草分枝桿菌對豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體水平的影響

劉安石，鐘蘭蘭，楊 亞，劉進輝

（湖南農業大學動物醫學院，湖南 長沙410128）

草分枝桿菌屬分枝桿菌類的一種非病源性細菌，是抗酸分枝桿菌中的一種。草分枝桿菌對動物機體的體液免疫作用，主要是通過增強Th細胞活性，促使Th細胞分泌B細胞生長因子（BCGF）以及B細胞分化因子（BCDF），從而刺激B細胞進入增殖、分化階段，最終促進特異性抗體形成［1］。

豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS），是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的以母豬妊娠后期發生流產、死產和木乃伊胎，新生仔豬死亡率高，各年齡豬（尤其是仔豬）出現異常呼吸為特征的傳染性繁殖障礙疾病。臨床癥狀主要表現為母豬發熱、厭食、流產或死胎、木乃伊胎，仔豬常出現呼吸道系統癥狀和高死亡率［2－4］。由于PRRSV 的基因型與血清型眾多，毒株間交互免疫力差［5－7］。且豬繁殖與呼吸綜合征在流行病學上出現了一些新的特點，危害程度仍呈上升趨勢，已成為規模化豬場繁殖障礙的主要疫病之一，給我國養豬業造成巨大經濟損失。目前，對該病尚無特效的治療方法，疫苗免疫仍是其主要防控手段。但鑒于目前市場上豬繁殖與呼吸綜合征疫苗種類較多且質量良莠不齊，豬場疫情錯綜復雜，以及豬群存在嚴重的免疫抑制等因素，從而使得豬繁殖與呼吸綜合征的免疫效果差異性很大，且常常出現嚴重的免疫應激和免疫失敗。因此，探索解決豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的免疫問題具有十分重要的臨床意義和經濟價值。

1 材料與方法

試驗材料

1.1.1 試驗藥物與疫苗 草分枝桿菌（滅活粉劑）：500g/包，湖南某公司生產。

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗：JXA1－R株，每頭份病毒含量≥105.0TCID50，某疫苗生產廠家生產。

1.1.2 主要儀器設備 豬繁殖與呼吸綜合征ELISA抗體檢測試劑盒：武漢科前動物生物制品有限責任公司生產。

酶標儀：9602G，北京艾普生物設備有限公司生產。

數控搖床振蕩器：DSR－10，江蘇康健醫療用品有限公司生產。

1.1.3 試驗動物 從湖南某豬場通過IDEXX的ELISA和PCR/RT－PCR兩種方法進行血清學檢測未感染PRRSV的20頭30日齡的健康斷奶仔豬。

試驗方法

1.2.1 試驗分組與設計 將20頭試驗仔豬隨機分為4組，1個對照組和3個試驗組，試驗組分別為試驗組Ⅰ、試驗組Ⅱ和試驗組Ⅲ，每組5頭。對照組正常飼喂，3個試驗組分別于飼料中添加0.1%、0.2%和0.5%草分枝桿菌，連續喂料1周后，4個組均肌肉接種豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗1頭份，3個試驗組在疫苗免疫后7d內繼續飼喂拌有草分枝桿菌的飼料。免疫的前1天和免疫后的第14、21、28天和第35天測其抗體。

1.2.2 動物免疫接種 在試驗仔豬耳后頸部外側肌肉注射高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗，免疫劑量為1mL/頭。

1.2.3 血清抗體檢測 免疫的前1天和免疫后的第14、21、28天和第35天，對所有試驗仔豬進行前腔靜脈采血5mL，置于離心機中以1 500r/min離心5min，取血清，冷藏保存備用。將分離的血清用豬繁殖與呼吸綜合征ELISA抗體檢測試劑盒檢測抗體的OD630nm值。

1.2.4 數據處理 將試驗數據詳細的記錄整理，并進行統計學分析處理。

2 試驗結果與分析

各組試驗仔豬的血清抗體OD630nm值檢測結果見表1。

由表1可知，試驗豬只在免疫前都具有一定量的母源抗體，但OD630nm值很低，起不到任何保護作用，所以此時注射豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗具有重要意義。

表1 各組試驗仔豬的血清抗體OD630nm值檢測

從免疫后的第14天、第21天所測得的抗體OD630nm值來看，試驗組和對照組豬只的抗體水平在逐步上升，但所有試驗豬只的OD630nm值都小于0.38，表明還沒有產生具有保護作用的抗體。但從表1中數據可以發現，免疫后的14d內3個試驗組與對照組之間的OD630nm值沒有明顯的差別（P＞0.05）。免疫后的第21天，試驗組Ⅱ、試驗組Ⅲ相對于試驗組Ⅰ和對照組其OD630nm值具有顯著差異（P＜0.05）；但試驗組Ⅱ、試驗組Ⅲ相比之間，試驗組Ⅰ和對照組之間差異不顯著（P＞0.05）。試驗結果表明，在仔豬飼料中添加0.2%以上的草分枝桿菌在豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后的第21天可以起到明顯的提高抗體OD630nm值的作用。

