大蒜素對(duì)高眼壓模型兔降眼壓作用的研究

黃 佳 （長(zhǎng)江大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州434000）

潘 麗 （江陵縣人民醫(yī)院眼科，湖北 荊州434100）

魯 銳，項(xiàng) 標(biāo)，黎 成

劉靜文，朱炎華，袁岳沙

（長(zhǎng)江大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州434000）

青光眼是全球第2位致盲眼病，僅次于白內(nèi)障。病理性眼壓增高是青光眼主要的危險(xiǎn)因素，與青光眼患者視神經(jīng)損害和視野缺損的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)，也是青光眼發(fā)生發(fā)展的重要因素，到目前為止，降眼壓處理是臨床上減緩青光眼進(jìn)展的唯一方法［1－2］。復(fù)方卡波姆凝膠兔眼前房穿刺術(shù)是一種常用的有效的建立慢性高眼壓模型兔的方法，成功的建模操作后1周內(nèi)可見眼壓明顯增高［3］。本研究擬探討大蒜素是否具有降低高眼壓兔眼壓的作用，為臨床開發(fā)大蒜素治療青光眼提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料

大白兔由長(zhǎng)江大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，卡波姆 （北京市海淀會(huì)友精細(xì)化工廠，純度為99%），大蒜素 （上海凱賽化工有限公司，純度為99%），興萬Icare眼壓計(jì) （香港興萬電子儀器有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 卡波姆凝膠建立高眼壓模型兔 將30只健康大白兔隨機(jī)均分為A、B、C組，每組10只，按文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)60只兔眼進(jìn)行建立高眼壓動(dòng)物模型處理［3］。

1.2.2 各組處理方法 各組均從建模穿刺后開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)處理：A組采用1%的大蒜素溶液滴眼［4］，B組采用生理鹽水滴眼并于7d后改用1%的大蒜素滴眼，C組采用生理鹽水滴眼。每天早中晚滴3次，3滴／次，連續(xù)滴30d。

1.2.3 眼壓測(cè)量 用Icare眼壓計(jì)于建模前測(cè)定初始眼壓，3次／d，連續(xù)3d，取均值記錄為當(dāng)天各眼眼壓值。取95%可信區(qū)間為正常眼壓范圍，大于1.96倍均值確定為高眼壓，并在建模處理后繼續(xù)測(cè)定眼壓，3次／d，連續(xù)30d。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Spss20.0軟件，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，兩組間均數(shù)的比較采用t或t′檢驗(yàn)，自身配對(duì)前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物高眼壓標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)建模穿刺前測(cè)得60只兔眼的初始眼壓值，算得平均值μ＝4.80mmHg，方差σ＝1.09mmHg，正常眼壓范圍為（μ±1.96σ）［3］；定義眼壓值高于μ＋1.96σ＝6.94mmHg者為高眼壓，即凡在建模穿刺第7天眼壓高于6.94mmHg即為該眼建模成功，在評(píng)價(jià)大蒜素是否有降眼壓作用時(shí)，各組建模成功的眼納入觀察范圍。

2.2 各組建模成功率的比較

C組中有1只兔眼穿刺后角膜潰瘍，予以剔除。在建模后第7天時(shí)觀察發(fā)現(xiàn)，A、B、C各組分別有13、18只和15只兔眼的眼壓值高于6.94mmHg，故A組、B＋C組的建模成功率分別為65.00%（13／20）、84.62% （33／39），二者建模成功率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＞0.05）。

2.3 各組內(nèi)高眼壓值變化的比較

在建模成功第15、20、25、30天，觀察其自身眼壓值的變化，結(jié)果顯示：A、B兩組在第20天后眼壓值均有明顯下降，C組在第30天出現(xiàn)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1、2。

