“一測多評”測定木香中木香烴內酯和去氫木香內酯的含量

夏麗珍，李春嬌，賴增發

（1.三明市中西醫結合醫院，福建 三明 365001；2.三明市藥品檢驗所，福建 三明 365000）

木香為菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根，其中木香烴內酯（costunolide）和去氫木香內酯（dehydrocostuslactone）為揮發油的主要成分，此外還有菊糖和木香堿等。木香主要起行氣調經止痛功效，是治脾胃虛寒氣滯要藥［1］。木香烴內酯和去氫木香內酯均為倍半萜內酯，性質不穩定，不易保存［2］。《中華人民共和國藥典》（2010 版）一部中用外標對照法測木香烴內酯和去氫木香內酯香總量［3］。為更好控制其質量，節約對照品，提高檢測效率，本實驗以相對易得的木香烴內酯為內標，采用一測多評法［4］（quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMA）建立去氫木香內酯的含量測定方法，并將一測多評方法與常規外標法進行比較，獲得滿意結果。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀；島津LC-2010A高效液相色譜儀；Ultimate XB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Gemini C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Agilent Tc-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Waters sunfire C18柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；BP211D電子天平（德國塞多利斯股份公司）；KQ5200DE數控超聲波提取器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料 木香烴內酯（111524－201107）、去氫木香內酯（111525－201008）對照品均購自中國藥品生物制品檢定所，純度100%；甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純，木香樣品為市售品（北京同仁堂股份有限公司）。

2 方法學考察

2.1 色譜條件 色譜柱為Ultimate XB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（65∶35）；柱溫 25℃；流速：1.0 mL／min；檢測波長 225 nm。上述色譜條件下，各組分分離度良好，見圖1、圖2。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取木香烴內酯對照品12.68 mg、去氫木香內酯對照品16.32 mg，分別置50 mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得各對照品儲備液適量。再分別精密吸取上述各對照品儲備液8 mL置同一25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液（木香烴內酯 81.15 μg／mL，去氫木香內酯 104.4 μg／mL）。

2.3 供試品溶液的制備 取木香（批號201208562，過四號篩）粉末約0.1 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理30 min（功率300 W，頻率50 kHz），取出，放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關系 精密移取混合對照品溶液2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25 mL 置 50 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，分別精密取20 μL注入液相色譜儀，以進樣量對峰面積積分值進行線性回歸，得回歸方程：木香烴內酯 Y＝2179.4X＋4.6448（r＝0.9997）， 去氫木香內酯 Y＝874.1X＋0.6751（r＝0.9998），表明木香烴內酯在 0.0811～0.811 μg、去氫木香內酯在0.104～1.044 μg線性關系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液10 μL，重復進樣6次，記錄色譜峰，計算木香烴內酯、去氫木香內酯峰面積的RSD分別為0.56%、0.43%。

2.6 穩定性試驗 取木香（批號201208562，過四號篩）粉末約0.1 g，精密稱定，制備供試品溶液，分別于制備后 0、2、4、8、12、24 h 進樣 10 μL， 記錄色譜峰，計算得木香烴內酯和去氫木香內酯峰面積的RSD分別為0.16%、0.63%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.7 重現性試驗 取木香（批號201208562，過四號篩）粉末約0.1 g，共6份，精密稱定，分別制備供試品溶液，分別進樣10 μL，測定木香烴內酯、去氫木香內酯峰面積并計算含量及RSD。結果供試品中木香烴內酯、去氫木香內酯含量分別為1.5833%、2.5294%，RSD分別為1.3%、1.8%。

2.8 加樣回收試驗 取木香（批號201208562，過四號篩）粉末0.05 g，共6份，分別加入木香烴內酯對照品儲備液3 mL、去氫木香內酯對照品儲備液4 mL，制備供試品溶液，測定，計算得木香烴內酯、去氫木香內酯平均加樣回收率分別為98.36%、98.64%，RSD分別為1.5%、1.8%。

