不穩定型心絞痛患者外周血內皮祖細胞與冠狀動脈狹窄程度的關系＊

南方醫科大學附屬東莞市石龍人民醫院心血管內科（東莞523326）陳杰民 涂 昌 梁逸仙 蘭 軍 陳本發 劉映峰

外周血內皮祖細胞（Endothelial progenitor cells，EPCs）是一種存在于血液循環系統中能夠增殖并分化為成熟內皮細胞的前體細胞，對微血管新生、損傷血管內皮修復和功能維持中有重要的作用。1997年Asahara等發現，在循環外周血中存在一種能分化為血管內皮細胞（ECs）的前體細胞，并將其命名為EPCs［1］。EPCs表面有特異的標記物，如CD34及CD133，是鑒定EPCs的標志。研究表明，EPCs在出生后的機體中作為能特異性聚集于缺血損傷部位并增殖分化為ECs的一群前體細胞，不僅參與了人胚胎血管的生成，同時也參與出生后血管新生和內皮損傷后的修復過程［2］。研究表明，外周血EPCs在穩定性心絞痛患者較正常人有明顯降低，而急性心肌梗死患者在短期內反而增加［3］，但不穩定性心絞痛患者外周血EPCs的水平目前意見尚不統一，我們擬通過研究外周血EPCs的數量同不穩定性心絞痛患者冠狀動脈病變程度的相關性，探討EPCs在不穩定性心絞痛患者中的作用。

對象及方法

1 研究對象 選取2011年3月至2012年8月在我院心血管內科住院確診的，年齡在45～69歲的不穩定性心絞痛患者53例為患者組，診斷符合中華醫學會心血管病學分會制定的標準，入院前1個月內具有典型心絞痛的癥狀、心電圖示缺血性ST段異常改變，且入院實驗室檢查心肌酶及肌鈣蛋白值無異常改變。選擇同期同年齡段行冠脈造影證實無冠狀動脈病變的患者33例為對照組。實驗組及對照組均排除腫瘤、嚴重肝腎功能不全、急性腦血管意外、糖尿病等疾病，入院時未服用血管緊張素轉換酶抑制劑（ACEI）及血管緊張素受體阻斷劑（ARB）類降壓藥及抗凝和調脂藥。

2 研究方法 ①流式細胞儀測定EPCs數量：選擇入院后準備進行冠脈造影的患者，采用EDTA管抽取靜脈血2ml，流式細胞儀檢測外周血CD34及CD133的細胞含量（美國BECKMAN.COULTER公司），CD133流式細胞熒光抗體一抗購于Neomarker公司，二抗購于Southern Biotech公司，CD34流式細胞熒光抗體購于BD公司。取200μl外周血與CD133流式細胞熒光抗體一抗孵育20min，再加入CD133二抗孵育20min，之后加入CD34流式細胞熒光抗體孵育20min。最后將紅細胞溶解，剩余細胞用20g／L多聚甲醛固定，以流式細胞儀進行檢測。CD34和CD133雙陽性細胞為EPCs，計算100000個單個核細胞CD34及CD133陽性細胞數量。②冠狀動脈血管狹窄程度評估：所有患者完善相關檢查后行冠狀動脈造影，根據Gensini評分系統對每支血管狹窄程度進行定量分析：0分為無異常、1分為狹窄程度＜25%、以此類推2分（26%～50%）、4分（51%～75%）、8分（76%～90%）、16（91%～99%）、100%（閉塞）為32分，并按照病變部位乘以相應的系數。每例患者最終評分為各分支評分之和。

3 統計學處理 采用SPSS15.0統計軟件進行統計學分析，計量資料采用±s表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，相關分析采用單因素直線相關分析法，P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 患者組與對照組比較 患者組血清總膽固醇（TC）及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平明顯高于對照組，患者組外周血內皮祖細胞（EPCs）數量明顯低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01），見表1。

表1 兩組人群基本特征分布

2 不同Gensini評分患者EPCs數量比較 患者組患者中，EPCs數量隨著Gensini評分的增加而升高（P＜0.05，表2、附圖）；Gensini評分與外周血內皮祖細胞（EPCs）數量呈正相關（r＝0.693，t＝28.254，P＜0.01）.

表2 不同Gensini評分患者EPCs數量比較

討 論

早在1999年T.Takahashi就從動物試驗發現：EPCs有維持血管內皮的穩定和參與新生血管形成的作用，因而外周血EPCs的水平可反映出冠狀動脈血管內皮化的程度［2］。相關研究發現，EPCs具有促進血管新生、修復損傷內膜等作用，并可用于組織工程血管的制備，在心血管疾病的預防和治療上具有很好的前景［3］。研究發現，作為機體對心肌缺血和內皮受損的一種代償性反應，在組織的再灌注缺血缺氧性損傷過程中，內皮祖細胞從骨髓中動員至外周血，參與血管的新生和血管內皮的修復［4］。

附圖 流式細胞儀檢測的外周血EPCs散點圖

本研究發現，不穩定性心絞痛患者中，外周血EPCs數量明顯低于對照組，說明冠狀動脈粥樣硬化發生發展的多項因素能影響外周血中EPCs的數量。研究顯示，心血管危險因素中的高血壓LDL、超酸C反應蛋白（hsCRP）等均可使外周血EPCs的數量減少［5］。此外，由于EPCs參與內皮損傷后的修復，持續的內皮損傷和內皮功能障礙可導致EPCs過量消耗［6］。

此外，本研究還發現，不穩定性心絞痛患者中，冠狀動脈狹窄程度較嚴重的患者外周血EPCs數量高于狹窄程度較低的患者。國外研究發現［7］，心絞痛發作時，循環中EPCs的含量增加，提示冠狀動脈的急性缺血及內皮損傷是EPCs從骨髓動員入血的一個確切的刺激因素。不穩定性心絞痛的患者因其冠脈斑塊不穩定而易導致心肌缺血加重，可能會存在有EPCs動員入血，通過增加外周血EPCs的含量，促進血管新生和血管內皮修復從而達到改善心肌缺血再灌注損傷的目的。

總之，內皮功能障礙的本質是內皮損傷和修復之間的動態平衡的破壞，EPCs在維持心血管系統穩定狀態中起著重要作用，甚至可以將EPCs池作為心血管系統是否健康的一面鏡子。本研究通過觀察不穩定性心絞痛患者的外周血EPCs水平，從而明確冠脈病變的程度與外周血EPCs水平相關，有助于了解冠心病不穩定性心絞痛的冠脈病變情況。同時，進一步分析不穩定性心絞痛患者在急性冠脈缺血時出現的內皮祖細胞動員情況，可為內皮祖細胞在急性冠脈綜合征時的移植提供理論依據。

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