乳腺癌組織中Bmi－1蛋白表達與病理學特征的相關性研究

王曉亮，李紹剛，李賽飛，康旭，汪亞航，王軍，王東海，金來倫

（奉化市人民醫院，奉化 315500）

Bmi－1（B cellspecific moloney murine leukemia virus insertion site1）是多梳基因家族（Polycomb group，PcG）成員中的轉錄抑制因子，參與細胞增殖調控［1］。本研究通過檢測Bmi－1在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達，探討其與乳腺癌臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

隨機選擇2001年1月～2005年12月符合美國癌癥聯合委員會（AJCC）乳腺癌分期（第6版）的女性乳腺浸潤性導管癌病例60例。全部病例術前均無放療、化療及其他治療病史，年齡25～87歲，平均年齡 （55±12.9）歲。Luminal A 型 29 例，Luminal B型11例，HER2過表達型6例，Basallike型14例；腫塊大小（3.22±1.39）cm，T1 18例，T2 38例，T3 4例；淋巴結N0 35例，N1 15例，N2 10例；TNM分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期36例，Ⅲ期10例；遠處轉移12例，隨訪期間死亡9例。

1.2 試劑與方法

乳腺癌組織標本均經免疫組織化學檢測雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）、E－cadherin、P120和Ki－67，每例乳腺癌組織病理切片均由兩位專家確認診斷為乳腺浸潤性導管癌。癌旁乳腺組織取自上述60例標本距癌組織3cm以上乳腺組織。

鼠抗人單克隆抗體Bmi－1購自美國SantaCruz公司，ER、C－erbB－2、PR、E－cadherin、P120和 Ki－67均購自福州邁新生物開發公司。

采用免疫組織化學SP法。將標本連續切片，常規脫蠟、水化，經3%的H2O2消解內源性過氧化物酶后，高壓抗原修復，一抗（鼠抗人 Bmi－1、C－erbB－2、ER、PR單克隆抗體）、二抗（生物素標記）作用后，用DAB顯色，蘇木精復染后脫水透明，常規中性樹膠封固后顯微鏡下觀察。以PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.3 免疫組織化學結果判定

Bmi－1蛋白陽性表達主要表現為細胞核內呈現棕黃色或棕褐色顆粒，也有少量胞質內呈現棕黃色顆粒。隨機取5個高倍視野，每個視野分別計數100個細胞，計算陽性細胞所占百分率。染色結果根據陽性細胞所占比率分為4個等級，陰性：無陽性細胞或陽性細胞數＜5%；弱陽性：陽性細胞數為5%～25%；中陽性：陽性細胞數為26%～50%；強陽性：陽性細胞數＞50%。根據這4個等級（陰性＝－；弱陽性＝＋；中陽性＝＋＋；強陽性＝＋＋＋）的表達水平評分。

1.4 統計學處理

所有數據均經SPSS 17.0軟件進行統計分析。計數資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，并采用Spearman相關性分析，顯著性水準a＝0.05。

2 結果

2.1 Bmi－1蛋白在癌旁乳腺組織和乳腺癌組織中的表達

乳腺癌組織中Bmi－1蛋白陽性表達主要表現為細胞核內呈現棕黃色或棕褐色顆粒（見圖1），也有少量胞質內呈現棕黃色顆粒。在60例癌旁乳腺組織中，Bmi－1蛋白陽性表達10例；在60例乳腺癌組織中，Bmi－1蛋白陽性表達53例。Bmi－1蛋白的陽性表達率在癌旁乳腺組織中和乳腺癌組織中分別為16.7%和88.3%，兩者表達差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 Bmi－1蛋白在乳腺癌組織中的表達與臨床病理因素的關系

60例乳腺癌標本，Bmi－1蛋白陽性表達率在淋巴結N0、N1、N2中差異有統計學意義（P＜0.05，R＝0.339）；Bmi－1蛋白陽性表達率在 T1、T2、T3分別為72.2%、94.7%、100%，差異有統計學意義（P＜0.05，R＝0.431）；Bmi－1 蛋白陽性表達率在TNM分期Ⅰ期64.3%、Ⅱ期94.5%、Ⅲ期100%，差異有統計學意義（P＜0.05，R＝0.360）；Bmi－1蛋白陽性表達率在無遠處轉移組和遠處轉移組中分別為85.4%、100%，差異有統計學意義（P＜0.05，R＝0.302）；而Bmi－1蛋白陽性表達在乳癌相關基因ER、PR、CerbB－2中，差異無統計學意義（見表1）。

表1 Bmi－1蛋白在乳腺癌組織中的表達與臨床病理因素的關系

圖1 乳腺癌組織中Bmi－1蛋白陽性表達

3 討論

Bmi－1是PcG家族成員之一，調控細胞的增殖［1］，對哺乳動物的骨骼、神經發育及造血有重要作用［2］。研究［3－5］表明 Bmi－1 在惡性腫瘤如胃癌、肺癌、宮頸癌中高表達，提示Bmi－1的高表達與多種腫瘤的發生、發展關系密切。因此，高表達Bmi－1的細胞被認為是“腫瘤干細胞”，確定Bmi－1的調控機制及其在腫瘤發生、發展中的作用對診治惡性腫瘤有重要意義。