表1 各組不同時(shí)間觀察點(diǎn)高眼壓值變化

表2 各組內(nèi)在各時(shí)間觀察點(diǎn)上自身配對(duì)t檢驗(yàn)的t值

2.4 各組間高眼壓值變化的比較

分別在不同時(shí)間觀察點(diǎn)上對(duì)各組間眼壓均值進(jìn)行比較，結(jié)果顯示：在第7天A組眼壓值明顯低于B、C兩組（P＜0.05）；第15、20天A組與B組眼壓值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；B組第25天、30天眼壓均值明顯低于C組（P＜0.05）。見表1、3。

表3 各組間在時(shí)間觀察點(diǎn)上的組間配對(duì)t（t′）檢驗(yàn)的t（t′）值

3 討 論

大蒜素又名大蒜新素，其化學(xué)名為二烯丙基三硫化物 （CH2＝CH－CH－S－S－S－CH2－CH＝CH2），是百合科蔥屬植物蒜的鱗莖中的主要有效成分。它具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、易得、易合成、生物活性作用明顯、藥理作用廣泛等特點(diǎn)。除具有抗病原微生物、抗腫瘤、保護(hù)肝臟、提高機(jī)體免疫力等多種藥理作用外，還具有預(yù)防心腦血管疾病、抗氧化、抗?jié)儭⒔档湍懝檀肌⒔笛獕汉脱⒔档脱恰⒖寡“寰奂榷喾N藥理作用，且不良反應(yīng)少，使用安全，有著廣泛的應(yīng)用前景［5］，但在降眼壓方面的研究尚少見報(bào)道。Chu等［6］發(fā)現(xiàn)大蒜素能降低正常兔的眼壓，以此為依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)旨在探討大蒜素是否也具有降低高眼壓兔眼壓的作用。

兔慢性高眼壓模型的建立方法有很多，如糜蛋白酶法、甲機(jī)纖維素法、糖皮質(zhì)激素法、血影細(xì)胞法、角鞏膜緣植入輸液管材料法，但是這些方法所形成的高眼壓模型兔的眼壓升高不穩(wěn)定或高眼壓狀態(tài)維持時(shí)間較短或操作復(fù)雜，而經(jīng)前房注射復(fù)方卡波姆法不僅造模成功率高 （約為90%）且高眼壓狀態(tài)持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng) （30余天），故本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)前房注射卡波姆法進(jìn)行建模處理［3，7－8］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，A組、B＋C組建模成功率分別為65.00%、84.62%，A組與B＋C組的建模成功率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但由表4可以看出在第7天，使用大蒜素組 （A組）與未使用大蒜素組 （B組和C組）眼壓值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且在第7天A組的眼壓值低于B組和C組的眼壓值。二者說明大蒜素對(duì)建模的成功率雖無顯著性影響，但在一定程度上能降低卡波姆凝膠所致眼壓升高幅度的作用。我們分析出現(xiàn)這種情況可能的原因有：①大蒜素通過改變卡波姆的理化性質(zhì)而影響其建模效果。卡波姆是丙烯酸與烯丙基蔗糖或季戊四醇交鏈而成的高分子聚合物，當(dāng)pH值較低時(shí)呈溶液狀，隨著pH值的升高，藥液的粘稠度逐漸增加而形成水凝膠狀［9］，大蒜素可能在卡波姆剛開始注入兔眼前房不久就使得卡波姆的pH值有所降低而使得卡波姆變成溶液狀或變得沒有B＋C組的那么粘稠，從而使得A組卡波姆建模后的眼壓值低于B＋C組。②在建模初期 （第1～7天）兔眼眼壓還未達(dá)到高眼壓標(biāo)準(zhǔn)，而根據(jù)Chu等的研究成果得知，大蒜素通過對(duì)交感神經(jīng)的作用降低正常兔眼內(nèi)壓，所以在建模未成功之前，大蒜素可能就使得A組的兔眼的眼壓低于均值，處于正常眼壓值的下限，雖然也受到與B＋C組同樣粘稠度的復(fù)方卡波姆的升壓作用使眼壓有所升高，但由于其基值比較低，故而最終仍有部分兔的眼壓仍未達(dá)到高眼壓的標(biāo)準(zhǔn)。③建模成功率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義可能與本實(shí)驗(yàn)樣本量不足有關(guān)，若要明確大蒜素是否能影響建模成功率，可以擴(kuò)大樣本量進(jìn)行探討。

