泰山盤石散對米非司酮誘導小鼠流產的保胎效果

耿梅英，苑方重，鐘秀會

（河北農業大學中獸醫學院，河北 保定071001）

正常的妊娠期間母體和胎兒的共同作用包含了復雜的免疫機制。自然條件下，胚胎著床失敗是由于母體免疫反應引起的早期胚胎丟失，以及反復自然流產（recurrent spontaneous abortion，RSA）等引起的妊娠終止在所有的妊娠失敗中占據很大的比例。

中醫稱流產為胎漏、胎動不安和滑胎，針對這種癥狀的治療原則是保胎。自《神農本草經》首載桑寄生、阿膠、白膠、黑雌雞為安胎藥［1］，后經不斷發展，中醫對安胎藥物的使用已經較為成熟。此外，中醫在治療胎動不安時還從不同的臟腑論治，認為流產多因脾腎虧損、沖任不固、氣血兩虛所致。根據這種理論，不少研究者認為對流產治療應采取補脾腎、固沖任、調氣血，從而有利于保胎［2－3］，并分別提出補腎保胎、升陽舉陷，補脾安胎、清肝固元等治療措施，并取得了較好的效果。

《中華人民共和國獸藥典》二部收載了有氣血雙補作用的方劑－泰山盤石散。泰山盤石散方中包含黨參 、黃芪、當歸等多味中藥。該方劑在臨床多年應用，具有很好的保胎效果。但是，如何從現代醫學角度認識該方劑的保胎作用，研究資料尚屬少見。

本試驗選擇泰山盤石散預處理試驗小鼠，觀察泰山盤石散對米非司酮誘導流產作用的抑制效果，探討試驗中選用中藥方劑的保胎作用及可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級昆明種9周齡未經產仔母鼠和10周齡公鼠，雌鼠體重23～30g，雄鼠體重30～35g。購自河北省實驗動物中心。常規飼養，自由采食和飲水。

1.2 試驗藥品與試劑 米非司酮（RU486），由美國Sigma公司生產。泰山盤石散由黨參30g，黃芪30 g，當歸30g，續斷30g，黃芩30g，川芎15g，白芍30g，熟地黃45g，白術30g，砂仁15g，甘草（炙）12 g組成。

1.3 動物分組 將懷孕小鼠隨機分為3組（見表1）。

表1 試驗動物分組和處理

1.4 胚胎吸收率（死亡率）和流產率計算 孕鼠均于孕8d頸椎脫臼處死小鼠，打開腹腔，暴露子宮，觀察子宮生長情況，記錄胚胎著床數及流產數。取一側子宮用Bouin氏液固定作石蠟切片用。

按下列公式計算試驗各組的胚胎吸收率、流產率：

胚胎吸收率＝被吸收的胚胎數/（被吸收的胚胎數＋正常胚胎數）×100%；

流產率＝發生流產的母鼠數/試驗組母鼠總數×100%。

2 結果

2.1 泰山盤石散的保胎作用 A組10只孕鼠在孕8d剖殺，有2只流產，自然流產率為20%，剖檢看見，胚胎正常或基本正常，僅有部分胚胎死亡、吸收變小。B組10只孕鼠在孕8d剖殺，有4只死胎全部排出，子宮內已無胎兒，其余6只母鼠子宮內胎兒已全部死亡，大部分胚胎已吸收，呈紫黑色，胚胎間或有血凝塊，子宮宮腔膨大，壁明顯增厚，子宮長度明顯縮短，流產率為100%。C組10只孕鼠在孕8 d剖殺。有5只發生流產，流產率為50%。發生流產的各組動物在剖檢時可見，子宮系膜充血嚴重，胚胎基本正常，子宮腔偶然看見血凝塊。

試驗結果表明，中藥方劑泰山盤石散（C組）能有效對抗RU486誘導的小鼠流產盡管保胎效果還沒有達到正常水平（A組，自然流產率20%），與正常對照組比較，差異極顯著（P＜0.01），而胚胎吸收率也相對較高，但與單純使用米非司酮處理的對照（B組）相比較，試驗動物的流產率從100%下降到50%，胚胎吸收率也出現顯著下降，見表2。

