高膽固醇血癥對(duì)兔胰島細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響

董澤波，鹿育薩

糖尿病是冠心病的等危癥［1］，且在糖尿病前期，冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)已明顯增高。我國(guó)冠心病患者中合并糖代謝異常者占80%［2］。因此早期發(fā)現(xiàn)血糖異常，早期干預(yù)顯得極為重要。本實(shí)驗(yàn)以幼年期高膽固醇（TC）飲食的新西蘭大白兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)免疫組化觀察胰島B細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，旨在闡明早期高膽固醇飲食對(duì)B細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響，為冠心病患者進(jìn)行糖耐量異常的早期預(yù)防和治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 24只健康2月齡雄性新西蘭白兔，體重（2.0±0.2）kg，采用單籠飼養(yǎng)，自由飲水，購(gòu)自山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所。

1.2 造模與分組 新西蘭大白兔，采用隨機(jī)數(shù)字法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為3組：空白組8只，普通飼料喂養(yǎng)；模型組8只；他汀組8只。空白組給予普通顆粒兔飼料100g／d；模型組給予普通顆粒兔飼料＋1.0%膽固醇［3］；他汀組給予2.5mg／（kg·d）［4］；共喂養(yǎng)8周。

1.3 測(cè)定方法 免疫組化檢測(cè)，顯示棕褐色顆粒者為陽(yáng)性，顯微鏡觀察。計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)胰島素染色陽(yáng)性細(xì)胞的陽(yáng)性程度及胰島素染色陽(yáng)性細(xì)胞面積。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。以單因素方差分析（one way ANOVA）求F值。

2 結(jié) 果

2.1 高膽固醇飼養(yǎng)后血脂情況 各組兔喂養(yǎng)膽固醇之前血清總TC濃度均正常，空白組（1.15±0.08）mmol／L，模型組（1.13±0.06）mmol／L，他汀組（1.17±0.02）mmol／L。8周后模型組血清總TC濃度升高，模型組為（13.74±1.73）mmol／L，空白組為（1.75±0.16）mmol／L，他汀組為（1.78±0.21）mmol／L。模型組與空白組、他汀組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），空白組與他汀組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 高膽固醇血癥對(duì)兔胰島B細(xì)胞免疫組化的影響 胰島B細(xì)胞免疫組化染色后鏡下觀察，空白組HistostainTM-SP法染色后胰島B細(xì)胞為棕褐色的免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞，多位于胰島中央，占據(jù)胰島的絕大部分，排列緊密，細(xì)胞界限清楚，多數(shù)呈圓形或橢圓形，免疫反應(yīng)陽(yáng)性物質(zhì)分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈顆粒狀即胰島素分泌顆粒，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分泌顆粒豐富，界限較清楚，著色深。模型組胰島內(nèi)免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯減少，個(gè)別胰島內(nèi)B細(xì)胞所剩無(wú)幾，僅能辨認(rèn)其輪廓，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分泌顆粒明顯減少甚至缺失，顆粒著色淺，界限模糊，分布不均勻。他汀組與模型組相比，B細(xì)胞數(shù)量較多，界限較清楚，胞質(zhì)內(nèi)免疫反應(yīng)陽(yáng)性顆粒明顯增多，著色較深，比模型組明顯改善。

計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)的定量指標(biāo)監(jiān)測(cè)，兔胰島內(nèi)染色陽(yáng)細(xì)胞漿著棕色顆粒者即為B細(xì)胞。染色陽(yáng)性區(qū)域面積大小代表胰島素表達(dá)量。圖像分析采用Image-pro plus6.0系統(tǒng)。測(cè)量指標(biāo)采用統(tǒng)計(jì)面積（Area）、平均光密度（Density）、累計(jì)光密度IOD（sum）等形態(tài)學(xué)量化指標(biāo)。模型組中陽(yáng)性染色表達(dá)最低，各項(xiàng)指標(biāo)與空白組及他汀組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；他汀組各項(xiàng)指標(biāo)與空白組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表1。

