P53、P57和Ki-67在絨毛水腫及水泡狀胎塊中的表達及意義

李軍紅，程蔚蔚

水泡狀胎塊以滋養(yǎng)葉細胞增生和胎盤絨毛過度生長為特征，可分為完全性水泡狀胎塊和部分性水泡狀胎塊。不同類型的水泡狀胎塊治療和預(yù)后不同，以往主要靠組織學(xué)進行鑒別診斷。近年來，隨著超聲技術(shù)的發(fā)展，使得發(fā)現(xiàn)和懷疑水泡狀胎塊的時間不斷提前，但由于早期水泡狀胎塊的組織學(xué)特征并不典型，與流產(chǎn)的水腫絨毛鑒別診斷也有困難，這就要求找一些標(biāo)志物以輔助診斷[1]。近年來有一些文獻報道P53、P57及Ki-67在不同的胎盤絨毛水腫性病變中有鑒別診斷的價值，但結(jié)果不甚一致。本組應(yīng)用免疫組化EnVision方法檢測15例流產(chǎn)水腫絨毛、20例部分性水泡狀胎塊及23例完全性水泡狀胎塊中Ki-67、P53、P57蛋白的表達情況，以探討和總結(jié)其在臨床病理診斷中的價值。

1 材料與方法

1.1臨床資料收集洛陽市中心醫(yī)院病理科2002～2012年臨床及病理形態(tài)學(xué)上明確診斷為流產(chǎn)水腫絨毛、部分性水泡狀胎塊、完全性水泡狀胎塊各18、23、20例。所選標(biāo)本均經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，用于HE和免疫組化染色。

1.2方法應(yīng)用免疫組化EnVision方法檢測P53(克隆號SP5)、P57(克隆號57P06)、Ki-67(克隆號MIB-1)鼠抗人單克隆抗體，操作按說明步驟進行，設(shè)陰性及陽性對照。所有抗體及其試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3免疫組化結(jié)果判定由兩位高年資病理醫(yī)師進行交叉雙盲判定。P53陽性均定位于胞核，胞核明確的棕黃色顆粒判定為陽性，選取200個細胞滋養(yǎng)葉細胞觀察，≥5%的P53細胞核著色判為陽性，否則為陰性；P57判讀參照Kale[2]等報道的方法：P57陽性均定位于胞核，在1張切片中若絨毛間質(zhì)細胞和細胞滋養(yǎng)葉細胞著色，陽性細胞數(shù)>30%左右即判定為陽性；絨毛間質(zhì)細胞和細胞滋養(yǎng)葉細胞不著色或散在著色，陽性細胞數(shù)小于總數(shù)的30%判斷為陰性。Ki-67陽性定位于細胞核，選取200個細胞滋養(yǎng)葉細胞觀察，Ki-67PI為陽性細胞數(shù)/計數(shù)細胞總數(shù)×100%。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件包作統(tǒng)計學(xué)處理 ，數(shù)據(jù)采用方差分析，q檢驗和χ2檢驗，檢驗水平均定在α=0.05水平。

2 結(jié)果

18例流產(chǎn)水腫絨毛、23例部分性水泡狀胎塊及20例完全性水泡狀胎塊中Ki-67、P53、P57蛋白的表達結(jié)果見表1。在流產(chǎn)水腫絨毛、部分性水泡狀胎塊、完全性水泡狀胎塊的細胞滋養(yǎng)液細胞中，P53的表達分別為1/18(5.6%)、14/23(60.9%)、16/20(80.0%), 部分性水泡狀胎塊組和完全性水泡狀胎塊組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而部分性水泡狀胎塊和完全性水泡狀胎塊組與流產(chǎn)水腫絨毛組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；P57的表達分別為18/18(100.0%)、32/23(100.0%)、0(0%)，完全性水泡狀胎塊組的陽性表達率顯著低于流產(chǎn)水腫絨毛和部分性水泡狀胎塊組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 流產(chǎn)水腫絨毛和部分性水泡狀胎塊組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；Ki-67 PI的表達分別為(11.0±6.3)%、(57.2±10.8)%、(63.2±16.8)%,完全性水泡狀胎塊組和部分性水泡狀胎塊組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而完全性水泡狀胎塊和部分性水泡狀胎塊組與水腫流產(chǎn)絨毛組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 Ki-67、P53、P57在流產(chǎn)水腫絨毛、部分性水泡狀胎塊及完全性水泡狀胎塊中的表達 例(%)