表2 不同處理組的妊娠

2.2 試驗小鼠子宮組織學變化 H.E.染色后組織學觀察，正常妊娠小鼠子宮組織切片可見子宮內膜蛻膜化，間質蛻膜化，內膜增厚，黏膜上皮完整，腺體發達，可見大片蛻膜組織，蛻膜細胞散在排列，形態不規則，蛻膜細胞核仁明顯，局部有充血，有少量淋巴細胞聚集，間質疏松，有散在的不規則排列的膠原纖維，但無出血、壞死、脫落等（見中插彩版圖1）。

RU486誘導流產小鼠子宮內膜發育與對照組相比有較大變化，主要表現為子宮內膜發育不良，部分子宮內膜可見腺體與間質發育不同步，間質細胞部分蛻膜樣變，可見炎性細胞浸潤，蛻膜組織呈小灶性變性、壞死，少數細胞核固縮、破碎，細胞質不均勻及空泡變性，但正常組織細胞結構仍存在，腺體小，數目少，分泌不足，呈單層立方上皮，腺腔輕度擴張，間質緊密，間質內血竇少，血管擴張不明顯（見中插彩版圖2）。泰山盤石散組，子宮組織完整程度介于正常對照組和RU486組之間，受損子宮內膜結構得到不同程度的修復（見中插彩版圖3）。

3 討論

本試驗中，利用RU486復制流產模型，用以檢測中藥方劑的保胎效果。試驗中，在孕7d各頸部注射RU486 0.1mL/只（0.025μg）以后，試驗模型組小鼠的流產率達到了100%，而同期對照組的小鼠的自然流產率僅為20%，兩者之間存在著顯著的差異，同時也證明使用RU486復制小鼠的流產模型是成功的。

相關資料報道，哺乳動物著床后的胚胎很容易發生死亡，大約有40%～60%不能發育到正常分娩，其中早期胚胎丟失約占67%，這在人和家畜均如此［4］，甚至同一母體出現2次或2次以上的反復自然流產（RSA）［5］，是一種非常常見的現象，它可以引起懷孕早期的胚胎丟失。中醫稱流產為胎漏、胎動不安和滑胎，針對這種癥狀的治療原則是保胎。

在使用RU486成功復制出小鼠的流產模型后，本試驗使用中藥方劑泰山盤石散，拮抗RU486的流產作用，探討常用保胎中藥方劑的臨床作用，并探明其可能的保胎機制。

本試驗結果顯示，中藥方劑泰山盤石散能有效對抗RU486誘導的小鼠流產。在應用中藥后，試驗動物模型的流產率從100%下降到50%，與單純使用米非司酮處理的流產模型（B組）差異極顯著（P＜0.01），胚胎吸收率也出現顯著下降，由B組的48.57%下降到5.08%，與B組比較，差異極顯著（P＜0.01）；但應用藥物預處理組的中藥保胎效果還沒有達到正常的妊娠成功率水平（A組，自然流產率20%），與正常對照組比較，差異極顯著（P＜0.01），而胚胎吸收率也相對較高，與A組對比，差異極顯著 （C組，P＜0.01）。

結果證實，泰山盤石散有顯著的保胎效果，可以有效提高懷孕小鼠的妊娠成功率，對使用流產藥物引起的小鼠流產也有一定的抑制和拮抗作用。

［1］ 張承烈.安胎中藥研究進展［J］.浙江中醫學院學報，2001，25（4）：67－68.

［2］ 王漢章.石菖蒲性味功效及主治今昔考［J］.江西中醫學院學報，1997，9（2）：12.

［3］ 鐘秀會，周占祥，孫秉貴，等.黃芩白術對LPS誘導流產小鼠的保胎作用及子宮內TNF－α含量的影響［J］.畜牧獸醫學報，2000，31（5）：430－435.

［4］ López－Gatius F，Almería S，Donofrio G，etal.Protection against abortion linked to gamma interferon production in pregnant dairy cows naturally infected with Neospora caninum ［J］.Theriogenology，2007（68）：1067－1073.

［5］ Dowdell K C，Cua D J，Kirkman E，etal.NK cells regulate CD4responses prior to antigen encounter［J］.J Immunology，2003，171（1）：234－239.