表1 高膽固醇血癥對(duì)兔免疫組化相關(guān)指標(biāo)的影響（x±s）

3 討 論

血脂異常是冠心病的重要易患因素。阿托伐他汀是肝細(xì)胞膽固醇合成中HMG-CoA還原酶抑制劑，能有效降低血低密度脂蛋白膽固醇和升高血高密度脂蛋白膽固醇水平，同時(shí)對(duì)中間密度脂蛋白膽固醇和極低密度脂蛋白膽固醇也有降低作用，能有效治療因各種原因?qū)е碌母叩兔芏戎鞍籽Y和高三酰甘油血癥。在冠心病一級(jí)和二級(jí)預(yù)防中能有效降低冠心病的發(fā)病率和病死、病殘率。除此以外，他汀類藥物還能抑制炎癥和氧化，如降低炎癥指標(biāo)高敏C反應(yīng)蛋白的水平。

糖耐量異常（IGT）是糖尿病的前奏，也稱為“糖尿病前期狀態(tài)”。正常糖耐量是由胰島素分泌和胰島素作用二者相互平衡的結(jié)果。如果胰島素作用減弱或者產(chǎn)生胰島素抵抗，但胰島素分泌功能未降低，糖尿量仍可維持正常水平，糖尿病也不會(huì)產(chǎn)生，因此胰島B細(xì)胞功能和胰島B細(xì)胞數(shù)量之間有著很緊密的關(guān)系。當(dāng)B細(xì)胞的數(shù)量不足以產(chǎn)生足夠的胰島素去對(duì)抗血糖時(shí)，即可出現(xiàn)糖耐量異常，進(jìn)而發(fā)展為糖尿病。

本研究顯示高膽固醇飲食組胰島B細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯增加，經(jīng)阿托伐他汀干預(yù)后，胰島內(nèi)胰島B細(xì)胞凋亡數(shù)量減少，較正常組無(wú)明顯變化。提示高膽固醇對(duì)胰腺組織造成了直接損傷。Stern［5］曾在1995年提出“共同土壤”，即冠心病和糖尿病或血糖增高之間存在著共同的發(fā)病土壤，且目前的研究也已經(jīng)證實(shí)，冠心病患者普遍存在糖耐量異常現(xiàn)象［6］。因此，心血管科醫(yī)師應(yīng)密切關(guān)注冠心病患者的血糖情況，必要時(shí)行OGTT［7］，以減少冠心病患者早期合并糖耐量異常的發(fā)生，提高患者生存質(zhì)量。同時(shí)，在早期應(yīng)用阿托伐他汀穩(wěn)定斑塊的同時(shí)［8］，改善糖耐量異常。

［1］ Expert panel on detection.Eveluation，and treatment of highblood cholesterol in adults.Executive summary of the third report of the National Cholesterol Education Program（NCEP）expert panel on detection，eveluation.and treatment of high blood cholesterol in adults（adult treatment paned Ⅱ）［J］.JAMA，2001，285（19）：2486-2497.

［2］ 中國(guó)心臟調(diào)查組.中國(guó)住院冠心病患者糖代謝異常研究——中國(guó)心臟調(diào)查［J］.中華內(nèi)分泌代謝雜志，2006，22（1）：7-10.

［3］ Austin MA.Epidemiology of hypertriglgceridemia and cardiovascular disease［J］.Am J Cardiol，1999，83（9）：166.

［4］ Mital S，Zhang X，Zhao G，et al.Simvastin upregulates coronary vascular endothelial nitric oxide production in conscious dogs［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2000，279（6）：H2649.

［5］ Stern MP.Diabetes and cardiovascular disease.The“common soil”hypothesis［J］.Diabetes，1995，44（4）：369-374.

［6］ 孟祥云，呂建莊，趙清波，等.冠心病和高血壓住院患者糖代謝異常分析［J］.臨床心血管雜志，2008，24（6）：470-471.

［7］ Bartnik M，Ryden L，Malmberg KO，et al.On behalf of the Euro Heart Survey Investigators.Oral glucose tolerance test is needed for appropriate classification of glucose regulation in patients with coronary artery disease：A report from the Euro Heart Survey on Diabetes and the Heart［J］.Heart，2007，93（1）：72-77.

［8］ 李學(xué)文，趙季紅，姜鐵民，等.應(yīng)用64排螺旋CT評(píng)價(jià)阿托伐他汀對(duì)冠狀動(dòng)脈斑塊的影響［J］.醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2011，32（4）：44.