3 討論

P53基因產(chǎn)物是一種核蛋白，它被認(rèn)為能參與細胞周期、凋亡和維持基因組穩(wěn)定性的調(diào)控。其突變性P53蛋白不但失去了對細胞增殖和分化的負調(diào)節(jié)作用，還能正向激活某些促生長基因的表達，促進細胞增殖，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。本組結(jié)果顯示，P53蛋白在流產(chǎn)性絨毛中弱表達(5.6%)，在部分性水泡狀胎塊和完全性水泡狀胎塊中的表達率分別為60.9%和80.0%。提示P53在水腫絨毛組織與水泡狀胎塊中的表達有顯著差異，與文獻[3]報道的結(jié)果一致。由此提示水泡狀胎塊中可能存在P53抑癌基因的突變，結(jié)果同時表明P53蛋白的檢測有助于鑒別診斷水腫流產(chǎn)的絨毛和水泡狀胎塊。

P57蛋白是細胞周期負性調(diào)控因子，屬于CIP/KIP家族，參與細胞周期調(diào)控、促進凋亡、誘導(dǎo)分化。目前在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)P57印記缺失或印記錯誤，導(dǎo)致基因表達下降[4]，表明P57的表達缺失可能促進了腫瘤的增殖。本組研究顯示P57在流產(chǎn)水腫絨毛組和部分性水泡狀胎塊組中的表達率為100.0%，在完全性水泡狀胎塊組中的無表達。提示P57在流產(chǎn)水腫絨毛組和部分性水泡狀胎塊組與完全性水泡狀胎塊組中的表達有顯著差異，支持一些學(xué)者的觀點[5]∶P57標(biāo)記可以被應(yīng)用于形態(tài)上難以客觀區(qū)別的部分性水泡狀胎塊和完全性水泡狀胎塊的鑒別。

Ki-67表達在所有活動的細胞周期(G1、S、G2和有絲分裂期)中，而在G0期不表達。Ki-67 PI高低與許多腫瘤的分化程度、浸潤轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密切相關(guān)。本組研究顯示Ki-67 PI在水泡狀胎塊組和流產(chǎn)水腫絨毛組間表達有顯著差異，結(jié)果表明Ki-67 PI可較為準(zhǔn)確地反映水泡狀胎細胞滋養(yǎng)液細胞的增生活性，可作為評估病變是水泡狀胎塊或是流產(chǎn)水腫絨毛的重要參考指標(biāo)[6]。值得注意的是Ki-67只計數(shù)圍繞腫脹絨毛的細胞滋養(yǎng)細胞的Ki-67陽性細胞，然后計算出Ki-67 PI，不應(yīng)包括絨毛外細胞滋養(yǎng)細胞以及合體滋養(yǎng)細胞，與盧先軍等[7]報道的方法一致，提示其在應(yīng)用中評估的方法也很關(guān)鍵。

總之，在完全性水泡狀胎塊、部分性水泡狀胎塊和流產(chǎn)水腫絨毛從形態(tài)上不易鑒別時，P53、P57、Ki-67免疫組化指標(biāo)可作為進一步診斷的依據(jù)，具有較高的靈敏性和特異性。

參考文獻：

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[3]Chen Y,Shen D,Gu Y,et al.The diagnostic value of Ki-67,P53 and P63 in distinguishing partial Hydatidiform mole from hydropic abortion [J].Wien Klin Wochenschr,2012,124(5-6):184-187.

[4]Popiolek D A,Yee H,Mittal K，et al.Multiplex shorttandem repeat DNA analysis confirms the accuracy of P57 immunostaining in the diagnosis of complete hydatidiform model[J].Hum Pathol，2006,37(11)：1426-1434.

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[6]柯儒斌，徐潮，黃炎，等. Ki-67、P53和P57在水泡狀胎塊中的表達及意義[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2012,28(21)：3584-3586.

[7]盧先軍，姜冰，栗占三. Ki-67和P53在水泡狀胎塊中的表達及意義[J].醫(yī)學(xué)臨床研究，2010,27(10)：1886-1888.