FoxM1在前列腺癌中的表達及其臨床意義

王 建

前列腺癌(prostate cancer,PCa)多發于歐美國家，居男性癌癥死因的第二位[1]。在我國，隨著人均壽命的延長、膳食結構的改變及診斷技術的進步，PCa發病率在逐年提高，已躍居為男性泌尿生殖系統惡性腫瘤的第三位[2]。前列腺癌患者早期無明顯癥狀，死亡的主要原因是癌細胞的浸潤與轉移。探尋新的有價值的前列腺癌特異分子對于PCa診斷、治療及預后都有重要意義。大量研究表明，1個Fox基因家族的成員FoxM1,在細胞增殖、凋亡、DNA損傷和腫瘤形成等許多生理過程中均發揮作用[3]。利用芯片技術檢測前列腺癌組織的基因表達譜顯示，FoxM1在轉移性前列腺癌的表達顯著增高[4]。本研究采用免疫組化方法檢測前列腺癌組織中FoxM1蛋白的表達情況，并分析其與前列腺癌不同臨床病理特征之間的相關性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

118例前列腺癌患者，中位年齡是69歲(平均年齡71歲，年齡范圍42～82歲)。其中<70歲45例，≥70歲73例。按照Gleason評分標準：4～6分42例，7～10分76例。按照TNM分期：T1～T2期56例，T3～T4期62例；N0期104例，N1期14例；M0期102例，M1期16例。另取22例前列腺良性增生組織(BPH)作為對照。

試劑:兔抗人FoxM1多克隆抗體購自美國santa公司；生物素標記二抗、DAB顯色試劑盒、檸檬酸鹽、PBS等均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2 方法

免疫組化采用SP法：切片脫蠟、水化；PBS洗2～3次各5 min；3% H2O2滴加在切片組織上，室溫靜置10 min；PBS洗2～3次各5 min；抗原修復；PBS洗2～3次各5 min；滴加封閉液(1%BSA),37℃恒溫孵育20 min；甩去多余液體；滴加兔抗人FoxM1多克隆抗體50 μl(1∶50)，37℃恒溫孵育1 h；PBS洗3次各5 min；滴加生物素標記二抗50 μl(1∶200)，37℃恒溫孵育1 h；PBS洗3次各5 min；DAB顯色5～10 min，在顯微鏡下掌握染色程度；PBS或自來水沖洗10 min；蘇木精復染2 min，鹽酸酒精分化；自來水沖洗10～15 min；脫水、透明、封片、鏡檢。

1.3 結果判斷

參照Carcangiu的雙記分法，根據細胞陽性染色強度記分為3分(深棕色)、2分(棕色)、1分(淡棕色)和0分(陰性)；根據陽性細胞數量多少記分為3分(60%以上)、2分(20%～60%)、1分(20%以下)和0分(陰性)。2種記分的乘積為各檢測指標的表達狀況，總分≥4分為高表達，≤3分為低表達或陰性。

1.4 統計學分析

采用SPSS13.0統計軟件進行統計處理，兩因素間差異的比較采用χ2檢驗或Fisher檢驗法，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

前列腺癌組織FoxM1蛋白的高表達率(63.6%)顯著高于良性增生組織(27.3%)(P<0.05)；FoxM1蛋白表達水平與前列腺癌患者的年齡無顯著相關性(P>0.05)，與Gleason評分和TNM分期顯著相關(P<0.05)。前列腺癌患者Gleason評分和TNM分期越高，FoxM1蛋白表達水平也越高，見表1。

表1 FoxM1蛋白表達與前列腺癌臨床特征的關系(例，%)