從本次試驗結果來看，對照組豬只在豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后的第28天，產生有效保護抗體的仔豬比率為40%左右，免疫后35d，產生有效保護抗體的仔豬比率為60%，其他的40%為可疑。而第28天3個試驗組的抗體OD630nm值，試驗組Ⅰ陽性60%，陰性40%；試驗組Ⅱ陽性80%，可疑20%；試驗組Ⅲ陽性80%，陰性20%。35d的抗體OD630nm值，試驗組Ⅰ陽性80%，可疑20%；試驗組Ⅱ和試驗組Ⅲ的陽性均為100%。試驗結果表明，在仔豬免疫的前后21d于飼料中添加草分枝桿菌均可有效的提高豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗的抗體效價，與對照組相比差異極顯著（P＜0.01），添加0.2%和0.5%草分枝桿菌比添加0.1%的草分枝桿菌效果更好，且差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

滅活的草分枝桿菌主要通過影響免疫應答反應而調節機體免疫功能。草分枝桿菌可以增強Th細胞活性，促使Th細胞分泌B細胞生長因子（BCGF）以及B細胞分化因子（BCDF），從而刺激B細胞進入增殖、分化階段，最終促進特異性抗體形成。臨床藥理作用表明，使用本品后血清IgG，IgM滴度增高。持久的介入機體的免疫過程，不斷的調節細胞免疫及體液免疫系統［8］。草分枝桿菌能顯著增強特異性細胞免疫功能，促進淋巴細胞轉化、增殖，促進白細胞介素2（IL－2）、白細胞介素4（IL－4）、腫瘤壞死因子（TNF）、γ－干擾素（IFN－γ）等各種細胞因子的產生還可顯著增強NK細胞活性。臨床藥理試驗證明，用藥后 T3，T4，T8，T4/T8均有明顯增加。草分枝桿菌對巨噬細胞的作用也十分明顯，主要表現為草分枝桿菌能刺激T淋巴細胞，使之釋放巨噬細胞凝集因子（MAF）、巨噬細胞移動抑制因子（MIF）、巨噬細胞趨化因子（MCF）、促有絲分裂因子（MMF）等，對單核－巨噬細胞功能和代謝等各方面都有促進作用，還可以促進單核－巨噬細胞釋放大量O2－，這與殺滅病原體及腫瘤細胞有關。草分枝桿菌尚可誘導內皮細胞和單核－巨噬細胞產生CSF，促進骨髓多能干細胞和脾粒細胞及巨噬細胞的前體增殖。從表1可以看出，隨著草分枝桿菌在仔豬飼料中添加量的增加，豬群的抗體OD630nm也隨之增加。這說明給仔豬喂食拌有草分枝桿菌的飼料后，豬體內的抗體水平有明顯升高。通過本次試驗可以看出，在豬飼料中添加0.2%以上的草分枝桿菌能夠提高豬藍耳病疫苗免疫的抗體水平，以提高其免疫效果。

［1］ 鐘小婭，黃定蒙.草分枝桿菌對尖銳濕疣患者Th1/Th2免疫平衡的調節作用［J］.中國藥師雜志，2006，13（4）：19－21.

［2］ 黃驪，郭萬柱.豬生殖與呼吸綜合征綜述［J］.四川畜牧獸醫，1999，3：17－18.

［3］ 孫世琪，靳野，郭慧琛，等.我國近期高致病性藍耳病分子流行病學動態［J］.動物醫學進展，2004，25（7）：69－71.

［4］ 王珍芹，曲志娜.豬繁殖與呼吸綜合征免疫預防進展［J］.中國動物檢疫，2005，22（12）：37.

［5］ 徐引弟，宋念華，張厚芝，等.豬生殖和呼吸系統綜合征的血清學調查［J］.中國獸醫科技，2003，33（1）：25－27.

［6］ 楊小燕，李曉華，沈紹新，等.豬繁殖與呼吸綜合征的血清學調查［J］.中國獸醫雜志，2001，37（4）17－22.

［7］ 王君瑋，徐天剛，吳延功，等.山東部分地區豬繁殖與呼吸綜合征的血清流行病學調查［J］.畜牧與獸醫，2004，3（6）：32－35.

［8］ 程相鐸，雍磊，梅海豫.草分枝桿菌注射液輔助治療支氣管哮喘［J］.實用醫藥雜志，2009，26（2）：132－135.