肝癌和肝病患者血清甲胎蛋白異質體的檢測及臨床意義

戴亞新，張時良，裴 豪

（無錫市傳染病醫院 檢驗科，江蘇 無錫214005）

原發性肝癌（（primary hepatic cancer，PHC））是我國常見惡性腫瘤之一，惡性度高、病情進展快，治療棘手，療效欠佳，死亡率高［1］，一旦發現往往已屬中、晚期。因此早期診斷對提高患者生存率和生活質量極為重要。甲胎蛋白（AFP）被公認為臨床肝癌診斷血清標志物，但有30%－40%的PHC患者AFP陰性。另外在一些良性肝病中也有不同程度的升高，特別是在高危人群如慢性肝炎和肝硬化患者中有20%－50%的AFP升高者。由于不能有效區分良性肝病和惡性腫瘤，使得很多患者無法得到及時診斷和治療。AFP可分為LCA非結合型（AFPL1、AFP－L2）、LCA 結合型（AFP－L3），其中 AFPL1主要存在于良性肝病中，AFP－L2來自孕婦，AFP－L3為肝癌細胞所特有。本研究采用微量離心柱分離甲胎蛋白異質體（AFP－L3），應用化學發光法對本院78例包括肝癌、肝硬化和慢性肝炎的患者血清進行了檢測，探索AFP－L3檢測的臨床意義，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年12月－2011年3月本院住院和門診患者的病例資料，包括原發性肝癌患者27例（均經臨床、B超、病理檢查確診），診斷符合1999年成都第四屆全國肝癌學術會議修訂的原發性肝癌診斷標準［2］，其中男25例，女2例（年齡30－80歲，平均56歲）；各類慢性肝病患者51例，包括肝硬化20例，慢性肝炎31例，診斷標準符合2000年中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯合修訂的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎診斷標準［3］，其中男36例，女15例（年齡21－77歲，平均54歲）。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 受檢者均于空腹采集靜脈血5 ml，3 000r／min離心分離血清，－20℃保存。

1.2.2 檢測方法 AFP美國雅培公司產品，儀器為雅培I2000化學發光儀，具體步驟嚴格按產品說明書操作，以AFP＞25ng／ml作為AFP異常升高標準。AFP－L3檢測試劑由北京熱景生物技術有限公司提供，AFP－L3的分離采用微量離心柱法，離心柱內裝有耦聯了小扁豆凝集素（LCA）的瓊脂糖，可以特異結合AFP－L3，當血清流過離心柱時，與LCA結合力強的甲胎蛋白異質體就結合于柱中，經過清洗洗去不結合的甲胎蛋白，再經過離心洗脫后獲得AFP－L3，然后應用化學發光法（雅培I2000化學發光儀）檢測 AFP－L3的含量，并計算 AFP－L3占AFP總量的百分比，以美國FDA批準AFP－L3%＞10%作為陽性判斷標準，具體步驟嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3 統計學處理 由SPSS15.0統計軟件分析，檢測數據用均值表示，組間比較采用F檢驗。異常率比較采用卡方檢驗。P＜0.05有統計學差異。

2 結果

2.1 肝癌及慢性肝炎、肝硬化組AFP、AFP－L3（%）檢測結果 見表1。如表1所示肝癌組血清中AFP、AFP－L3（%）明顯高于肝硬化組和慢性肝炎組（P＜0.01）。在慢性肝炎組和肝硬化組，AFP、AFP－L3（%）均無統計學差異（P＞0.05）。

表1 肝癌、肝硬化、慢性肝炎患者血清AFP、AFP－L3／AFP（±s）

表1 肝癌、肝硬化、慢性肝炎患者血清AFP、AFP－L3／AFP（±s）

注：與肝硬化組和慢性肝炎組比較＊＊P＜0.01；與慢性肝炎組比較＊P＞0.05。

組別 n AFP（ng／ml） AFP－L3／AFP（%）慢性肝炎組31 163±264 0.056±0.031肝硬化組 20 76±86＊ 0.070±0.054＊肝癌組 27 568±453＊＊ 0.530±0.577＊＊