Bmi－1調控機制可能為：1）Bmi－1協同c－myc基因作用于腫瘤細胞，使其逃逸凋亡［6］；2）Bmi－1的下游靶 點 是INK4a－ARF 位 點［7］，Bmi－1 通過抑制 p 16INK4a的腫瘤抑制通路促進腫瘤細胞增殖［8］；3）Bmi－1激活腫瘤細胞的端粒酶促使腫瘤細胞擴增［9］。

文獻［10］報道Bmi－1會誘導乳腺上皮永生化，本研究發現乳腺癌組織中Bmi－1蛋白高表達，其陽性表達率為88.3%，明顯高于癌旁組織，與馮艷等［11］報道相符。同時，發現Bmi－1蛋白的高表達與乳腺癌原發癌腫大小呈正相關（P＜0.05，R＝0.431），并與乳腺癌TNM分期之間呈正相關，即乳腺癌TNM分期越高，Bmi－1蛋白陽性表達就越顯著。這說明Bmi－1作為癌基因，通過各種調控機制對乳腺癌的發生發展起重要作用，提示Bmi－1可能成為診斷乳腺癌的新分子標志物。

浸潤轉移是乳腺癌的惡性生物學行為，也是導致患者死亡的主要原因。本研究發現乳腺癌Bmi－1蛋白陽性表達與淋巴結轉移之間呈正相關，Bmi－1蛋白陽性表達越顯著，淋巴結轉移越多，與文獻［1］報道的乳腺癌Bmi－1的高表達與腋窩淋巴結轉移顯著相關的結論一致；同時，本研究發現乳腺癌Bmi－1蛋白在遠處轉移組的陽性表達明顯高于無遠處轉移組，表明乳腺癌患者中Bmi－1的高表達與乳腺癌的遠處轉移呈正相關，即轉移進展越快，Bmi－1蛋白陽性表達就越顯著。淋巴結轉移、遠處轉移提示乳腺癌預后不良，本研究發現當乳腺癌出現淋巴結轉移越多、遠處轉移越快時，其Bmi－1蛋白表達就越顯著，說明Bmi－1在乳腺癌的浸潤轉移過程中起重要作用，提示Bmi－1可能成為預測乳腺癌轉移風險的新分子標志物。

綜上所述，Bmi－1蛋白的高表達在乳腺癌的發生發展和浸潤轉移中起重要作用，提示Bmi－1可能成為乳腺癌的診斷及預測乳腺癌轉移風險的新標志物。

［1］Kim JH，Yoom SY，Jeong SH，et al.Overexpression of Bmi－1 oncoprotein correlates with axillary lymph node metastases in invasive ductal breast cancer［J］.Breast，2004，13（5）：383－388.

［2］Jacobs JJ，Scheijen B，Voncken JW，et al.Bmi－1collaborates with c－myc in tumorigenesis by inhibiting c－Myc－induced apoptosia via INK4a／ARF［J］.Genes Dev，1999，13（20）：2678－2690.

［3］趙晶，羅祥東，達春麗，等.Bmi－1在正常胃組織和胃癌及其癌前病變中的表達及意義［J］.中國腫瘤臨床，2009，36（1）：42－45.

［4］Hu Z，Hu Y，Zhu Y.Preliminary investigation on expression of Bmi－1in non－small－cellular lung cancer［J］.Zhongguo Fei Ai Za Zhi，2008，11（1）：107－109.

［5］Zhang X，Wang CX，Zhu CB，et al.Overexpression of Bmi－1in uterine cervical cancer：correlation with clinicopathology and prognosis［J］.Int J Gynecol Cancer，2010，20（9）：1597－1603.

［6］Park IK，Morrison SJ，Clarke MF.Bmi－1，stem cells，and senescence regulation［J］.J Clin Invest，2004，113（2）：175－179.

［7］Jacobs JJ，Kieboom LK，Marino S，et al.The oncogene and Polycomb－group gene Bmi－1regulates cell proliferation and senescence through the ink4alocus［J］.Nature，1999，397（6715）：164－168.

［8］Dhawan S，Tschen SI，Bhushan A.Bmi－1regulates the Ink4a／Arf locus to control pancreatic beta－cell proliferation［J］.Genes Dev，2009，23（8）：906－911.

［9］Song LB，Zeng MS，Liao WT，et al.Bmi－1is a novel molecular marker of nasopharyngeal carcinoma progression and immortalizes primary human nasopharyngeal epithelial ce1ls［J］.Cancer Res，2006，66（12）：6225－6232.

［10］Dimri GP，Martinez JL，Jacobs JJ，et al.The Bmi－1oncogene induces telomerase activity and immortalizes human mammary epithelial cells［J］.Cancer Res，2002，62（16）：4736－4745.

［11］馮艷，宋立兵，郭寶紅，等.Bmi－l在乳腺癌組織中的表達及意義［J］.癌癥，2007，26（2）：154－157.