長沙地區(qū)漢族人血小板抗原（HPA1－17）基因多態(tài)性調(diào)查

張 剛，曹麗群，謝毓濱，鐘待鳴

（長沙市血液中心，湖南 長沙410001）

人類血小板同種抗原（human patelet alloantigens，HPA）位于血小板膜糖蛋白上，這些蛋白是由遺傳決定的，HPA的基因頻率在不同種族、不同區(qū)域中的分布是不同的，研究HPA的基因多態(tài)性不僅為人類學(xué)和遺傳學(xué)等研究提供重要依據(jù)［1］。在臨床血小板輸血過程中，如果血小板同種抗原不相匹配，可導(dǎo)致受血者機(jī)體產(chǎn)生血小板同種抗體，引起同種免疫血小板減少綜合癥、輸血后紫癜、血小板輸注無效等［2］。通過對血小板基因分型的研究，可以有效避免血小板特異性免疫的發(fā)生，提供給需要輸注血小板患者HPA基因型相匹配的血液制品，在臨床輸血應(yīng)用中具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 樣本 長沙市中心血站收集618名長沙地區(qū)漢族無償血小板獻(xiàn)血者EDTA抗凝血500μl。樣本采用鹽析法提取DNA用50μl的注射用水溶解，－20℃冷凍。

1.2 儀器設(shè)備 PCR擴(kuò)增儀（PTC－200，USA），凝膠成像（Alpha），電泳裝置（北京六一儀器廠）。

1.3 試劑 長春博德生物公司血小板抗原（HPA）基因分型試劑，Taq酶購自大連寶生物。

1.4 PCR擴(kuò)增 將待檢測樣本DNA溶解，按說明書操作，每個(gè)PCR反應(yīng)體積為10μl，包括1 μlDNA，8μl PCR－buffer。PCR反應(yīng)體積10μl。按94℃，3min；94℃，30s、61℃，30s、72℃，50s；30個(gè)循環(huán)后72℃，5min；4℃循環(huán)參數(shù)擴(kuò)增。

1.5 PCR產(chǎn)物檢測 擴(kuò)增結(jié)束后取PCR產(chǎn)物在2%的瓊脂糖內(nèi)電泳30min，結(jié)束電泳記錄結(jié)果。內(nèi)對照產(chǎn)物長度429bp。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)果判定 根據(jù)有無PCR產(chǎn)物和產(chǎn)物大小是否和預(yù)計(jì)產(chǎn)物大小一致片段判斷是否有血小板特異性產(chǎn)物。有特異性片段斷定有特異性抗原，反之沒有特異性抗原。

2.2 基因分型結(jié)果 長沙地區(qū)漢族618名血小板獻(xiàn)血者血小板抗原基因檢測結(jié)果是HPA－1aa 609人，HPA－1ab 9 人；HPA－2aa 578 人，HPA－ab 40人；HPA－3aa 208 人，HPA－3ab309 人，HPA－3bb 101人；HPA－4aa 608人，HPA－4ab 8人；HPA－5aa 605人，HPA－5ab13人；HPA－6aa 605人，HPA－6ab 13人；HPA－15aa 179人，HPA－15ab 304人，HPA－15bb 135人；HPA－7，8，9，10，11，12，13，14，16，17這幾個(gè)系統(tǒng)均未見b基因。

2.3 長沙地區(qū)血小板獻(xiàn)血者HPA基因頻率 618名長沙地區(qū)血小板獻(xiàn)血者的HPA－1a基因頻率為99.3%，HPA－1b基因頻率為0.7%；HPA－2a基因頻率為96.8%，HPA－2b基因頻率為3.2%；HPA－3a基因頻率為58.7%，HPA－3b基因頻率為41.3%；HPA－4a基因頻率為99.4%，HPA－4b基因頻率為0.6%；HPA－5a基因頻率為98.9%，HPA－5b基因頻率為1.1%，HPA－6a基因頻率為98.9%，HPA－6b基因頻率為1.1%，HPA－15a基因頻率為53.6%，HPA－15b 基因頻率為 46.4%，HPA－7a，8a，9a，10a，11a，12a，13a，14a，16a，17a基因頻率為1.00，未發(fā)現(xiàn)b基因。長沙地區(qū)血小板抗原基因頻率和臺(tái)灣、香港、日本國家地區(qū)比較無明顯差異（P＞0.05），與韓國、黑人、白人及荷蘭 HPA－2系統(tǒng)存在差異（P＜0.01），與黑人、白人及荷蘭 HPA－1系統(tǒng)和5系統(tǒng)存在差異（P＜0.01）［3－7］。

表1 長沙地區(qū)血小板抗原基因頻率和其他國家地區(qū)的比較

3 討論

近年來隨著成分輸血在臨床上的不斷推廣和應(yīng)用，血小板輸注治療有了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，特別是在治療以血小板數(shù)量或質(zhì)量異常所致的出血性疾病中起到了重要作用。血小板抗原是用相應(yīng)的同種血小板抗體來鑒定。同種血小板抗體一般由輸血、妊娠或骨髓移植等刺激而產(chǎn)生。約2.5%的妊娠婦女會(huì)產(chǎn)生血小板抗體。在輸血患者中約1.7%帶有血小板抗體，而在多次輸血患者中，約8%產(chǎn)生血小板特異性抗體［8，9］。最常見的抗體是 HPA－1b和5b抗體。這當(dāng)然和相應(yīng)HPA抗原在群體中的分布頻率有關(guān)，如果該HPA抗原不相配合的比例越高，產(chǎn)生抗體的機(jī)會(huì)也高。HPA相合的血液制品要能在臨床需要接受的時(shí)間范圍內(nèi)提供，則需要有大量的已分型的血小板供者。這主要因人種不同而異，對于有相同遺傳背景的同一民族人群而言，一個(gè)2000人的血小板供者庫已經(jīng)足夠［10］。當(dāng)有患者需要輸注血小板時(shí)，只需在醫(yī)院對患者進(jìn)行血小板基因型進(jìn)行檢測，即可在血站尋找與其相匹配的血小板。這樣就可以有效減少由于血小板血型不符而引發(fā)的血小板免疫性減少癥、血小板輸注后紫癜、血小板輸注無效等的發(fā)生。血小板基因分型實(shí)驗(yàn)條件的建立也可以被研究相關(guān)的血小板疾病與血小板基因分型之間的關(guān)系作有益的借鑒，甚至找到有關(guān)疾病的病因。同時(shí)為進(jìn)行人類學(xué)研究和地區(qū)遺傳背景提供資料。

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