大鼠不同部位微動脈對U46619收縮反應的差異

阮耀祥，黃瑩潔，侯曉敏，牛龍剛，劉 宇，張明升

血栓素A2（TXA2）主要由血小板中的前列腺素 H2在TXA2合酶作用下生成，有促進血小板聚集和收縮血管平滑肌作用，參與多種心血管疾病及腎臟疾病的發生［1］。TXA2收縮血管平滑肌的機制為：激活環核苷酸門控通道引起細胞內鈣增加［2］以及激活 TXA2受體和磷 脂酶 C［3］。Kaye等［4］發現格列苯脲阻斷ATP敏感的鉀通道可減弱血栓素A2受體激動劑U46619的收縮反應。相關研究表明，妊娠大鼠腸系膜動脈和子宮動脈對TXA2的收縮反應降低［5］；雌二醇增強離體肺血管對U46619的收縮反應［6］。迄今鮮見U46619對不同臟器微動脈收縮反應差異的比較性研究及其與內皮的關系。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 單硝基精氨酸甲酯（L-NAME）、U46619和吲哚美辛（Indomethacin）購自Sigma公司，HEPES購自AMRESCO公司，其余試劑（分析純）購自天津大茂化學試劑廠。

1.2 實驗儀器 Multi Wire Myograph System（丹麥DMT），PowerLab Chart（澳大利亞埃德儀器），恒溫水浴鍋（成都泰盟），精密pH計（上海精科實業），分析天平（Sartorius公司）。

1.3 實驗動物 3月齡雄性Sprague-Dawley大鼠（220g～250 g），由山西醫科大學實驗動物中心提供，許可證編號：SCXK（晉）2009～0001。

1.4 離體動脈環的制備 大鼠斷頭處死，立即取出心臟、腦組織、腎臟、肺臟、腸系膜放入盛有4℃臺式液的平皿中。去除血管周圍組織，迅速顯微分離出腎內動脈、肺內動脈、冠狀動脈、大腦中動脈和腸系膜動脈。分離時細心，動作輕巧，防止損傷血管，注意保護血管內皮，剪成3mm長的動脈環并用鋼絲固定于DMT的傳感器上。

1.5 基本實驗流程 浴槽內盛5mL臺氏液，持續通氧，維持液溫在37℃，每20min換液，平穩60min后用KCl（60mmol／L）收縮動脈環，當收縮值＞1mN且連續兩次相同刺激的收縮值差異小于10%時表明血管活性好，開始正式實驗。以KCl收縮值為100%，計算不同狀態U46619的收縮百分率（U46619的收縮值／KCl的收縮值×100%）。

1.6 統計學處理 用PowerLab Chart采集，并計算收縮百分率，實驗結果以均數±標準差（x±s）表示。應用SPSS 13.0分析，Sigmaplot10.0作圖。U46619收縮的內皮機制采用t檢驗，U46619收縮組織的差異性采用單因素方差分析。

2 結 果

2.1 靜息狀態下U46619對大鼠微動脈的收縮作用 U46619對五種微動脈均能發現明顯的收縮反應。U46619對微動脈的收縮作用由強到弱依次為：腎內動脈（IRA）、大腦中動脈（CMCA）、肺內動脈（IPA）、冠脈（CA）、腸系膜動脈（MCA）。U46619的收縮能力具有明顯的血管源差異性，詳見表1。

表1 U46619收縮大鼠五種動脈環作用的組織差異性（x±s）

2.2 一氧化氮合酶（NOS）在U46619收縮微動脈中的作用浴槽內加入NOS抑制劑L-NAME增強U46619收縮冠脈、大腦中動脈、腎內動脈和肺內動脈的作用（n=6）。詳見圖1。

圖1 L-NAME對U46619收縮大鼠動脈環作用的影響

2.3 環氧合酶（COX）在U46619收縮微動脈中的作用 浴槽內加入非選擇性COX抑制劑吲哚美辛阻斷COX途徑下游產物的生成，僅減弱U46619收縮腎內動脈和腸系膜動脈的作用。詳見圖2。

圖2 Indomethacin對U46619收縮大鼠動脈環的影響

3 討 論

本實驗觀察了TXA2受體激動劑U46619對不同組織來源的微動脈收縮作用，并探討了U46619反應的微血管異質性及其與NO和前列腺素類物質產生的關系。結果表明，U46619明顯收縮靜息狀態下的腎內動脈和大腦中動脈，而輕微收縮腸系膜動脈，提示微動脈環核苷酸門控通道的敏感性和（或）TXA2受體、磷脂酶C的表達存在組織間差異。

內皮在調節血管張力方面發揮重要作用，主要途徑為：合成和釋放內皮源性的舒張因子如NO、前列環素（PGI2），參與激活毒蕈堿型受體誘導的舒張效應。血管內皮細胞釋放的NO作用于血管平滑肌細胞，激活可溶性鳥苷酸環化酶（sGC），進而增加胞內環鳥苷酸（cGMP）的濃度，導致細胞內Ca2＋濃度或敏感性降低，引起血管舒張［7］。花生四烯酸在環氧合酶作用下產生PGI2、TXA2、前列腺素E2等物質［8］，TXA2具有較強的血管收縮作用。本研究表明，L-NAME預孵顯著增強提高冠脈、大腦中動脈、腎動脈和肺動脈對U46619的收縮反應，提示在這些微動脈中NO-sGC-cGMP活性較高；預孵吲哚美辛只減弱腎動脈和腸系膜動脈對U46619的收縮反應，提示COX途徑（促進TXA2的合成和釋放）參與了TXA2所致的腎動脈和腸系膜動脈的收縮。

不同部位微動脈對U46619的收縮反應存在血管異質性，這可能與NO和前列腺素類物質的產生能力不同有關。

［1］ Sakariassen KS，Alberts P，Fontana P，et al.Effect of pharmaceutical interventions targeting thromboxane receptors and thromboxane synthase in cardiovascular and renal diseases［J］.Future Cardiol，2009，5（5）：479-493.

［2］ Leung YK，Du J，Huang Y，et al.Cyclic nucleotide-gated channels contribute to thromboxane A2-induced contraction of rat small mesenteric arteries［J］.Plo Sone，2010，5（6）：e11098.

［3］ Feng J，Liu Y，Chu LM，et al.Thromboxane-induced contractile response of human coronary arterioles is diminished after cardioplegic arrest［J］.Ann Thorac Surg，2011，92（3）：829-836.

［4］ Kaye AD，Nossaman BD，Santiago JA，et al.Differential effects of glibenclamide on responses to thromboxane A2mimic，U46619，in the pulmonary and hindquarters vascular beds of the cat［J］.Eur Pharmacol，1997，340（2-3）：187-193.

［5］ Goulopoulou S，Hannan JL，Matsumoto T，et al.Pregnancy reduces RhoA／Rho kinase and protein kinase C signaling pathways downstream of thromboxane receptor activation in the rat uterine artery［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2012，302（12）：H2477-H2488.

［6］ Farhat MY，Ramwell PW，et al.Estradiol potentiates the vasopressor response of the isolated perfused rat lung to the thromboxane mimic U-46619［J］.J Pharmacol EXP Ther，1992，261（2）：686-691.

［7］ 鄺素娟，鄧春玉，張光燕，等.二烯丙基三硫化物對大鼠離體腎內動脈血管張力的影響［J］.中國藥理學通報，2011，27（10）：1409-1413.

［8］ 王勛，羅珊珊，蔣嘉燁，等.鳥苷對大鼠胸主動脈環的舒張作用及機制［J］.中國藥理學通報，2011，27（11）：1540-1543.