為明確每組在同一處理?xiàng)l件下其眼壓值與用藥時(shí)間的關(guān)系，分別在第7、15、20、25、30天上觀察各組自身的眼壓值變化 （表2），發(fā)現(xiàn)A、B兩組在第20天后眼壓值均有明顯下降，C組在第30天出現(xiàn)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)合表1可知使用大蒜素組 （A組和B組）具有降低高眼壓模型兔的眼壓作用。而未使用大蒜素組 （即C組）在第15、20、25天的眼壓改變差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其眼壓值有輕微的下降趨勢(shì)和在第30天差異出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）與卡波姆建立高眼壓模型兔的時(shí)效性及兔本身的正常生理調(diào)控反應(yīng)有關(guān)［3］。

同時(shí)分析同一時(shí)間觀察點(diǎn)上各組間眼壓值的變化情況 （見表3），發(fā)現(xiàn)A組與C組之間的高眼壓緩解效果在第7、15、20、25、30天就有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B組與C組之間的高眼壓緩解效果在第7、15、20天無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在第25、30天處出現(xiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)合表1發(fā)現(xiàn)，A組眼壓一直呈不同程度的下降趨勢(shì)，并在第25、30天下降幅度較為明顯，尤其是在第25天；B組與A組一樣也呈下降趨勢(shì)，且在第30天 （B組用大蒜素處理的第23天）下降最為顯著；而C組的眼壓卻無較明顯的改變。由此可見，大蒜素的處理對(duì)高眼壓模型兔起到了降眼壓作用，使得使用大蒜素組與未使用大蒜素組之間的眼壓變化差異存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且大蒜素發(fā)揮最強(qiáng)作用的時(shí)間點(diǎn)在其使用23～25d左右。我們推測(cè)大蒜素降低本實(shí)驗(yàn)高眼壓模型兔眼壓的作用機(jī)制可能為：①通過抑制交感神經(jīng)遞質(zhì)刺激睫狀體無色素上皮細(xì)胞 （NPE），使細(xì)胞內(nèi)cAMP水平下降，通過一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)，使房水生成減少而使眼壓下降。②大蒜素可以擴(kuò)張房水回流靜脈，增加房水的回流而降低眼壓。對(duì)于使用大蒜素組 （A組或B組）與未使用大蒜素組 （C組）的治療效果在第25、30天均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在第15、20天B組與C組的治療效果卻無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以及A組、B組眼壓分別在第25、30天處下降幅度最為明顯，我們推測(cè)這可能都與大蒜素發(fā)揮降壓作用的時(shí)效性有關(guān)：高眼壓模型兔已建成功，即卡波姆將小梁網(wǎng)堵塞使得大蒜素通過擴(kuò)張房水回流靜脈、增加房水回流而降低眼壓的途徑受到影響，從而影響大蒜素降壓效果，其在第25、30天，治療效果差異顯著則可能是大蒜素減輕了小梁網(wǎng)的阻塞程度而使得降壓作用得到加強(qiáng)及上述其他原因引起。

綜上所述，1%大蒜素在一定程度上能降低復(fù)方卡波姆凝膠所致眼壓升高的幅度，即大蒜素在正常眼建模形成高眼壓眼的過程中有一定的降眼壓作用，能夠使正常眼在轉(zhuǎn)變?yōu)楦哐蹓貉蹠r(shí)眼壓不致過度升高。而對(duì)于已經(jīng)是高眼壓的眼，大蒜素也能降低其眼壓且這種作用與大蒜素的使用時(shí)間有一定的關(guān)系。但其具體對(duì)高眼壓模型兔眼壓的影響機(jī)制以及能否在臨床上開發(fā)為治療青光眼的藥物，還有待進(jìn)一步的研究。