34βE12、CK5/6、p63、SMA 在乳腺增生、不典型增生與原位癌鑒別診斷中的價值

劉國新 馬 沛 易建華

乳腺導管內增生性病變(IDPL)是一類常見的危害女性健康的病變，乳腺非典型增生和早期原位癌的鑒別對于臨床治療方案的選擇具有提示意義，對乳腺非典型增生與早期原位癌，采用蘇木精-伊紅(HE)染色很難鑒別，需要采用免疫組化(IHC)染色才能鑒別。本研究采用免疫組化方法，檢測34βE12、CK5/6、p63、SMA在乳腺增生、不典型增生及原位癌組織中的表達情況，探討其在乳腺良惡性病變鑒別診斷中的價值。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2008年～2011年湖北鄖縣婦幼保健院及外院收治并確診的30例乳腺普通型增生(UDH)、30例非典型導管增生(ADH)、20例導管原位癌(DCIS)和20例浸潤性導管癌(IDC)。抗34βE12、CK5/6、p63 和SMA單克隆抗體及試劑盒均購自福州邁新生物技術公司產品。

1.2 免疫組織化學染色

采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶(SP)法進行免疫組織化學檢測，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代一抗作為陰性對照，已知陽性的乳腺組織切片作為陽性對照，操作步驟按SP試劑盒說明書進行。

1.3 陽性判定標準

鏡下觀察切片中陽性著色強度及陽性細胞比例，按許良中等評分標準［1］進行綜合判定。每張切片陽性細胞著色強度評分按無著色、黃色、棕黃色和棕褐色分別記為0、1、2、3分;陽性細胞數＜5%、5%～25%、26%～50%和＞50%，分別記為0、1、2和3分。根據上述2項指標的乘積將最后結果分為4級:0～1分為(－);2～4分為(+);5～7分為(++);≥8分為(+++)，其中(+)～(+++)為陽性表達。

1.4 統計學處理

采用χ2檢驗，P＜0.05具有統計學意義。

2 結果

2.1 34βE12 表達

34βE12陽性顆粒分布于乳腺上皮細胞胞質中，UDH組30例34βE12均呈陽性表達，均為(++)～(+++);ADH組30例34βE12均呈陽性表達，多為(++)～(+++);DCIS組20例中6例34βE12呈陽性表達，多為(+)，較UDH組及ADH組明顯下降(P＜0.05);IDS組20例中4例34βE12呈陽性表達，均為(+)，與UDH組及ADH組比較差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 CK5/6 表達

CK5/6陽性顆粒分布于乳腺上皮細胞胞質中，UDH組30例CK5/6均呈陽性表達，多為(++)～(+++);ADH組30例中4例CK5/6呈陽性表達，均為(+)，較UDH組明顯下降(P＜0.05);DCIS組20例中3例CK5/6呈陽性表達，均為(+);IDS組20例中1例CK5/6呈陽性表達，為(+)，見表1。

表1 34βE12、CK5/6、p63、SMA 在乳腺良惡性病變中的表達情況

2.3 p63 表達

p63陽性顆粒分布于肌上皮細胞的胞核，UDH組30例P63均呈陽性表達，多為(++)～(+++);ADH組30例p63均呈陽性表達，多為(+)～(++)，與UDH組比較差異有統計學意義(P＜0.05);DCIS組20例p63均呈陽性表達，多為(+)，與UDH組及ADH組比較差異有統計學意義(P均＜0.05);IDS組20例p63均呈陰性表達，與UDH組、ADH及DCIS組比較明顯下降(P＜0.05)，見表1。

2.4 SMA 表達

SMA陽性顆粒分布于肌上皮細胞的胞質中，UDH組30例SMA均呈陽性表達，多為(++)～(+++);ADH組30例SMA均呈陽性表達，多為(+)～(++)，與 UDH組比較差異有統計學意義(P＜0.05);DCIS組20例SMA均呈陽性表達，多為(+)～(++)，與 UDH組比較差異有統計學意義(P＜0.05);IDS組20例中2例 SMA呈陽性表達，且為(+)，較UDH組、ADH組及 DCIS組明顯減少(P＜0.05)，見表1。

