銀丹心腦通軟膠囊對動脈硬化大鼠斑塊及高敏C反應蛋白的影響

張榮品，李玉芝，張敬雅，高翠華，馮 謹，張敬朋

觀察銀丹心腦通軟膠囊對動脈硬化（AS）大鼠斑塊面積及高敏C反應蛋白含量的影響，探討其抗動脈硬化的作用機制，為臨床合理應用銀丹心腦通軟膠囊預防和治療動脈粥樣硬化性疾病提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物及飼料 雄性ApoE小鼠，C57BL／6J品系，10周齡，體重26g～28g，購自北京大學實驗動物中心。無菌高脂高膽固醇飼料購自中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所，含21%脂肪和0.15%膽固醇。

1.1.2 實驗藥品及試劑 銀丹心腦通軟膠囊：貴州百靈企業(yè)集團制藥股份有限公司；批號：Z19980015。辛伐他?。汉贾菽硸|制藥有限公司；批號H19990366。膽固醇（TC）檢測試劑盒：北京中生北控生物科技股份有限公司；批號010617。三酰甘油（TG）檢測試劑盒：北京中生北控生物科技股份有限公司；批號015626。小鼠高敏C反應蛋白（hs-CRP）ELISA檢測試劑盒：尚柏生物醫(yī)學技術有限公司；批號2B901。戊巴比妥鈉：北京盛旭百川科技有限公司；批號090234。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組及給藥 雄性ApoE小鼠飼養(yǎng)在SPF動物房中。頸動脈套環(huán)實驗前兩周給予高脂高膽固醇飼料（21%脂肪＋0.15%膽固醇）飼養(yǎng)直至實驗結(jié)束。除對照組外，其余各組ApoE小鼠均于實驗初期行頸動脈套管術以誘發(fā)頸動脈粥樣硬化病變。實驗分5組，每組12只，對照組給予普通飼料喂養(yǎng)，其余各組均給予高脂飼料。辛伐他汀于頸動脈套環(huán)術后按人體等效劑量給藥，為9.1mg／kg。銀丹心腦通于頸動脈套環(huán)術后給予，按人體等效劑量的1倍、2倍、4倍給藥。給藥周期為4周。1.2.2 術前準備 將0.3mm內(nèi)徑硅膠管縱向剖開，剪成0.5 cm長的小段，浸泡在95%乙醇中備用。高壓滅菌消毒手術用器械、棉球、手術針線等。

1.2.3 手術過程 ApoE-／-小鼠腹腔注射50mg／kg戊巴比妥鈉，消毒頸部及周圍皮膚，除毛；手術剪剪開皮膚，縱向鈍性分離頸部肌群，分離右頸總動脈，小心將準備好的硅膠管套在右頸總動脈上，并用三根0號線分別結(jié)扎硅膠管的上、中、下端；術畢，將手術部位組織恢復，縫合頸部皮膚。

1.3 動物采血及組織取材 最后一次注射后24h，小鼠摘眼球取血，3 500r／min離心10min，取血清，-80℃凍存待測。手術剪剪開胸腔，暴露心臟，用一次性輸液器針頭刺入左心室，剪開右心房，取右頸總動脈置于10%中性緩沖甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片。

1.4 統(tǒng)計學處理 計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示。應用SPSS 17.0軟件處理，采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），兩組用t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 銀丹心腦通軟膠囊對小鼠血清脂質(zhì)及hs-CRP的影響與對照組相比，模型組可明顯升高血清總膽固醇水平；陽性藥可明顯降低血清總膽固醇水平；銀丹心腦通各組均可以明顯降低血清總膽固醇水平，但各給藥組與對照組相比TG水平?jīng)]有明顯變化。與對照組相比，模型組炎癥因子表達顯著升高；辛伐他汀和銀丹心腦通低、中劑量組對hs-CRP的表達顯著下降（P＜0.05）。詳見表1。

表1 銀丹心腦通軟膠囊對小鼠血清脂質(zhì)及hs-CRP的影響（x±s）

2.2 銀丹心腦通軟膠囊對動脈硬化小鼠斑塊面積的影響 右側(cè)頸動脈套環(huán)6周后，模型對照組小鼠頸動脈出現(xiàn)明顯的動脈粥樣硬化斑塊。銀丹心腦通低劑量組與模型對照組相比，斑塊面積沒有減少，中高劑量組與陽性藥組；模型組與對照組相比均能明顯較小動脈硬化斑塊面積（P＜0.05）。詳見表2。

表2 銀丹心腦通軟膠囊對小鼠斑塊面積的影響（x±s）

3 討 論

動脈粥樣硬化性疾病是嚴重危害人類健康的一大類疾病，被稱為發(fā)達國家的“頭號殺手”，在發(fā)展中國家發(fā)病率也逐年升高。世界衛(wèi)生組織預測，在世界范圍內(nèi)的傳染性疾病病死率得到有效控制之后，到2020年心血管疾病將成為全世界第一死因。AS是多因素疾病，病因復雜，近年來炎癥在其發(fā)生和發(fā)展過程中重要作用越來越被人們關注［1］。

ApoE-／-小鼠是目前研究動脈粥樣硬化性疾病最為常用的動物模型之一，可以通過高脂飲食誘發(fā)小鼠體內(nèi)高膽固醇血癥和動脈粥樣硬化［2］。頸動脈套環(huán)可以在保持內(nèi)皮結(jié)構(gòu)完整性同時快速、定點誘導AS的發(fā)生。高脂飲食飼養(yǎng)與頸動脈套環(huán)相結(jié)合可以促進更多動脈粥樣硬化性斑塊的快速形成，并且所形成的斑塊在斑塊形態(tài)、內(nèi)皮表達形式和發(fā)病機制方面具有與人類斑塊更相似的優(yōu)點。

多項研究顯示，hs-CRP作為目前最可靠的AS炎癥標志物，與斑塊的進展密切相關［3］，hs-CRP對急性冠狀動脈綜合征的預后和對“健康”成人將來冠狀動脈事件具有預報作用［4］。

銀丹心腦通膠囊主要成分有銀杏葉、丹參、燈盞細辛、三七、絞股藍、大蒜、山楂、天然冰片八味苗藥，具有活血化瘀、行氣止痛、消食化滯的功能?，F(xiàn)代藥理研究顯示，具有快速改善心腦血管病引起的相關癥狀，同時又兼顧了對心腦血管病重要危險因子血脂的調(diào)理。本實驗結(jié)果顯示，銀丹心腦通軟膠囊具有抑制動脈硬化斑塊進展的作用，且呈劑量依賴性，其作用的發(fā)揮不僅在于銀丹心腦通能顯著降低血脂，更重要的是它可抑制炎癥因子hs-CRP的釋放，這也為銀丹心腦通軟膠囊的臨床應用提供了實驗依據(jù)。

［1］ Ross R.Atherosclerosis-an inflammatory disease［J］.N EngI J Med，1999，34.115-126.

［2］ Baetta R，Silva F，Comparato C，et al.Perivascular carotid collar placement induces neointima formation and outward arterial remodeling in mice independent of apolipoprotein E deficiency or western-type diet feeding［J］.Atherosclerosis，2007，195：112-124.

［3］ 王衛(wèi)明.C反應蛋白的研究進展［J］.心血管病學進展，2005，26（1）：7.

［4］ 龔瑞瑩，劉明，龐永誠，等.急性冠狀動脈綜合征患者hs-CRP、血脂和膽紅素的臨床研究［J］.中國醫(yī)藥指南，2011，9（24）：275-277.