(cè)屈方向上腰椎活動(dòng)受限；③胸廓活動(dòng)度小于同年齡、同性別的健康人。

1.5 排除標(biāo)準(zhǔn)

①X 線平片及CT 示骶髂關(guān)節(jié)Ⅱ級(jí)或以下者； ②其他風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病及甲狀旁腺功能亢進(jìn)、 骶髂關(guān)節(jié)結(jié)核、腫瘤等。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析， 計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，采用t 檢驗(yàn)。 計(jì)數(shù)資料以率表示，獨(dú)立配對(duì)的二分類資料比較采用χ2檢驗(yàn)，有序的多分類資料用秩和檢驗(yàn)。 相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析，多因素分析采用Logistic 相關(guān)分析。 以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者基本資料比較

經(jīng)統(tǒng)計(jì)， 兩組在性別、 年齡方面比較無(wú)明顯差異，AS組疾病活動(dòng)情況、ESR、CRP 水平、HLA-B27 陽(yáng)性率及X線片改變比率均高于對(duì)照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。提示，ESR、CRP 水平、HLA-B27 及X 線片改變可能影響AS 的發(fā)生。 具體見(jiàn)表1。

2.2 AS 與各相關(guān)指標(biāo)的單因素分析

單因素分析表明，ESR、CRP 水平、HLA-B27 是影響AS 的發(fā)生重要危險(xiǎn)因素，三者均參與AS 的發(fā)生（P ＜0.05）。具體見(jiàn)表2。

表2 AS 與各相關(guān)指標(biāo)的單因素分析

2.3 AS 與各相關(guān)指標(biāo)的多因素Logistic 相關(guān)分析及ROC曲線驗(yàn)證

結(jié)果顯示，ESR、CRP 水平與AS 的發(fā)生密切相關(guān)，盡管HLA-B27 具有高度的敏感性和特異性， 但檢測(cè)陽(yáng)性并不能作為AS 的確診指標(biāo)， 也不能作其篩選指標(biāo)。 提示，ESR、CRP 水平可用來(lái)診斷AS，HLA-B27 只能增加診斷的可能性，不能用來(lái)確診或判斷預(yù)后。 具體見(jiàn)表3、4。

表3 各相關(guān)指標(biāo)多因素Logistic 分析

表4 各相關(guān)指標(biāo)ROC 曲線

3 討論

AS 好發(fā)于中青年（20～30 歲），屬遺傳性免疫系統(tǒng)疾病的一種，AS 早期病理改變?yōu)轺诀年P(guān)節(jié)炎，其炎變部位主要是軟骨下關(guān)節(jié)囊、纖維軟骨、纖維環(huán)等，其中骶髂關(guān)節(jié)炎與關(guān)節(jié)旁骨髓炎為可作為其診斷的早期的主要特點(diǎn)[9-11]，并結(jié)合根據(jù)其病理變化與X 線表現(xiàn)， 但漏診及誤診比例較大。由于AS 治愈率較低，給患者帶來(lái)極大痛苦。 因此，有效可靠的診斷對(duì)于患者的預(yù)后至關(guān)重要。 本研究通過(guò)測(cè)定患者及健康人血清中ESR、HLA-B27、CRP 水平的變化，探討其對(duì)AS 的診斷價(jià)值，結(jié)果表明，ESR、CRP 水平與AS 的發(fā)生密切相關(guān)。

急性炎癥時(shí)，血中急性反應(yīng)時(shí)相物質(zhì)增多明顯，導(dǎo)致ESR 上升加快。 ESR 對(duì)于疾病的診斷特異性雖然不高，但ESR 增快可間接反映炎癥或組織損傷的存在，且其升高程度與組織損傷程度呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)，是檢測(cè)疾病活動(dòng)性的參考指標(biāo)[12-13]。 本研究也結(jié)果顯示，ESR 在AS 組較對(duì)照組增大（P ＜0.01），且與AS 多因素分析相關(guān)性明顯（P =0.008）。CRP 是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的存在于急性期的反應(yīng)蛋白，是炎癥組織損傷的標(biāo)志物。 CRP 的生理應(yīng)激作用較為明顯，可結(jié)合補(bǔ)體C1q，參與經(jīng)典途徑過(guò)程來(lái)激活補(bǔ)體，清除免疫復(fù)合物的。 通過(guò)結(jié)合Fcγ 受體介導(dǎo)吞噬細(xì)胞清除免疫復(fù)合物及凋亡的細(xì)胞碎片，刺激單核細(xì)胞表面的細(xì)胞因子及其他免疫調(diào)節(jié)，當(dāng)有炎癥存在時(shí)，CRP 升高顯著[14-15]。 本結(jié)果也顯示，AS 組CRP 水平高于對(duì)照組（P ＜0.01），動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)CRP 臨床價(jià)值較大。但CRP 在AS 反應(yīng)中的作用機(jī)制及在病理生理過(guò)程中的作用有待進(jìn)一步探究。 另外，本研究顯示，盡管HLA-B27 具有高度的敏感性和特異性，但檢測(cè)其陽(yáng)性并不能作為AS 的確診指標(biāo)， 也不能作其篩選指標(biāo)。 在AS 實(shí)驗(yàn)診斷方面，HLA-B27 抗原尚不能作為早期診斷AS 的指標(biāo)，也不能預(yù)見(jiàn)患者的預(yù)后，只能增加診斷的可能性，更不能替代骶髂關(guān)節(jié)炎的存在與否來(lái)診斷AS。

綜上所述，檢測(cè)血清ESR、CRP 水平水平，對(duì)判斷AS病情活動(dòng)性及預(yù)后均有一定的參考價(jià)值，通過(guò)降低強(qiáng)直性脊柱炎的炎性反應(yīng)，可能有助于改善AS 患者病情，從而改善其臨床表現(xiàn)。

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