3 討論

腫瘤形成是多基因突變、多步驟的過程，受到促癌及抑癌相互拮抗信號通路的調控，導致細胞增殖失控、分化受阻。FoxM1過度表達對于腫瘤細胞的無限增殖或長期生存以及其侵襲、轉移等有重要意義。FoxM1可以使細胞周期依賴性的Cdk/cyclins/Ckis異常時相性激活而致腫瘤細胞過度增殖[5]。異常表達的FoxM1還能協同致癌物如烏拉坦、甲基膽蒽或丁羥甲苯促進癌癥的發生，是細胞發生惡性轉變的重要分子基礎[6]。凋亡抑制是腫瘤維持惡性特征的重要因素，FoxM1的存在可以保護具有高水平凋亡誘導因子ROS的增殖細胞免于發生衰老及細胞凋亡[7]。研究顯示，FoxM1還參與EMT、腫瘤細胞運動、侵襲及轉移前靶器官小環境的形成等，并通過活化Akt-Snail信號途徑，激活Stathmin、LOX、LOXL2及其他參與轉移的靶基因，進一步促進腫瘤細胞的轉移[8]。此外，在胰腺癌細胞系AsPC-1中過表達FoxM1，可通過miR-200b的調節使其表面的間質細胞標志物ZEB1、ZEB2及E-cadherin等活化，獲得EMT細胞表型，同時也提高了胰腺癌細胞微球體形成能力，獲得CSC的表型。說明FoxM1促使細胞經歷EMT，誘導具有CSC表型的產生，在腫瘤的發生、復發、轉移等過程中起作用[9，10]。

本研究結果表明，前列腺癌FoxM1蛋白的表達水平顯著高于前列腺良性增生組織。在前列腺癌中，隨著TNM分期、Gleason評分的增高，FoxM1蛋白表達強度也明顯增加。可提示FoxM1可能與前列腺癌的發生和發展有關，即FoxM1的表達增高通過抑制凋亡、促進增殖，增強細胞侵襲和遷移能力，進而促進前列腺癌變和惡性演進。因此，FoxM1蛋白有可能成為前列腺癌的早期診斷的實驗室參考指標，同時，通過檢測FoxM1蛋白的表達情況還可以了解前列腺癌患者腫瘤的惡性程度及初步判斷預后，并且還有望成為前列腺癌治療的新的分子靶點。

[1] Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics,2012〔J〕.CA Cancer J Clin,2012，62(1):10.

[2] 王 尉，胡衛列，呂 軍，等.Me1-18在前列腺癌中的臨床意義〔J〕.實用癌癥雜志,2011,26(2)：115.

[3] 余琪琪,孟 蕾,譚擁軍.轉錄因子FoxM1--癌癥治療新靶點〔J〕.分子診斷與治療雜志，2011,3(5):339.

[4] Chandran UR,Ma C,Dhir R,et al.Gene expression profiles of prostate cancer reveal involvement of multiple molecular pathways in the metastatic process〔J〕.BMC Cancer,2007,12(7):64.

[5] Tan Y,Raychaudhuri P,Costa RH.Chk2 mediates stabilization of the FoxM1 transcription factor to stimulate expression of DNA repair genes〔J〕.Mol Cell Biol,2007,27(3):1007.

[6] Wang IC,Meliton L,Ren X，et al.Deletion of Forkhead Box M1 transcription factor from respiratory epithelial cells inhibits pulmonary tumorigenesis〔J〕.PLoS One,2009 4(8):e6609.

[7] Park HJ,Carr JR,Wang Z,et al.FoxM1,a critical regulator of oxidative stress during oncogenesis〔J〕.EMBO J,2009,28(19):2908.

[8] Park HJ,Gusarova G,Wang Z,et al.Deregulation of FoxM1b leads to tumour metastasis〔J〕.EMBO Mol Med,2011,3(1):21.

[9] Bao B,Wang Z,Ali S,et al.Over-expression of FoxM1 leads to epithelial- mesenchymal transition and cancer stem cell phenotype in pancreatic cancer cells〔J〕.J Cell Biochem,2011,112(9):2296.

[10] 公小迪,姜 斌.FoxM1轉錄因子在腫瘤研究中的新進展〔J〕.現代腫瘤學，2012,20(1)：165.