3 方 法

3.1 色譜柱考察 取“2.4”項下制備的6個不同質量濃度的混合對照品溶液，分別進樣20 μL，以木香烴內酯為內標，計算木香烴內酯對去氫木香內酯的校正因子，考察Ultimate XB-C18柱、Gemini C18柱、Agilent Tc-C18柱、Waters sunfire C18柱4種色譜柱對相對校正因子的影響，結果見表1。表明不同色譜柱所得到的相對校正因子基本一致。

表1 不同色譜柱的相對校正因子

3.2 高效液相色譜考察 取“2.4”項下制備的6個不同質量濃度的混合對照品溶液，分別進樣20 μL，以木香烴內酯為內標，計算木香烴內酯對去氫木香內酯的校正因子，考察了島津LC-2010A和Agilent 1200這2種高效液相色譜儀對相對校正因子的影響，結果見表2。表明在不同的液相色譜系統下所得到的相對校正因子基本一致。

表2 不同高效液相色譜的相對校正因子

3.3 色譜峰專屬性考察 利用相對保留值r＝tR1／tR2進行定位，即以待測組分色譜峰與木香烴內酯色譜峰的相對保留時間來確定，去氫木香內酯與木香烴內酯峰相對保留時間的平均值為1.1452，RSD為1.7%。結果見表3。

表3 2種成分的保留時間及相對保留時間

4 樣品測定

分別取各批樣品制備供試品溶液，分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液各10 μL注入高效液相色譜儀，測定。分別采用外標法和“一測多評”法計算木香中木香烴內酯、去氫木香內酯的含量，結果見表4。表明一測多評法可用于木香中木香內酯的含量測定。

表4 木香中木香烴內酯、去氫木香內酯的測定

5 討 論

在一定的線性范圍內，成分的量與檢測器響應值成正比，即：W＝f（A）。測定時，以木香中木香烴內酯為內標，建立其與去氫木香內酯之間的相對校正因子（relative correction factor，RCF），然后通過校正因子計算其含量。計算公式為：Wm＝fkm×（Wk×Am）／Ak，Ak為內標物峰面積，Wk為內標物的濃度，Am為其它組分m峰面積，Wm為其它組分m的濃度。一測多評法適用于對照品難得或制備成本高或不穩定的情況下同類多組分的同時測定［5］。

木香中2個主要成分木香烴內酯和去氫木香內酯的含量都很高［6］，這也是建立含量指標測定的主要原因。用流動相甲醇-水（65∶35），分離效果明顯，可以使木香烴內酯、去氫木香內酯與其它組分分離（分離度＞1.5）。選用甲醇、乙醇不同提取溶劑，結果顯示甲醇作溶劑采用超聲30 min，目標成分提取效率高［7］。因2個內酯成分的熱不穩定性，故未考察回流和索氏提取等熱提取方式。

參考內標峰的保留時間，再根據紫外吸收特征判斷，即能夠正確判斷出目標峰的準確位置。結果表明：利用上述方法進行峰的定位是可行的。

本實驗考察不同品牌的色譜柱和液相系統對木香烴內酯、去氫木香內酯之間相對校正因子的影響，說明實驗中得到的校正因子具有較高的可信度，通過計算可知“一測多評”法與外標法測到的含量沒顯著性差異，“一測多評”法可以在對照品缺省的情況下實現定量測定的要求。

［1］雷載權，陳松育，高學敏，等.中藥學［M］.上海：上?？茖W技術出版社，1995：161.

［2］劉俊紅，李棣華，伍孝先.提取木香中木香烴內酯及去氫木香內酯影響因素的初步研究［J］.時珍國醫國藥，2009，20（12）：3013-3014.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：57-58.

［4］王智民，高慧敏，付雪濤，等.一測多評法中藥質量評價模式方法學研究［J］.中國中藥雜志，2006，31（23）：1925-1928.

［5］王智民，錢忠直，張啟偉，等.一測多評法建立的技術指南［J］.中國中藥雜志，2011，36（6）：657-658.

［6］趙小民，殷高彬.不同產地木香中木香烴內酯和去氫木香內酯的 HPLC 測定［J］.安微醫藥，2009，13（6）：617-618.

［7］李慧，陳寶田，翁立冬，等.木香炮制品中木香烴內酯和去氫木香內酯的 HPLC 測定［J］.中草藥，2007（11）：1659-1661.