3 討論

乳腺增生、不典型增生及原位癌一直是鑒別診斷中的難點，大部分病例通過形態學能夠鑒別，但仍有部分病例需要通過免疫組織化學檢查進一步明確診斷。

34βE12是由細胞角蛋白1、5、10和14按一定比例混合而成的高分子量細胞角蛋白組合。本實驗結果顯示其在 UDH、ADH中均呈中-高強度著色，而在DCIS、IDC 中大部分呈陰性表達，這與 Lacroix-Triki［2］的研究一致。由此可見，34βE12可作為乳腺病變鑒別診斷中的標記物，上皮細胞34βE12表達缺失時高度提示為癌;大量上皮細胞表達34βE12，且為細胞膜強陽性時，則應多考慮為良性病變。

CK5/6是1種基底細胞的標記物，在正常組織中，鱗狀上皮和導管上皮的基底細胞以及部分鱗狀上皮生發層細胞、肌上皮細胞和間皮細胞呈陽性表達。本組資料中顯示，除了基底層細胞呈陽性外，腺腔內部分細胞也呈陽性，ADH中間型細胞則減少，表現為腺腔內表達CK5/6的細胞減少。在部分腫瘤性病變的導管中心可見一些梭形小細胞呈CK5/6陽性表達，考慮為殘存的導管上皮細胞，而不是腫瘤細胞［3］。CK5/6在UDH中均為陽性表達，這與Rabban［4］的研究結果一致。而在ADH、DCIS及IDS中大部分呈陰性表達，說明在普通型增生和腫瘤增生性組織中CK5/6表達存在明顯差異。

p63基因位于染色體3q27片段，與p53屬同源基因，均為腫瘤抑制基因［5，6］，有文獻［7］表明它是所有肌上皮抗體中唯一標記核陽性的，在血管平滑肌和肌纖維母細胞等間質細胞中不表達，在良性病變中接近100%的陽性表達。本組研究顯示，在UDH、ADH及DCIS組織中p63均呈陽性表達，而在IDS組織中均呈陰性表達，由此認為p63是乳腺肌上皮較好的標記物，有較強的特異性和敏感性，對乳腺病變的診斷起到很好的輔助作用。

SMA是1種標記平滑肌的肌動蛋白，可以與平滑肌肌動蛋白α異構體反應，本組實驗顯示SMA在UDH、ADH及部分DCIS的腺上皮周圍呈明顯的彌漫陽性著色，而在IDC中未見明顯陽性表達，但SMA同時也在間質肌纖維母細胞和血管平滑肌細胞中表達。盡管這可以作為很好的內對照，但也是SMA抗體的缺點，它易出現背景染色，影響診斷。所以認為SMA是1種敏感性較好但特異性較差的標記物。

綜上所述，我們在實際工作中最好聯合運用34βE12、CK5/6、p63、SMA 這4 種抗體，同時一定要以光鏡下形態學的觀察為基礎，這樣才能明確診斷，為臨床提供可靠的診療依據。

［1］許良中，楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準〔J〕.中國癌癥雜志，1996，6(4):229.

［2］Lacroix-Triki M，Mery E，Vaigt JJ，et al.Value of cytokeratin 5/6 immunostaining using D5/6 B4 antibody in the spectrum of proliferative intraepithelial lesions of the breast:a comparative study with 34βE12 antibody〔J〕.Virchows Arch，2003，442:548.

［3］Otterbach F，Bankfalvi A，Bergner S，et al.Cytokeration5/6 immunohistochemistry assists the differential diagnosis of atypical proliferations of the brest〔J〕.Histopathology，2000，37(3):232.

［4］Rabban JT，Koemer FC，Lerwill MF.Solid papillary ductal carcinoma in situ versus cytokeratin 5/6〔J〕.Hum Pathol，2006，37(7):787.

［5］Strano S，Rossi M，Fontemaggi G，et al.From P63 to P53 across P73〔J〕.FEBS Lett，2001，490(3):163.

［6］Barbareschi M，Pecciarini L，Cangi MG，et al.P63，a P53 homologue，is a selective nuclear marker of myoepithelial cells of the human breast〔J〕.Am J Surg Pathol，2001，25(8):1054.

［7］Tse GM，Tan PH，Moriya T.The role of immunohistochemistry in the differential diagnosis of papillary lesions of the breast〔J〕.J Clin Pathol，2009，62(5):407.