2.2 肝癌及慢性肝炎、肝硬化組AFP、AFP－L3（%）異常率 見表2。以AFP－L3（%）＞10%，AFP＞25 ng／ml作為異常升高標準，如表2所示肝癌組AFPL3（%）異常率明顯高于肝硬化組和慢性肝炎組（P＜0.01）。AFP＞25ng／ml作為異常升高標準，肝癌、慢性肝炎、肝硬化組間AFP異常率無統計學差異（P＞0.05）。

表2 肝癌及慢性肝炎、肝硬化患者血清AFP、AFP－L3（%）陽性率比較

2.3 AFP、AFP－L3%的靈敏度、特異度比較 診斷肝細胞癌的靈敏度和特異度AFP分別為78%和43%；AFP－L3%分別為70% 和 90%。AFP－L3（%）、AFP聯合檢測診斷肝細胞癌靈敏度達89%（24／27）。

3 討論

肝病患者極易演化為PHC，因此對PHC的早期診斷的重要性不言而喻。目前臨床肝癌早期診斷的血清學檢測指標主要依賴于AFP，但是其相對的靈敏度和特異性往往給臨床帶來困惑。本研究顯示肝癌患者血清中AFP含量雖然明顯高于肝硬化和肝炎患者，但肝硬化和肝炎患者的AFP也有不同程度的升高。甚至在部分良性肝病中還是存在較高的假陽性，實驗資料顯示，以 AFP＞25ng／ml作為異常升高標準，其靈敏度78%、特異性僅為43%。因此單純依賴AFP來鑒別診斷良惡性肝病存在局限性。

文獻報道甲胎蛋白異質體AFP－L3為肝癌細胞所特有，與肝癌發生密切相關，是作為鑒別良惡性肝病鑒別的指標［4，5］。我們研究發現，肝癌組 AFP－L3（%）明顯高于肝硬化組和慢性肝炎組（P＜0.01），而在慢性肝炎組和肝硬化組中，AFP－L3（%）均無統計學差異（P＞0.05）。以 AFP－L3（%）≥10%為陽性判斷指標，肝癌患者血清AFP－L3（%）的靈敏度為70%，特異度高達90%。聯合檢測診斷靈敏度達89%。以AFP－L3%為診斷指標時，肝癌和慢性肝炎可以得到有效區分。AFP－L3%所得的百分比含量與血清AFP濃度無關。針對AFP低濃度的肝癌患者，加用AFP－L3的檢測，則可彌補診斷的不足。

本研究中，在臨床診斷B超診斷中均為陰性，AFP－L3%為陽性的5例患者，在后期進一步進行CT影像學檢查，其中2例確診肝癌。因此認為良性肝病患者中 AFP－L3（%）異常升高（＞10%）者，AFP－L3%的陽性結果起到了重要的預警作用。目前，還沒有一種指標能診斷全部PHC，因此在血清標志物檢測的同時還必須結合臨床及影像學檢查，綜合判斷，以免漏診。

［1］湯 釗.現代腫瘤學［M］.第2版，上海：上海醫科大學出版社，2001.553.

［2］中國抗癌協會肝癌專業委員會.原發性肝癌診斷標準［J］.中華肝臟病雜志，2000，8（3）：135.

［3］中華醫學會.病毒性肝炎防治方案［J］.中華肝臟病雜志，2000，8：324.

［4］Yamashita F，Tanaka M，Satomura S，et al.Prognosticsignificance of LensculinarisagglutininA2reactivealpha2fetoproteininsmallhepatoc ellularcarcinoma［J］.Gastroenterology，1996，111：996.

［5］青柳璺.腫瘤標志物的臨床診斷意義及展望－甲胎蛋白（AFP）L3組分［J］.日本醫學介紹，2005，26：49.